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Les réactions sérologiques sont désignées en fonction des phénomènes accompagnant la formation d'un complexe antigène-anticorps lors de l'interaction de composants aux propriétés différentes. Il y a des réactions d'agglutination, de précipitation et de lyse.

Test d'agglutination (RA)

La réaction d'agglutination (RA) est basée sur l'utilisation d'un antigène corpusculaire (suspension de bactéries, érythrocytes sensibilisés, particules de latex, etc.), interagissant avec des anticorps spécifiques, à la suite de quoi précipite le complexe antigène-anticorps résultant. Cette réaction est largement utilisée dans la pratique de laboratoire pour le diagnostic sérologique des infections bactériennes et pour l'identification de micro-organismes isolés.

La PR est utilisée pour diagnostiquer de nombreuses maladies infectieuses: brucellose (réactions de Wright et Heddleson), tularémie, leptospirose (RAL - réaction d'agglutination et de lyse de la leptospire), listériose, typhus (PAP - réaction d'agglutination de la rickettsie), shigellose, pseudo-infections, et autres.

Réaction d'agglutination indirecte ou passive (RIGA ou RPGA).

Pour la mise en scène de cette réaction, on utilise des érythrocytes d'animaux (bélier, singe, cobayes, certains oiseaux) sensibilisés avec des anticorps ou un antigène, ce qui est obtenu en incubant une suspension d'érythrocytes et une solution d'antigène ou de sérum immun.

Les diagnostics obtenus à partir d'érythrocytes sensibilisés aux antigènes sont appelés diagnostic antigénique des érythrocytes... Ils sont destinés à la détermination des anticorps dans des dilutions en série de sérum sanguin, par exemple, le diagnostic de la shigellose érythrocytaire, le diagnostic O de la salmonelle érythrocytaire.

En conséquence, les diagnostics basés sur les érythrocytes sensibilisés avec des immunoglobulines spécifiques sont appelés antique (immunoglobuline) diagnosticset ils servent à détecter les antigènes dans divers matériaux, par exemple, l'immunoglobuline érythrocytaire diphtheria diagnosticum pour RIGA, qui est utilisé pour détecter l'exotoxine diphtérique des corynébactéries dans un milieu nutritif liquide lors de l'inoculation de matériel provenant du nez et de l'oropharynx dans celui-ci.

La réaction d'hémagglutination permet de diagnostiquer à la fois les infections bactériennes (fièvre typhoïde, paratyphoïde, dysenterie, brucellose, peste, choléra, etc.) et virales (grippe, infections à adénovirus, rougeole, etc.). RIGA surpasse la PR en sensibilité et spécificité.

Réaction d'inhibition de l'hémagglutination (RTGA)

La réaction d'inhibition de l'hémagglutination (RTGA) est utilisée pour titrer les anticorps antiviraux dans le sérum sanguin, ainsi que pour établir le type de cultures virales isolées. Le RTGA peut être utilisé pour diagnostiquer ces infections virales, dont les agents responsables ont des propriétés hémagglutinantes.

Le principe de la méthode est que le sérum contenant des anticorps contre un type spécifique de virus supprime son activité hémagglutinante et les érythrocytes restent non agglutinés.

Réaction d'inhibition (retard) de l'hémagglutination passive (RTPHA).

Il y a trois composants impliqués dans la RTPHA: le sérum immunitaire, l'antigène (matériel d'essai) et les érythrocytes sensibilisés.

Si le matériel de test contient un antigène qui réagit spécifiquement avec les anticorps du sérum immunitaire standard, il les lie et avec l'ajout ultérieur d'érythrocytes sensibilisés avec un antigène homologue au sérum, l'hémagglutination ne se produit pas.

La RTPHA est utilisée pour détecter les antigènes microbiens, pour les quantifier et également pour contrôler la spécificité de la RPHA.

Réaction d'agglutination au latex (LAT)

Les particules de latex sont utilisées comme vecteur d'anticorps (immunoglobulines). RLA est une méthode expresse pour le diagnostic des maladies infectieuses, en tenant compte du temps (jusqu'à 10 minutes) et de la capacité à détecter l'antigène dans un petit volume du matériel d'essai.

Le RLA est utilisé pour indiquer les antigènes de Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae de type b, Neisseria meningitidis dans le liquide céphalo-rachidien, pour identifier les streptocoques du groupe A dans les prélèvements de gorge, pour diagnostiquer la salmonellose, la yersiniose et d'autres maladies. La sensibilité de la méthode est de 1 à 10 ng / ml, soit 10³ -10⁶ cellules bactériennes dans 1 µl.

