Элективные и дифференциально диагностические среды. Медицинская энциклопедия - дифференциально-диагностические среды. Пассивный транспорт идет

Функции ЦПМ.

1. защитная.

2. локализация ферментов ЦПЭ.

12. Бактериальный нуклеоид содержит:

2. полиамины.

13. У бактерий есть:

1. одна хромосома.

2. две хромосомы.

14. Бактериальная хромосома:

1. кольцевая.

2. фиксированная к ЦПМ.

15. Спорообразование у бактерий:

1. происходит во внешней среде.

2. служит для размножения.

16. Споры:

1. окрашиваются по Граму.

17. Значение капсулы:

1. защитное.

2. формообразующие.

18. Капсулы:

1. окрашиваются по Граму.

2. видны при окраске по Граму.

19. Капсулы защищают бактерии от:

1. антител

2. фагоцитоза.

20. Жгутики:

1. есть у всех бактерии.

2. всегда располагаются по все поверхности.

21. Жгутики состоят из:

1. белков.

2. углеводов.

22. Жгутики:

1. окрашиваются по Граму.

2. окрашиваются по Бури Гинсу.

23. Подвижность бактерий изучают:

1. посевом в полужидкий агар.

2. посевом на МПА.

24. Реснички(пили):

1. есть у всех бактерий.

2. функционально различны

25. Изучение совокупности большого числа признаков бактерий необходимо для:

1. геносистематики.

2. нумерической таксономии.

26. Конечная таксономическая еденица в бактериологии :

27. Основные морфологические формы бактерий:

2. извитые.

28. Компоненты ЛПС бактерии:

1. липид А.

2. полисахарид.

29. В состав пептидогликана входят:

1. тейхоевые кислоты.

2. N- ацетилглюкозамин и M- ацетилмурановая кислота.

30. Тинкториальные свойства бактерий характеризуют:

1. устойчивость во внешней среде.

2. чувствительность к фагам.

Сложные методы окраски..

1. окраска по Уилю-Нельсену.

2. окраска по Нейссеру.

Методы микроскопии для изучения строения внутренних структур бактериальных клетку.

1. фазово-контрастная.

2. электронная

33. Нуклеоид бактерии:

1. связан с ЛПС.

2. не имеет ядерной мембраны.

34. Для окраски спор у бактерий используют:

1. окраску по Бури- Гинсу.

2. окраска по Клейну.

35. Некультивируемые формы бактерий выявляют с помощью питательной среды:

36. Метаболизм бактерий:

1. не отличается от метаболизма жив. клеток.

2. более интенсивнее чем метаболизм жив. клеток.

37. Аэробный распад белка обозначается термином:

1. брожение.

2. тление.

38. Анаэробный распад белка обозначается термином:

1.окисление.

2. гниение.

39. СО 2 в качестве единственного источника углевода используют:

1. автотрофы.

2. паратрофы.

40. Органические источники углеводов используют:

1. гетеротрофы

2. автотрофы

41. Неорганические источники углеводов используют:

1. метатрофы.

2. ауксотрофы.

42. Зависимость бактерии от того или иного субстрата обозначается термином:

1. прототрофность.

2. гетеротрофность

43. Размножение бактерии происходит:

1. почкование.

2. осмосом.

44. Активный транспорт идет:

1. по градиенту концентрации.

45. Пассивный транспорт идет:

1. по градиенту концентрации.

2. против градиента концентрации.

46. ЦПЭ у бактерии локализована в:

1. клеточной стенке.

47. Простая питательная среда:

1. сахарный бульон.

48. Сложная питательная среда:

1. сахарный бульон.

49. Элективные питательные среды позволяют:

1. дифференцировать одни виды бактерии от других.

2. культивировать бактерии одного вида.

50. Дифференциально - диагностические среды позволяют:

1. культивировать бактерии со сложными питательными потребностями.

2. отличать один вид бактерии от других.

51. Требование, предъявляемое к питательным средам:

1. стерильность.

2. питательность.

52. Определение сахаролитической активности производят при посеве на:

2. среду Пешкова.

53. Простые питательные среды стерилизуют в:

1. термостате.

2. печи Пастера.

54. Среды с углеводами стерилизуют:

1. в печи Пастера.

2. в автоклаве при 0.5 атм.

55. Лабораторную посуду стерилизуют в:

1. термостате.

2. печи Пастера.

56. Оптимальная рН питательных сред для большинства патогенных бактерии:

Механизмы транспорта веществ в бактериальную клетку, которые проходят с затратой энергии.

1. пассивная диффузия.

2. активный транспорт.

Среды, применяемые для избирательного выделения чистой культуры бактерии

определенного вида из материалов, содержащих разнообразную микрофлору:

1. основные

2. дифференциально – диагностические.

