Контрактное производство. Привет студент Количественное определение дубильных веществ по гф 13

Дубильные вещества - сложные высокомолекулярные природные растительные фенольные соединения, способные осаждать белки и алкалоиды и дубить невыделанную шкуру животных, превращая ее в прочный, неподдающийся гниению продукт - кожу.

Термин «дубильные вещества» был введен французским ученым П. Сегеном в 1796 г.

Таннины, или танниды, - синоним термина «дубильные вещества». Он происходит от латино-кельтского обозначения дуба - «тан» - и широко распространен в научной литературе.

Способность этих веществ «дубить» белки шкур животных, делать их непроницаемыми для воды и устойчивыми к микробному гниению основана на их свойстве взаимодействовать с коллагеном, приводящим к образованию стойких полимерных структур. Дубление - сложный физико-химический процесс, связанный с возникновением водородных, ковалентных и электровалентных связей между молекулами коллагена и фенольными группами дубильных веществ.

Дубящими свойствами обладают только многоядерные фенолы, содержащие более одной ОН-группы. Это крупные фенольные молекулы с молекулярной массой от 300 до 500 и иногда до 20 000. Фенолы одноядерные и не содержащие многочисленных ОН-групп лишь адсорбируются на белках, но не могут образовать перекрестные связи между собой и белковыми группами, «сшивать» мономерные белковые группы. Они в той или иной степени инактивируют ферментные белки, но не вызывают фенол-белковых сцепок в коллагене - основном белковом компоненте шкур. Поэтому низкомолекулярные фенолы имеют лишь вяжущий вкус, их еще называют пищевыми (чайными) таннинами.

Классификация

Первая попытка классификации дубильных веществ была предпринята шведским химиком И. Берцелиусом, который разделил эти вещества на две группы по их способности давать с солями Fe (III) черные соединения зеленоватого или синеватого оттенка. Впоследствии эта простая классификация дубильных веществ легла в основу более точной научной классификации, предложенной К. Фрейденбер-
гом. Он стал делить дубильные вещества в зависимости от их способности гидролизоваться под действием кислот (или ферментов) на две группы:

1) гидролизуемые дубильные вещества:

Галлотаннины;

Эллаготаннины;

Депсиды, или несахарные эфиры карбоновых кислот;

2) негидролизуемые (конденсированные) дубильные вещества, или флоба- фены, которые подразделяют на производные:

Катехинов (флаван-3-олов);

Лейкоантоцианидинов (флаван-3,4-диолов);

Гидростильбенов.

Гидролизуемые дубильные вещества. Галлотаннины - сложные эфиры гексоз (обычно D-глюкозы) и галловой кислоты. В глюкозе имеется пять ОН-групп, благодаря которым могут образовываться моно-, ди-, три-, тетра-, пента- и полигаллоильные эфиры. Представителем группы полигаллоильных эфиров является китайский таннин, который получают из листьев и образующихся на них наростов (галлов) сумаха полукрылатого (Rhus semialata Murr.). Представителем многогаллоильных эфиров является P-D-глюкогаллин, выделенный из корня ревеня и листьев эвкалипта.

Эллаготаннины - эфиры D-глюкозы и гексадифеноловой, хебуловой и других кислот, образующихся вместе c эллаговой кислотой. Эллаготаннины найдены в коре плодов граната, кожуре грецкого ореха, коре дуба, соплодиях ольхи. В растениях присутствует обычно не эллаговая, а гексагидроксидифеновая кислота.

При кислотном гидролизе дубильных веществ эта кислота превращается в дилак- тон - эллаговую кислоту.

Депсиды представляют собой эфиры галловой кислоты с хинной, хлорогено- вой, кофейной, гидроксикоричной кислотами, атакже флаванами. Эфиры галловой кислоты и катехинов находятся в листьях чая. Из листьев зеленого чая выделен теогаллин.

Теогаллин (депсид)

Преимущественно гидролизуемые дубильные вещества содержат такие ЛР, как скумпия кожевенная, сумах дубильный, горец змеиный, бадан толстолистный, кровохлебка лекарственная, ольха черная и о. серая.

Преимущественно конденсированные дубильные вещества содержат дуб обыкновенный, лапчатка прямостоячая, черника обыкновенная, черемуха обыкновенная.