Réaction de coagglutination (RCoA)

La réaction de coagglutination (RCoA) est basée sur la capacité de la protéine A staphylococcique à se lier à des immunoglobulines spécifiques. RCA - une méthode de diagnostic express - est utilisé pour détecter les antigènes thermostables solubles dans les sécrétions humaines et dans le cadre des complexes immuns circulants (CIC). La détection d'antigènes spécifiques dans la CEC nécessite leur précipitation préalable à partir du sérum sanguin.

Réaction de précipitation

Dans la réaction de précipitation (RP), à la suite de l'interaction des anticorps avec des antigènes solubles hautement dispersés (protéines, polysaccharides), des complexes avec la participation du complément se forment - des précipités. C'est un test sensible utilisé pour détecter et caractériser une grande variété d'antigènes et d'anticorps. L'exemple le plus simple d'un RP de haute qualité est la formation d'une bande de précipitation opaque dans un tube à essai à la limite de la couche d'antigène sur le sérum immun - la réaction de précipitation en anneau. Différents types de RP sont largement utilisés dans les gels semi-liquides d'agar ou d'agarose (méthode de double immunodiffusion, méthode d'immunodiffusion radiale, immunoélectrophorèse).

Réaction de fixation du complément (CBC)

La réaction de fixation du complément (CSC) est basée sur le phénomène de l'hémolyse avec la participation du complément, i.e. est capable de détecter uniquement les anticorps se liant au complément.

RSK est largement utilisé pour le diagnostic de nombreuses infections bactériennes et virales, rickettsioses, chlamydia, mononucléose infectieuse, infections protozoaires, helminthiases. La CSC est une réaction sérologique complexe, dans laquelle deux systèmes sont impliqués: le système étudié (sérum sanguin), représenté par le système antigène - anticorps et complément, et hémolytique (érythrocytes de mouton + sérum hémolytique). Le sérum hémolytique est du sérum sanguin inactivé par chauffage d'un lapin immunisé avec des érythrocytes de mouton. Il contient des anticorps contre les érythrocytes de mouton.

Un résultat RSK positif - l'absence d'hémolyse - est observé si le sérum à tester contient des anticorps homologues à l'antigène. Dans ce cas, le complexe antigène-anticorps formé se lie au complément et, en l'absence de complément libre, l'ajout du système hémolytique ne s'accompagne pas d'hémolyse. En l'absence d'anticorps correspondant à l'antigène dans le sérum, la formation d'un complexe antigène-anticorps ne se produit pas, le complément reste libre et le sérum provoque une hémolyse des érythrocytes, c'est-à-dire la présence d'hémolyse est un résultat négatif de la réaction.

Yushchuk N.D., Vengerov Yu.Ya.

RÉACTION DE L'HÉMAGGLUTINATION INDIRECTE, RNGA
(Test d'hémagglutination indirecte)

Procédé de détection d'antigènes et d'anticorps, basé sur la capacité des érythrocytes, à la surface desquels des antigènes ou des anticorps sont préalablement adsorbés, à s'agglutiner en présence de sérums homologues ou d'antigènes correspondants.

Lorsque des antigènes sont détectés, la réaction est indiquée par une hémagglutination passive inverse - ROPHA (test d'hémagglutination passive inversée), et lorsque des anticorps sont détectés - par hémagglutination passive - RPHA (test d'hémagglutination passive). Le RNGA a trouvé une large application pour la détection de marqueurs sérologiques de l'infection par le virus de l'hépatite B, en particulier l'AgHBs et ses anticorps.

Actuellement, diverses méthodes ont été développées pour la fabrication de diagnostics érythrocytaires, qui diffèrent par les méthodes de sensibilisation des érythrocytes (utilisant le tanin, le glutaraldéhyde, le chlorure de chrome, le rivanol, etc.), leurs espèces (humaine, bélier, poulet, dinde, etc.). ), les options de mise en place de la réaction (en plaques de microtitrage, en tubes à essai, capillaires, etc.) et l'enregistrement des résultats (visuel et instrumental). Les diagnostics érythrocytaires pour la détection de l'AgHBs et des anti-HBs sont produits par de nombreuses entreprises et entreprises dans notre pays et à l'étranger.

Le plus souvent, le RNGA est réalisé dans des plaques de microtitrage, dans lesquelles des dilutions du sérum de test et des échantillons de contrôle sont préparées au préalable. Après l'introduction de l'érythrocyte diagnosticum et l'incubation, les résultats de la réaction sont enregistrés. Échantillons dans lesquels l'agglutination des érythrocytes, qui ressemble à un "parapluie" inversé, est considérée comme positive. En cas de réaction négative, les érythrocytes se déposent au fond du puits sous la forme d'un anneau ou d'un disque.