Дифференциально- диагностические среды.

1. среда Гисса

60. Методы выделения чистых культур бактерий:

1. посев штрихом.

2. посев штрихом с обжигом петли.

61. Культуральные свойства бактерий:

1. внешний вид бактерий.

2. отношение к условиям культивирования.

62. Для определения протеолитической активности бактерии проводят следующие тесты:

1. на разжижение желатина.

2. на ферментацию глюкозы.

63. Этапы бактериологического исследования:

1. посев для выделения чистой культуры бактерий.

2. накопление чистой культуры бактерий.

64. Для определения вида бактерий необходимо изучение:

1. морфологических свойств

2. культуральных свойств.

65. Биохимические свойства бактерий- это:

1. способность бактерий расщеплять сложные питательные вещества.

2. способность расщеплять на синтетических питательных средах.

66. В состав нуклеоида входит:

2. полиамины.

67. Функцию регуляторных белков у бактерий выполняют:

1. гистоны.

2. полиамины.

68. Бактерий содержат:

1. гаплоидный набор хромосом.

2. диплоидный набор хромосом.

69. Бактериальная хромосома:

1. кольцевая.

2. свободно лежащая.

70. IS- последовательности:

1. обладают автономной репликацией.

2. несут структурные гены.

71. Подвижные генетические элементы:

1. IS- последовательности.

2. транспозоны.

72. Транспозоны:

73. Генетический материал бактерий содержится в:

1. хромосоме.

2. плазмидах.

74. Плазмиды содержат:

1. структурный ген

2. ген репликации

75. В бактериальной клетке:

2. несколько копий одной плазмиды.

76. Клетки сохраняют жизнеспособность при утрате:

1. плазмиды

2. хромосомы.

77. Клетки погибают при утрате:

1. плазмиды.

2. хромосомы.

78. Генотипическое выражение пола у бактерий связано с наличием:

1. Col- плазмиды.

2. Hey- плазмиды.

79. Штаммы с высокой донорской активностью называются:

1. Hfr- штаммы.

2. R- штаммы.

80. Модификации:

1. затрагивают генотип.

2. затрагивают фенотип.

81. Модификация – это проявление:

1. генотипической изменчивости.

2. фенотипической изменчивости.

82. Мутации:

1. затрагивают генотип.

2. затрагивают фенотип.

83. Генотипическая изменчивость:

1. мутации

2. модификации.

84. Механизм рекомбинации у бактерий:

1. транскрипция.

2. трансформация.

85. При рекомбинациях у бактерий:

1. образуется мерозигота.

2. меняется количество генетического материала.

86. Передача генетической информации умеренным фагом – это:

1. трансдукция.

2. трансформация

87. Популяция бактерий по тому или иному признаку:

1. гомогенная.

2. гетерогенная.

88. Изменение генотипа у бактерий может происходить:

1. по вертикали.

2. по горизонтали.

89. Генетические методы, используемые в диагностике:

1. ДНК- зондирование.

90. Цель ПУР диагностики:

1. выявление нуклеотидных последовательностей, кодирующих видовую принадлежности бактерий.

2. выявление нуклеотидных последовательностей, кодирующих основной фактор вирулентности данного вида микроорганизма.

91. Фаги – это:

1. вирусы бактерий.

2. токсины бактерий.

92. Свойства фага:

1. инфекционность.

2. фильтруемость.

93. Фаги содержат:

1. ДНК и РНК.

2. ДНК или РНК.

94. Для фагов характерен:

1. дизъюнктивный способ репродукций.

2. размножаются простым поперечным делением.

95. Фаги бывают:

1. умеренные.

2. вируальные.

96. Взаимодействие фага с бактериальной клеткой может происходить по типу:

1. продуктивной инфекции.

2. абортивной инфекции.

97. Лизогенные клетки отличаются от нелизогенных по:

1. устойчивости к УФ излучению.

2. чувствительность к гомологичному фагу.

98. Методы выделения фагов:

1. фильтрование через бактериальные фильтры.

2. посев на питательные среды.

99. Фаги можно обнаружить по:

1. задержке роста индикаторной культуры.

2. образованию негативных колоний.

100. Фани применяют для:

1. лечения.

2. профилактики.

101. При продуктивной фаговой инфекций:

1. бактериальная клетка погибает.

2. фаг размножается.

102. Вирулентные фаги вызывают:

1. лизис клетки.

2. лизогенную конверсию.

103. Умеренные фаги вызывают :

1. лизис клетки.

2. лизогенизацию бактерий.

104. Лизогенные бактерий содержат:

1. профаг.

2. S – элементы.

105. Профаг – это:

1. интегрированное состояние фага.