Негидролизуемые дубильные вещества. Представляют собой олигомеры и полимеры катехинов, лейкоантоцианидинов и гидроксистильбенов, где звенья связаны друг с другом прочными углерод-углеродными связями в положениях С2-С6, С2-С8, С4-С8, С5-С2. Кроме того, они никогда не содержат остатков сахара.

При образовании конденсированных дубильных веществ разрывается пира- новое кольцо катехина (лейкоантоцианидина) и С2-атом соединяется С-С-свя- зью с С6-атомом другой молекулы катехина (лейкоантоцианидина). Конденсированные дубильные вещества не распадаются под действием кислот; наоборот, они имеют тенденцию из олигомеров превращаться в более длинные полимеры (полимеризация в кислоте) с образованием аморфных, часто окрашенных в красный цвет соединений - флобафенов. Образование конденсированных дубильных веществ происходит в живом растении в процессе биосинтеза и после его смерти - при технологической обработке древесины.

Образование конденсированных дубильных веществ из мономеров

Физико-химические свойства

По физико-химическим свойствам дубильные вещества представляют собой аморфные соединения желтоватого или бурого цвета.

Природные дубильные вещества имеют среднюю молекулярную массу 500-5000, но отдельные соединения - до 20 000. При нагревании до 180-200 °С дубильные вещества (не плавясь) обугливаются, выделяя пирогаллол или пирокатехин. Растворяются во многих органических растворителях (ацетон, этанол, этилацетат, пиридин), но не в хлороформе, петролейном эфире, бензоле. Также хорошо растворимы в воде, лучше горячей. При растворении в воде дают коллоидные растворы слабокислой реакции. С солями тяжелых металлов образуют окрашенные комплексы. Осаждаются растворами аминокислот, белков, алкалоидов. Многие дубильные вещества - оптически активные соединения. Обладают вяжущим вкусом. Легко окисляются на воздухе, приобретая красно-бурую окраску, иногда темно-коричневую. Присутствие гидроксидов щелочных металлов сильно ускоряет процесс окисления дубильных веществ. Гидролизуемые дубильные вещества под действием кислот или ферментов распадаются на органические кислоты и глюкозу.

Выделение из ЛРС

Дубильные вещества - это смесь различных полифенолов, имеющих сложную структуру, очень лабильных, поэтому выделение и анализ отдельных компонентов дубильных веществ представляет большие трудности. Для получения суммы дубильных веществ ЛРС экстрагируют горячей водой, охлаждают, а затем экстракт обрабатывают последовательно:

1) петролейным эфиром или бензолом (для очистки от хлорофилла, терпе- ноидов, липидов);

2) диэтиловым эфиром, который извлекает катехины, оксикоричные кислоты и другие фенольные соединения;

3) этилацетатом, в который переходят лейкоантоцианидины, эфиры оксико- ричной кислоты и др.

Оставшееся водное извлечение с дубильными веществами и другими фенольными соединениями и фракциями 2 и 3 (диэтилового эфира и этилацетата) разделяют на индивидуальные компоненты с помощью различных видов хроматографии. Используют:

Адсорбционную хроматографию на колонках целлюлозы, полиамида (иногда вместо полиамида используют гольевый порошок);

Распределительную хроматографию на колонках силикагеля;

Ионообменную хроматографию;

Гель-фильтрацию на колонках сефадекса и др.

Идентификация индивидуальных дубильных веществ основана на сравнении Rf в хроматографических методах (на бумаге, в тонком слое сорбента), спектральных исследованиях, качественных реакциях и изучении продуктов расщепления (для гидролизуемых дубильных веществ).

Качественное выделение дубильных веществ

Качественные реакции определения дубильных веществ можно разделить на две группы:

1) общие (осаждения) - для обнаружения присутствия дубильных веществ;

2) групповые (цветные) - для установления принадлежности дубильных веществ к определенной группе.

Прежде всего для проведения качественных реакций готовят водное извлечение дубильных веществ из ЛРС.

Дубильные вещества обнаруживают, используя следующие реакции:

Соединяя с 1 % раствором желатина в 10 % растворе NaCl. Появляется муть, исчезающая при добавлении избытка желатина. Реакция специфична;

Осаждая солями алкалоидов (например, сульфатом хинина). Образуется белый осадок;

Соединяя с 5 % раствором дихромата калия (К2Сг2О7). Образуется коричневый осадок или муть. Эта же реакция используется и как гистохимическая для обнаружения локализации дубильных веществ в ЛРС;

Соединяя с раствором основного ацетата свинца: образуется белый осадок;

Соединяя с ванилином (в присутствии 70 % серной или концентрированной хлористо-водородной кислоты) дубильные вещества, содержащие мономеры катехинового типа, развивают красное окрашивание.