Pour confirmer la spécificité des résultats obtenus, la réaction est mise à la fois avec un diagnostic érythrocytaire «expérimental» (c'est-à-dire des érythrocytes sensibilisés avec un antigène ou des anticorps) et avec un diagnosticum «témoin» (c'est-à-dire que les érythrocytes ne sont pas sensibilisés avec un antigène ou des anticorps). La présence d'une réaction positive avec un médicament de diagnostic «témoin» indique une réaction faussement positive. Pour éliminer les réactions non spécifiques, le sérum à tester est traité avec des érythrocytes non sensibilisés. Une condition préalable au RNGA est la réaction de neutralisation, c'est-à-dire le test de confirmation.

En comparaison avec des méthodes telles que RPG, VIEF et RSC, la réaction d'hémagglutination indirecte a une sensibilité plus élevée (200 à 400 fois). Ainsi, l'HBsAg dans RPHA peut être détecté à des concentrations de 6 à 10 ng / ml. La simplicité de la réaction et la rapidité (20-30 minutes) ont déterminé l'utilisation généralisée de cette méthode dans le service de transfusion sanguine pour la détection de l'AgHBs.

En plus du diagnostic des érythrocytes pour la détection de l'HBsAg et de l'anti-HBs, des préparations de diagnostic ont également été développées pour la détection des anticorps anti-HBc, anti-HBc de classe IgM (variante en phase solide), HBeAg, antigène du virus de l'hépatite A et des anticorps contre celui-ci, cependant, tous n'ont pas trouvé d'application. dans les soins de santé pratiques.

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Réaction d'agglutination étendue (RA). Pour déterminer l'AT dans le sérum sanguin du patient, mettez réaction d'agglutination prolongée (RA)... Pour cela, un diagnosticum est ajouté à une série de dilutions de sérum sanguin - une suspension de micro-organismes tués ou de particules avec de l'Ag sorbé. La dilution maximale donnant agglutination Ag est appelé le titre sérique.

Variétés de réaction d'agglutination (RA) pour la détection de l'AT - un test de goutte de sang pour la tularémie (avec l'application d'un diagnosticum à une goutte de sang et l'apparition d'agglutinats blanchâtres visibles) et la réaction de Haddleson à la brucellose (avec l'application d'un diagnosticum coloré au violet de gentiane sur une goutte de sérum sanguin).

Réaction indicative d'agglutination (RA)

Pour identifier les micro-organismes isolés, mettez une RA approximative sur les lames. Pour ce faire, une culture du pathogène est ajoutée à une goutte d'un antisérum de diagnostic standard (dilution 1:10, 1:20). Si le résultat est positif, une réaction détaillée est établie avec des dilutions croissantes de l'antisérum.

La réaction considéré comme positif si une agglutination est observée à des dilutions proches du titre du sérum diagnostique.

OEA. O-Ag somatique sont thermiquement stables et peuvent résister à l'ébullition pendant 2 heures. Lorsqu'ils interagissent avec l'AT, ils forment des agrégats à grains fins.

Vieille sorcière. H-Ag (flagellé) sont thermolabiles et se dégradent rapidement à 100 ° C, ainsi que sous l'action de l'éthanol. Dans les réactions avec l'antisérum H, après 2 heures d'incubation, de gros flocons se forment (formés par des bactéries collées avec des flagelles).

Vi-Ar les bactéries typhoïdes sont relativement thermostables (résistent à des températures de 60 à 62 ° C pendant 2 heures); lorsqu'il est incubé avec l'antisérum Vi, un agglutinat à grains fins se forme.

Réactions d'hémagglutination directe

Le plus simple d'entre eux réactions - agglutination érythrocytes, ou hémagglutination, utilisés pour déterminer les groupes sanguins dans le système AB0. Pour déterminer agglutination (ou son absence) en utilisant des antisérums standard avec des agglutinines anti-A et anti-B. La réaction est dite directe, car les Ag étudiés sont des composants naturels des érythrocytes.

Commun avec hémagglutination directe mécanismes ont une hémagglutination virale. De nombreux virus sont capables d'agglutiner spontanément les érythrocytes d'oiseaux et de mammifères, leur ajout à la suspension d'érythrocytes provoque la formation d'agrégats à partir d'eux.

Réaction d'inhibition de l'hémagglutination

Réaction d'hémagglutination

Réaction d'agglutination

La réaction d'agglutination (RA) est l'adhésion et la précipitation de microbes ou d'autres cellules sous l'action d'anticorps en présence d'un électrolyte (solution isotonique de chlorure de sodium). Le précipité résultant est appelé agglutiner.