2. свободное состояние фага.

106. Фаги по специфичности делят на:

1. видовые.

2. вирулентные.

107. Для фаготипирования бактерии используют фаги:

1. поливалентные.

2. видовые.

108. Фаготипирование проводят с целью:

1. эпидемиологического анализа.

2. подбора фагов для лечения.

109. Видовые фаги используются:

1. в ходе бактериологического исследования.

2. при постановке ПЦР.

110. Практическое использование фагов основано на:

1. их специфичности.

2. способности вызывать лизис бактерии.

111. Наличие фага в фильтрате определяют путем:

1. нанесение на газон индикаторной культуры.

2. посев на питательную среду.

112. Высокой бактериальной обсеменностью характеризуется:

1. толстый кишечник

2. тонки кишечник.

113 На видовой состав микрофлоры индивидуума влияет:

1. возраст.

2. экологическая ниша.

114. Функции нормальной микрофлоры:

1. витаминообразующая.

2. гормонообразующая.

115. Дисбактериоз- это:

1. качественное изменение нормальной микрофлоры.

2. количественное изменение нормальной микрофлоры.

116. Причины дисбактериоза:

1. лучевая болезнь.

2. тяжелые инфекции.

117.Показатели дисбактериоза:

1. появление патогенных бактерии.

2. появление или увеличение числа редко встречающихся в норме микроорганизмов.

118.Методы лабораторной диагностики дисбактериоза:

1. количественный бактериологический

2. серологический.

119.Принципы коррекции дисбактериоза:

1. симптоматическая терапия.

2. антибиотики.

120.Препараты для коррекции дисбактериоза кишечника:

1. бификол.

2. бифидумбактерии.

ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНО-ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ СРЕДЫ

дифференциа́льно-диагности́ческие сре́ды , специальные питательные среды, используемые для идентификации микроорганизмов, обладающих избирательной биохимической активностью по отношению к определённым веществам. В процессе развития микробы с помощью ферментов расщепляют входящие в состав среды определённые вещества, что устанавливают по изменению среды.

Ряд патогенных микроорганизмов разлагают углеводы, многоатомные спирты с образованием кислот и газов (углекислоты, водорода, метана), что указывает на принадлежность их к определённой группе или виду бактерий. Для установления этих свойств готовят жидкие или полужидкие Д.-д. с. с глюкозой, лактозой, сахарозой, маннозой и другими углеводами, многоатомными спиртами (пёстрый ряд), с индикаторами (Андраде, Гисса), среды с молоком. Ферментативную способность микробов определяют по появлению газа или изменению цвета индикатора. Интенсивность кислотообразования из глюкозы определяют на среде Кларка, образования ацетилметилкарбонала — с помощью реакции Фогеса—Проскауэра, амилолитическую способность микробов — на крахмальном агаре. Протеолитические свойства микробов определяют на средах, не содержащих глюкозу и глицерин, — мясо-пептонном желатине, свернувшейся лошадиной сыворотке, молочном агаре. Мясо-пептонный желатин засевают путём укола до дна пробирки, инкубируют при t 20—22°C, а затем определяют степень разжижения желатина. Гемолитическую способность микробов устанавливают путём высева на кровяной агар или бульон с кровью. Для определения редуцирующей активности микробов применяют Д.-д. с. с красителями ( , лакмус, индидокармин, тионин и др.). По мере роста микробов происходит полное или частичное обесцвечивание или изменение цвета красителя. Используют также среды с нитратами, в которых под воздействием ферментов определенных микробов нитраты восстанавливаются в нитриты и далее — в аммиак или свободный азот.

Ветеринарный энциклопедический словарь. - М.: "Советская Энциклопедия" . Главный редактор В.П. Шишков . 1981 .

Смотреть что такое "ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНО-ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ СРЕДЫ" в других словарях:

Дифференциально-диагностические среды - специальные смеси питательных веществ (см. Питательные среды), на которых выращивают микроорганизмы для определения их видовой принадлежности. К Д. д. с. относятся белковые среды, применяемые для определения гемолитической и… …

Среды питательные, субстраты, используемые для культивирования в искусственных условиях микроорганизмов и культур тканей. В микробиологической практике С. п. широко применяют для постановки лабораторного диагноза инфекционных заболеваний, для… … Ветеринарный энциклопедический словарь

Питательные среды бактериологические - жидкие, полужидкие или плотные субстраты, используемые для выращивания микроорганизмов в лабораторных или производственных условиях. Используют для выделения чистых к р бактерий, грибов и простейших из биогенных или абиогенных объектов, для… … Словарь микробиологии