Классификацию дубильных веществ проводят с помощью следующих реакций:

С 1 % раствором железоаммонийных квасцов (или другими источниками ионов Fe3+): гидролизуемые дубильные вещества дают черно-синее окрашивание, а конденсированные - черно-зеленое;

С 10 % раствором среднего ацетата свинца в 10 % уксусной кислоте: гидролизуемые дубильные вещества выпадают в белый хлопьевидный осадок, а конденсированные остаются в растворе и их можно также затем определить (например, по зеленовато-черному окрашиванию с Fe3+);

Со смесью из 40 % раствора формальдегида и концентрированной HCl: конденсированные дубильные вещества выпадают в осадок, а гидролизуемые остаются в водном растворе (что можно установить по синевато-черному окрашиванию в дополнительном тесте с Fe3+);

С кристалликами NaNO2 и раствором 0,1 М HCl: при наличии в экстракте ЛРС дубильных веществ появляется коричневое окрашивание;

С раствором HCl и добавлении 1 % раствора (или кристалликов) ванилина гидролизуемые дубильные вещества, состоящие из мономеров катехинов, при нагревании дают ярко-красное окрашивание. Гидролизуемые дубильные вещества, состоящие из мономеров лейкоантоцианидинов, можно обнаружить, нагревая извлечение с раствором HCl: появляется красное окрашивание (за счет образования анто- цианидинов, дающих красное окрашивание в кислых значениях рН);

При добавлении бромной воды и нагревании конденсированные дубильные вещества в экстракте из ЛРС выпадают в осадок.

При хроматографическом определении дубильных веществ этанольный экстракт из ЛРС наносят на стартовую линию хроматографической пластинки «Си- луфол», помещают в хроматографическую камеру (с соответствующими растворителями, указанными в НД), а после проведения разделения пластинку просматривают в УФ-свете и отмечают, что некоторые производные катехинов имеют голубую флуоресценцию, которая усиливается при обработке хроматограмм 1 % раствором ванилина в концентрированной HCl. После выдерживания хроматограмм в парах HCl с последующим нагреванием в сушильном шкафу при температуре 105 °С в течение 2 мин дубильные вещества лейкоантоцианидинового типа переходят в антоцианидины розового или красно-фиолетового цвета.

Количественное определение дубильных веществ

Методы количественного определения дубильных веществ в ЛРС можно разделить на гравиметрические, титриметрические и физико-химические.

Гравиметрические методы основаны на количественном осаждении дубильных веществ солями тяжелых металлов, желатиной или адсорбцией гольевым порошком. Методы осаждения дубильных веществ ацетатом меди или желатиной потеряли свое значение.

Однако весовой единый метод (ВЕМ) применяется в кожевенной промышленности. Метод основан на способности дубильных веществ давать прочные соединения с коллагеном кожи. Для этого полученное водное извлечение из ЛРС делят на две равные части. Одну часть выпаривают, высушивают и взвешивают; вторую обрабатывают гольевым (кожным) порошком, фильтруют. Фильтрат выпаривают, высушивают и взвешивают. По разности сухих остатков 1-й и 2-й частей (т. е. контроля и опыта) определяют содержание дубильных веществ в растворе.

Титриметрическийметод, включенный в ГФ РБ (вып. 2, с. 348), именуемый методом Левенталя - Нейбауэра, основан на окислении фенольных ОН-групп перманганатом калия ^MnO4) в присутствии индигосульфокислоты, являющейся регулятором и индикатором реакции. После полного окисления дубильных веществ начинает окисляться индигосульфокислота до изатина, в результате чего окраска раствора из синей переходит в золотисто-желтую.

Другой титриметрический метод определения дубильных веществ - метод осаждения таннина сульфатом цинка с последующим комплексонометрическим титрованием трилоном Б в присутствии ксиленового оранжевого (используется, в частности, для определения таннина в листьях сумаха дубильного и скумпии кожевенной).

Физико-химические методы определения дубильных веществ:

Колориметрические - связаны со способностью дубильных веществ давать окрашенные соединения с фосфорно-молибденовой или фосфорно-вольфрамовой кислотами в присутствии Na2CO3 или с реактивом Фолина - Дениса (на фенолы). ГФ РБ (т. 1; 2.8.14) предлагает фотоколометрическое определение экстрагированных из ЛРС в водный раствор дубильных веществ с раствором фосфорно-молибденового реагента в присутствии натрия карбоната при длине волны 760 нм;

Хромато-спектрофотометрические и нефелометрические методы, которые используют главным образом в научных исследованиях.