Pour la réaction dont vous avez besoin:

1. Les anticorps (agglutinines) se trouvent dans le sérum du patient ou dans le sérum immunitaire.

2. Antigène - une suspension de micro-organismes vivants ou tués, d'érythrocytes ou d'autres cellules.

3. Solution isotonique.

La réaction d'agglutination pour les sérodiagnostics est largement utilisée dans la fièvre typhoïde, la fièvre paratyphoïde (réaction de Vidal), la brucellose (réaction de Wright), etc. le sérum du patient et l'antigène est un microbe connu.

Lors de l'identification de microbes ou d'autres cellules, leur suspension sert d'antigène et un sérum immun connu comme anticorps. Cette réaction est largement utilisée dans le diagnostic des infections intestinales, de la coqueluche, etc.

En pratique de laboratoire, ils utilisent deux réactions d'hémagglutination (RHA), différentes dans le mécanisme d'action.

Premier RGA se réfère à sérologique. Dans cette réaction, les globules rouges s'agglutinent lorsqu'ils interagissent avec les anticorps correspondants (hémagglutinines). La réaction est largement utilisée pour déterminer les groupes sanguins.

Deuxième RGAn'est pas sérologique. Dans celui-ci, l'adhésion des érythrocytes est causée non par des anticorps, mais par des substances spéciales formées par des virus. Par exemple, le virus de la grippe agglutine les érythrocytes des poulets et des cobayes, le virus de la poliomyélite - les érythrocytes des moutons. Cette réaction permet de juger de la présence d'un virus particulier dans le matériel d'essai.

Il s'agit d'une réaction sérologique dans laquelle des anticorps antiviraux spécifiques, interagissant avec le virus (antigène), le neutralisent et le privent de la capacité d'agglutiner les érythrocytes, c'est-à-dire d'inhiber la réaction d'hémagglutination. La haute spécificité de la réaction d'inhibition de l'hémagglutination (RTGA) permet de l'utiliser pour déterminer le type et même le type de virus détectés lors de la préparation de la RHA.

La réaction d'hémagglutination indirecte (passive) (RNGA) est basée sur le fait que les érythrocytes, si un antigène soluble est adsorbé à leur surface, acquièrent la capacité de s'agglutiner lorsqu'ils interagissent avec des anticorps contre l'antigène adsorbé. Le diagramme RNGA est illustré à la Fig. Le RNGA est largement utilisé dans le diagnostic d'un certain nombre d'infections.

Figure: Schéma de la réaction d'hémagglutination passive (RPHA). A - obtenir un diagnostic d'érythrocytes; B - RNGA: 1-érythrocyte: 2 - l'antigène étudié; 3 - diagnostic d'érythrocytes; 4 - anticorps contre l'antigène étudié; 5 - agglutinate.

Avec l'aide de RNGA, un antigène inconnu peut être déterminé si des anticorps connus sont adsorbés sur les érythrocytes.

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Réactions d'agglutination passive. Réactions d'agglutination indirectes. Réaction d'hémagglutination indirecte ou passive (RNGA, RPHA). Inverser RNGA. Réaction passive d'inhibition de l'hémagglutination (RTPHA).

Celles-ci réactions sont appelés indirect (passif), puisqu'ils utilisent Ar (ou AT), sorbé artificiellement à la surface de diverses particules corpusculaires.

Réaction d'hémagglutination indirecte ou passive (RNGA, RPGA) est l'une des réactions sérologiques les plus sensibles. Basé sur la capacité de l'AT à interagir avec l'Ag, fixé sur divers érythrocytes, qui s'agglutinent en même temps. Pour une plus grande stabilité des diagnostics, les érythrocytes sont formalisés.

RNGA inversé est utilisé pour détecter Ar dans le sérum sanguin; pour cela, pas Ar, mais AT sont fixés sur les érythrocytes. Les réactions de ce type sont largement utilisées pour diagnostiquer les maladies infectieuses, établir une grossesse, détecter une hypersensibilité aux médicaments, etc.

Inhibition de la réaction de l'hémagglutination passive (RTPGA) - la poursuite du développement RNGA; en un sens contrôle sa spécificité. contrairement à RNGA, comprend trois composants; Ag, AT et Ar (AT) adsorbés sur les érythrocytes. Dans un premier temps, l'Ag réagit avec l'AT (antisérum standard), puis des érythrocytes sensibilisés avec un Ag (ou AT) similaire sont ajoutés au mélange. Si au cours de l'interaction de Ar avec AT, l'AT libre (ou Ar) ne reste pas dans le système, alors l'agglutination de l'érythrocyte diagnosticum n'est pas observée.