Питательные среды - жидкие или плотные среды, применяемые для выращивания в лабораторных или промышленных условиях бактерий, дрожжей, микроскопических грибов, водорослей, простейших, вирусов и культур растительных или животных клеток. Синтетические П. с.… … Большая советская энциклопедия

Гисса среды - (Ph. Н. Hiss, 1868 1913, амер. бактериолог; син.: пестрый ряд, цветной ряд) жидкие или полужидкие дифференциально диагностические питательные среды, предназначенные для определения и дифференциации бактерий по их способности разлагать различные… … Большой медицинский словарь

Мак-Конки среды - (А. Ма Conkey, 1861 1931, англ. бактериолог) селективные дифференциально диагностические питательные среды для выделения бактерий сем. Enterobacteriaceae, напр. кишечной палочки, содержащие таурохолевокислый натрий и лактозу … Большой медицинский словарь

Пита́тельные сре́ды - субстраты, состоящие из компонентов, обеспечивающих необходимые условия для культивирования микроорганизмов или накопления продуктов их жизнедеятельности. Питательные среды различаются по назначению, консистенции и составу. По назначению их… … Медицинская энциклопедия

Микробиологи́ческая диагно́стика - основана на идентификации возбудителя или выявлении иммунного ответа организма больного на него. Начальным этапом М.д. является отбор материала и транспортировка проб в лабораторию. Вид материала для исследования определяется особенностями… … Медицинская энциклопедия

Медицина - I Медицина Медицина система научных знаний и практической деятельности, целями которой являются укрепление и сохранение здоровья, продление жизни людей, предупреждение и лечение болезней человека. Для выполнения этих задач М. изучает строение и… … Медицинская энциклопедия

Анаэробные организмы - Аэробные и анаэробные бактерии предварительно идентифицируются в жидкой питательной среде по градиенту концентрации O2: 1. Облигатные аэробные (нуждающиеся в кислороде) бактерии в основном собираются в верхней части пробирки, чтобы поглощать… … Википедия

Питательной средой в микробиологии называют среды, содер­жащие различные соединения сложного или простого состава, которые применяются для размножения бактерий или других микроорганизмов в лабораторных или промышленных условиях.

Питательные среды готовят из продуктов животного или рас­тительного происхождения. Большое значение имеет наличие в питательной среде ростовых факторов, которые катализируют метаболические процессы микробной клетки (витамины груп­пы В, никотиновая кислота и др.).

Искусственные среды готовят по определенным рецептам из различных настоев или отваров животного или растительного про­исхождения с добавлением неорганических солей, угле­водов и азотистых веществ.

В бактериологической практике чаще всего используют сухие питательные среды, которые получают на основе достижений современной биотехнологии. Для их приготовления используют экономически рентабельное непищевое сырье: утратившие срок годности кровезаменители (гидролизин-кислотный гидролизат крови животных, аминопептид - ферментативный гидролизат крови; продукты биотехнологии (кормовые дрожжи, кормовой лизин, виноградная мука, белколизин). Сухие питательные среды могут храниться в течение длительного времени, удобны при транспортировке и имеют относительно стандартный состав.

По консистенции питательные среды могут быть жид­кими, полужидкими, плотными. Плотные среды готовят путем до­бавления к жидкой среде 1,5-2% агара, полужидкие - 0,3- 0,7 % агара. Агар представляет собой продукт переработки осо­бого вида морских водорослей, он плавится при температуре 80-86 °С, затвердевает при температуре около 40 °С и в застыв­шем состоянии придает среде плотность. В некоторых случаях для получения плотных питательных сред используют желатин (10-15%). Ряд естественных питательных сред (свернутая сы­воротка крови, свернутый яичный белок) сами по себе являются плотными.

По целевому назначению среды подразделяют на основные, элективные и дифференци­ально-диагностические.

К основным относятся среды, применяемые для выращивания многих бактерий. Это триптические гидролизаты мясных, рыбных продуктов, крови животных или казеина, из которых готовят жидкую среду - питательный бульон и плотную - пита­тельный агар. Такие среды служат основой для приготов­ления сложных питательных сред - сахарных, кровяных и др., удовлетворяющих пищевые потребности патогенных бак­терий.

Элективные питательные среды предназначены для избира­тельного выделения и накопления микроорганизмов определен­ного вида (или определенной группы) из материалов, содержа­щих разнообразную постороннюю микрофлору. При создании элективных питательных сред исходят из биологических особен­ностей, которые отличают данные микроорганизмы от большин­ства других. Например, избирательный рост стафилококков на­блюдается при повышенной концентрации хлорида натрия, хо­лерного вибриона - в щелочной среде и т. д.

Дифференциально-диагностические питательные среды при­меняются для разграничения отдельных видов (или групп) мик­роорганизмов. Принцип построения этих сред основан на том, что разные виды бактерий различаются между собой по биохи­мической активности вследствие неодинакового набора фермен­тов.

Особую группу составляют синтетические и полусинтетиче­ские питательные среды . В состав синтетических сред входят химически чистые вещества: аминокислоты, минеральные соли, углеводы, витамины. В полусинтетические среды дополнительно включают пептон, дрожжевой экстракт и другие питательные вещества. Эти среды чаще всего применяют в научно-исследова­тельской работе и в микробиологической промышленности при получении антибиотиков, вакцин и других препаратов.

В последние годы в целях экономии питательных сред и уско­ренной идентификации некоторых микроорганизмов (энтеробактерии, стафилококки, стрептококки и др.) применяются так на­зываемые микротест-системы(МТС). Они представляют собой полистироловые пластины с лунками, в которых содержатся сте­рильные дифференциально-диагностические среды. Стерилизацию МТС проводят УФ-облучением. Микротест-системы особенно удобны при массовых бактериологических исследованиях в практических лабораториях.

Вопрос №9. Принципы и методы выделения чистых культур бакте­рий. Характер роста микроорганизмов на жидких и плотных питательных средах.

Чистой культурой называется популяция бактерий од­ного вида или одной разновидности, выращенная на питательной среде. Многие виды бактерий подразделяют по одному признаку на биологические варианты - биовары . Биовары, различающие­ся по биохимическим свойствам, называют хемоварами , по анти­генным свойствам - сероварами , по чувствительности к фагу - фаговарами . Культуры микроорганизмов одного и того же вида, или биовара, выделенные из различных источников или в разное время из одного и того же источника, называют штаммами , которые обычно обозначаются номерами или какими-либо сим­волами. Чистые культуры бактерий в диагностических бактерио­логических лабораториях получают из изолированных колоний, пересевая их петлей в пробирки с твердыми или, реже, жидкими питательными средами.

Колония представляет собой видимое изолированное скоп­ление особей одного вида микроорганизмов, образующееся в результате размножения одной бактериальной клетки на плотной питательной среде (на поверхности или в глубине ее). Колонии бактерий разных видов отличаются друг от друга по своей мор­фологии, цвету и другим признакам.

Чистую культуру бактерий получают для проведения диагно­стических исследований - идентификации, которая достигается путем определения морфологических, культуральных, биохимиче­ских и других признаков микроорганизма.

Морфологические и тинкториальные признаки бактерий изучают при микроскопическом исследовании мазков, окрашенных разными методами, и нативных препаратов.

Культуральные свойства характеризуются питатель­ными потребностями, условиями и типом роста бактерий на плот­ных и жидких питательных средах. Они устанавливаются по мор­фологии колоний и особенностям роста культуры.

Биохимические признаки бактерий определяются на­бором конститутивных и индуцибельных ферментов, присущих определенному роду, виду, варианту. В бактериологической прак­тике таксономическое значение имеют чаще всего сахаролитические и протеолитические ферменты бактерий, которые определя­ют на дифференциально-диагностических средах.

При идентификации бактерий до рода и вида обращают вни­мание на пигменты, окрашивающие колонии и культуральную среду в разнообразные цвета. Например, красный пигмент обра­зуют Serratia marcescens, золотистый пигмент - Staphylococcus aureus (золотистый стафилококк), сине-зеленый пигмент - Pseu-domonas aeruginosa.

Для установления биовара (хемовара, серовара, фаготипа) проводят дополнительные исследования по выялвениб соответствующего маркера – определению фермента, антигена, чувствительности к Фанам.

Методы выделения чистых культур бакте­рий.

Универсальным инструментом для производства посевов явля­ется бактериальная петля. Кроме нее, для посева уколом при­меняют специальную бактериальную иглу, а для посевов на чашках Петри - металлические или стеклянные шпатели. Для посевов жидких материалов наряду с петлей используют пасте­ровские и градуированные пипетки. Первые предварительно из­готовляют из стерильных легкоплавких стеклянных трубочек, которые вытягивают на пламени в виде капилляров. Конец ка­пилляра сразу же запаивают для сохранения стерильности. У пастеровских и градуированных пипеток широкий конец за­крывают ватой, после чего их помещают в специальные пеналы или обертывают бумагой и стерилизуют.

При пересеве бактериальной культуры берут пробирку в левую руку, а правой, обхватив ватную пробку IV и V пальцами, вынимают ее, пронося над пламенем горелки. Удерживая дру­гими пальцами той же руки петлю, набирают ею посевной ма­териал, после чего закрывают пробирку пробкой. Затем в пробирку со скошенным агаром вносят петлю с посевным материалом, опуская ее до конденсата в нижней ча­сти среды, и зигзагообразным движением распределяют мате риал по скошенной поверхности агара. Вынув петлю, обжигают край пробирки и закрывают ее пробкой. Петлю стерилизуют в пламени горелки и ставят в штатив. Пробирки с посевами над г писывают, указывая дату посева и характер посевного мате­риала (номер исследования или название культуры).

Посевы «газоном» производят шпателем на питательный агар в чашке Петри. Для этого, приоткрыв левой рукой крышку, пет­лей или пипеткой наносят посевной материал на поверхность питательного агара. Затем проводят шпатель через пламя горел­ки, остужают его о внутреннюю сторону крышки и растирают материал по всей поверхности среды. После инкубации посева появляется равномерный сплошной рост бактерий.

Характер роста микроорганизмов на жидких питательных средах:

Бактерии, засеянные в определенный, но не изменяющийся объем жидкой питательной среды, размножаясь, потребляют питательные элементы, что в дальнейшем приводит к истощению питательной среды и прекращению роста бактерий. Культивирование бактерий в такой системе называют периодическим, а культуру – периодической. Если же условия культивирования поддерживаются путем непрерывной подачи свежей питательной среды и оттока такого же объема культуральной жидкости, то такое культивирование называется непрерывным, а культура – непрерывной.

При выращивании бактерий на жидкой питательной среде наблюдается придонный, диффузной или поверхностный (в виде пленки) рост культуры.

Характер роста микроорганизмов на плотных питательных средах:

Бактерии, растущие на плотных питательных средах, образуют изолированные колонии округлой формы с ровными или неровными краями различной консистенции и цвета, зависящего от пигмента бактерий.

Пигмент, растворимые в воде, диффундируют в питательную среду и окрашивают ее, например синегнойная палочка (Pseudomonas aeruginosa) окрашивает среду в синий цвет. Другая группа пигментов нерастворима в воде, но растворима в органических растворителях. Так, колонии «чудесной палочки» имеют кроваво – красный пигмент, растворимый в спирте. И, наконец, существуют пигменты, нерастворимые ни в воде, ни в органических соединениях.

Вид, форму, цвет и другие особенности колоний на плотной питательной среде (культуральные свойства) учитывают при идентификации бактерий, а также отборе колоний для получения чистых культур.

В промышленных условиях при получении биомассы микроорганизмов с целью приготовления антибиотиков, вакцин, диагностических препаратов и эубиотиков культивирование в основном осуществляют в ферментерах при строгом соблюдении оптимальных параметров для роста и размножения культур.

Вопрос №10. Способы получения энергии бактериями (дыхание, броже­ние). Типы дыхания бактерий.

Дыхание, или биологическое окисление , основано на окисли­тельно-восстановительных реакциях, идущих с образованием АТФ-универсального аккумулятора химической энергии. Энергия необходима микробной клетке для ее жизнедеятельности. При дыхании происходят процессы окисления и восстановления: окисление - отдача донорами (молекулами или атомами) во­дорода или электронов; восстановление - присоединение водо­рода или электронов к акцептору. Акцептором водорода или электронов может быть молекулярный кислород (такое дыхание называется аэробным) или нитрат, сульфат, фумарат (такое дыхание называется анаэробным - нитратным, сульфатным, фумаратным).

Анаэробиоз (от греч. аег - воздух + bios - жизнь) - жизнедеятельность, протекающая при отсутствии сво­бодного кислорода. Если донорами и акцепторами водорода яв­ляются органические соединения, то такой процесс называется брожением . При брожении происходит ферментативное расщепление органических соединений, преимущественно углеводов, в анаэробных условиях. С учетом конечного продукта расщепления углеводов различают спиртовое, молочнокислое, уксуснокислое и другие виды брожения.

По отношению к молекулярному кислороду бактерии можно разделить на три основные группы: облигатные, т.е. обязатель­ные, аэробы, облигатные анаэробы и факультативные анаэробы.

Типы дыхания бактерий:

· Строгие аэробы. Функционируют в присутствие О 2

· Микроаэрофилы. Нуждаются в О 2 в меньшей степени.

· Факультативные анаэробы. Живут в присутствии О 2 и без негою могут дышать кислородными носителями: сульфаты, карбонаты.

· Облигатные анаэробы. Бактерии, которые бродят. Для них О 2 ядовит.

· Культура – микроорганизмы, выросшие на питательной среде.

· Колония – скопление микробных клеток.

· Чистая культура – микробы одного вида.

· Клон – генетически однородная популяция м/о, выделенная из одной микробной клетки при ее прямой изоляции.

· Штамм – чистая культура микробов выделенная из определенного источника в определенное время.

Для выделения чистых культур применяют оптимальные питательные среды с фиксированным рН. Большинство б! способны расти на разл пит средах, за исключением хламидий и риккетсий, к/е не растут вне ##.

ДДС – используются для изучения и идентификации отдельных групп, видов, типов б!! В их основе различные органические и неорг в-ва, при их расщеплении происходит сдвиг рН в кислую (углеводы, спирты, липиды) или щелочную (белки, мочевина…) сторону. В эти среды часто вносят разл индикаторы, позволяющих визуально оценить изменение рН. Напр, сдвиг в КИСЛУЮ сторону вызывает покраснение индикатора Андреде (в основе фуксин) или пожелтение при использовании бромтимолового синего , а при сдвиге в ЩЕЛОЧНУЮ сторону они не меняют окраски.

ДДС Эндо, Левина, Плоскирева прм для диагностики кишечных заболеваний (шигеллёзов, сальмонеллёзов). Готовятся они в чашках Петри, в основе МПА + лактоза (ферментируется только E.coli, но не патогенными мкÒ) + индикатор.

ЭНДО . Индикатор по типу индикатора Андреде, лучше держать в тёмном месте. Растущая колония E.coli вырабатывает конечные продукты → окраска красная, часто с металлическим блеском; Shigella и Salmonella → бесцветные колонии.

ЛЕВИНА . Индикатор – эозин-метилениовая синь, при рН³7 имеет цыет эозина (розовый), в кислой среде – восстанавливается метиленовый синий (цвет тёмно-синий). Колнии E.coli → окраска тёмно-синяя, Shigella и Salmonella → бесцветные колонии (под цвет среды).

ПЛОСКИРЕВА . Индикатор – нейтральный красный; рН=7 бесцветный (патогенный б!), рН<7 розово-красный (E.coli). И ещё присутствуют 2 добавки: бриллиантовый зелёный и соли жёлчных кислот. На т/й среде угнетается рост воздушной мкФ, к тому же на ней не растут многие (но не все) штаммы E.coli.

РЕССЕЛЯ . Эта среда комбинированная, готовится в пробирке, половина –скошенная часть, другая – столбик. В среду входят МПА (среда полужидкая), лактоза (1%), глюкоза (0,1%), индикаторы (розоловая к-та и водно-голубой ). При рН=7 среда окрашивается в розовый цвет (за счёт розоловой к-ты), рН<7 – в синий. Иногда добавляют бром-тимоловый синий , рН=7 – сине-зеленовытый, рН<7 – бесцветный. Рассев производят по поверхности скошенной части и уколом в глубину столбика. E.coli → среда обсцвечивается и появляются пузыри газа, Shigella и Salmonella → цв изм-ся только в столбике, а скошенная часть останется без изменений, т.к. наилучшие условия для ферментации глюкозы – анаэробные, наиболее активно она будет распадаться в столбике, образуя кисл продукты, газа не будет. У Salmonella paratyphi → то же плюс газ.

Также с Д-Д целью используют другие ферментативные свойства. Напр, «пёстрый» (цветной) РЯД ГИССА – пептонная вода и различные углеводы + индикатор (Андреде = кислый фуксин + щёлочь) и стеклянный поплавок для улавливания газа. Из углеводов наиболее часто применяют МС (глюкоза, ксилоза, арабиноза, фруктоза, манноза, галактоза), ДС (сахароза, мальтоза, лактоза), ПС (крахмал, гликоген, инулин, декстрин) и гликозиды. Среды засевают, и если мкÒ имеет соответствующий фермент, то образуются кислоты, они восстанавливают фуксин и среда приобретает красный цвет. Если при окислении углеводов выделяется СО 2 , то он скапливается в поплавке. Белки расщепляются протеолитическими ферментами до АК, а они в свою очередь распадаются до простых соед-й (СО 2 , NН 3 и др). На практике для определения этих ферментов опред-ют индол (+щавелевая кислота → краснеет) и сероводород (H 2 S) (+ уксусно-кислый Pb → чернеет).

Л актоза Г люкоза М аннит М альтоза С ахароза И ндол H 2 S

E.coli К+Г+ К+Г+ К+Г+ К+Г+ К–Г– + –

S. typhi К–Г– К+Г– К+Г– К+Г– К–Г– – +

S. paratyphi А К–Г– К+Г+ К+Г+ К+Г+ К–Г– – –

S. paratyphi В К–Г– К+Г+ К+Г+ К+Г+ К–Г– – +

Также определяют наличие ПЛАЗМОКОАГУЛАЗЫ (по свёртыванию плазмы крови), ГИАЛУРОНИДАЗЫ (по р-рению сгустка гиалуроновой кислоты в пробирке в жидкой среде), ЛЕЦИТИНАЗЫ (лецитин входит в состав # стенок, при добавлении в среду и его разрушении – ЖСА – скапливаются продукты обмена Þ помутнение; этот фермент есть у Staphylococcus aureus, а у St. epidermidis – нет).

Витаминов в точно установленных дозировках. В качестве источников азота в них используются аминокислоты. Достоинство этих сред в том, что они имеют постоянный состав, по ним можно определить потребности микробов в тех или иных питательных веществах.

Плотные питательные среды готовят из жидких с добавлением уплотнителя. В качестве уплотнителя обычно применяют агар-агар. Агар-агар - продукт, получаемый из морских водорослей, представляет собой желтоватый порошок или пластинки, содержит высокомолекулярные полисахариды , не расщепляется большинством микроорганизмов, не разрушается при автоклавировании, питательную ценность сред не изменяет, не подавляет рост микробов. Для иммунологических и бактериологических полей используется вымороженный, осветленный агар, который при кипячении или автоклавировании смеси порошка с водой расплавляется при температуре 85-100°С, а при охлаждении до 45-48°С образует гель.

Для приготовления, плотных питательных сред агар-агар добавляют в концентрации от 1,5 до 3%.

Простые среды.

Мясо-пептонный бульон (МПБ) является белковой основой всех сред.

Существует несколько способов приготовления МПБ:

а) на мясной воде с добавлением готового пептона - это так называемый мясо-пептонный бульон;

б) на переварах продуктов гидролиза исходного сырья при помощи ферментов (трипсина - бульон Хоттингера, пепсина - бульон Мартена).

Они удобны при транспортировке, могут длительно храниться, избавляют лаборатории от громадного процесса приготовления сред, приближают к разрешению вопроса о стандартизации сред. Медицинская промышлен-ность производит сухие среды Эндо, Левина, Плоскирева, висмутсульфит агар, питательный агар, углеводы с индикатором ВР и другие.

Термостаты

Для культивирования микроорганизмов используют термостаты.

Термостат - это аппарат, в котором поддерживают постоянную температуру. Прибор состоит из нагревателя, камеры, двойных стенок, между которыми циркулирует воздух или вода. Температура регулируется тер-морегулятором. Оптимальная температура для размножения большинства микроорганизмов 37°С.

Методика приготовления пластинчатого агара

МПА расплавляют на водяной бане, затем остужают до 50-55°С. Горлышко флакона обжигают в пламени спиртовки, открывают чашки Петри так, чтобы вошло горлышко флаконы, не прикасаясь к краям чашки, выливают 10-15 мл МПА, закрыв крышку, покачивают чашку, чтобы среда равномерно распределилась, оставляют на горизонтальной поверхности до застывания. После подсушивания чашки с пластинчатым агаром хранят на холоде.

Посев петлей

Стерильной остуженной петлей берут каплю материала, левой рукой приоткрывают один край чашки, вносят петлю внутрь и у противоположного края делают петлей несколько штрихов на одном месте, затем петлю отрывают и засевают материал параллельными штрихами от одного края чашки к другому с интервалом 5-6 мм. В начале посева, когда микробов на петле будет много, они дадут сливной рост, но с каждым штрихом микробов на петле остается все меньше, и они будут оставаться одиночными и давать изолированные колонии.

Посев по методу Дригальского

Этот метод используется при посеве материала, обильно обсемененного микрофлорой (гной, испражнения, мокрота). Для посева по методу Дригальского берут шпатель и несколько чашек (3-4). Шпатель - это инструмент, изготовленный из металлической проволоки или стеклянного дрота, загнутого в виде треугольника или Г-образно. Материал петлей или пипеткой вносят в первую чашку и равномерно распределяют шпателем по поверхности среды, этим же шпателем, не прожигая его, втирают материал в питательную среду во второй чашке, а затем - в третьей. При таком посеве в первой чашке будет сливной рост, а в последующих чашках вырастают изолированные колонии.

Выделение чистой культуры по Щукевичу

Для посева берут свежеприготовленную питательную среду с конденсатом. Исследуемый материал забирают петлей и вносят его осторожно, соблюдая правила асептики, не касаясь среды и стенок, в конденсационную воду. Бактерии с высокой подвижностью «выползают» на влажную поверхность скошенного агара.

В результате самостоятельной работы студент должен знать:

1. Классификацию, морфологию грибов, их методы изучения.

2. Классификацию и морфологию актиномицетов.

3. Правила противоэпидемических режимов и техники безопасности.

Уметь:

1. Дифференцировать микроорганизмы при микроскопии.

2. Микроскопировать окрашенные препараты.

3. Обеззараживать материал, обрабатывать руки дезинфирующими препаратами.

4. Приготавливать препараты из чистых культур.