Распространение в растительном мире, условия образования и роль в растениях

Дубильные вещества широко распространены в растительном мире. Они встречаются в грибах, водорослях, папоротниках, хвощах, мхах, плаунах, у высших растений (покрыто- и голосеменных). Многие хвойные накапливают достаточно большое количество дубильных веществ. Максимальное их накопление обнаружено у отдельных представителей двудольных растений, тогда как у однодольных оно отмечено лишь у некоторых семейств. Низкое содержание дубильных веществ у злаков. У двудольных некоторые семейства (например, Розоцветные, Гречишные, Бобовые, Ивовые, Сумаховые, Буковые, Вересковые) насчитывают многие роды и виды, где содержание таннидов доходит до 20-30 % и более. Наивысшее содержание дубильных веществ выявлено в патологических образованиях - галлах (до 60-80 %). Древесные формы богаче дубильными веществами, чем травянистые. Дубильные вещества неравномерно распределены по органам и тканям растений. Они накапливаются главным образом в коре и древесине деревьев и кустарников, а также в подземных частях травянистых многолетников; зеленые части растений значительно беднее дубильными веществами. В частности, дубильные вещества накапливаются:

В подземных органах (лапчатка прямостоячая, кровохлебка лекарственная, бадан толстолистный);

Коре (дуб обыкновенный);

Траве (виды зверобоя);

Плодах (черника обыкновенная, черемуха обыкновенная, ольха клейкая и

о. серая);

Листьях (сумах дубильный, скумпия кожевенная).

Дубильные вещества аккумулируются в вакуолях, а при старении клеток адсорбируются на клеточных стенках. Чаще всего в растениях встречается смесь гидролизуемых и конденсированных дубильных веществ с преобладанием соединений той или иной группы.

Содержание дубильных веществ в растениях изменяется в зависимости от периода вегетации и возраста растений. Их накопление одновременно сопровождается резким увеличением массы корневых систем. С возрастом растений количество дубильных веществ в них уменьшается. Период вегетации влияет не только на количественный, но и на качественный состав дубильных веществ.

Растущие на солнце растения накапливают больше дубильных веществ, чем растущие в тени (так, в тропических растениях их образуется значительно больше, чем в растениях умеренных широт). На содержание дубильных веществ в растениях влияет также высота над уровнем моря, время года - особенно в областях с резко выраженной сезонностью климата. Содержание дубильных веществ зависит как от климатических, почвенных, так и от генетических (наследственных) факторов растения.

Установлено, что большинство дубильных веществ в листьях находится в клетках паренхимы, окружающих жилку, т. е. дубильные вещества образуются в листьях и оттуда проходят в клетки флоэмы проводящих пучков, по которым разносятся по всему растению. Обладая бактерицидными свойствами (благодаря своей фенольной природе), они препятствуют гниению древесины и являются веществами, защищающими растения от вредителей и возбудителей заболеваний. Дубильные вещества также участвуют в процессах метаболизма растений. Они откладываются как запасные продукты, которые могут использоваться затем при весеннем пробуждении и нарастании вегетативных органов.

Биомедицинское действие и применение

Дубильные вещества и содержащие их ЛР применяют в основном в качестве вяжущих, противовоспалительных и кровоостанавливающих средств.

Растворы таннидов связываются с белками кожи, образуя непроницаемую для воды пленку. На этом основано их медицинское применение в виде вяжущих средств, так как образующаяся на слизистых оболочках пленка препятствует дальнейшему воспалению, а нанесенные на рану, они свертывают кровь и поэтому действуют как местные кровоостанавливающие средства. Свойство образования пленки на языке обусловливает характерный вяжущий вкус дубильных веществ.

Как вяжущие средства;

Кровоостанавливающие средства;

Противовоспалительные средства;

Антимикробные средства;

а также в качестве:

P-витаминных и антисклеротических средств (гидролизуемые и конденсированные дубильные вещества);

Антиоксидантов и гипооксантов (конденсированные дубильные вещества);

Противоопухолевых средств (конденсированные дубильные вещества);

Противоядия при отравлении гликозидами, алкалоидами и солями тяжелых металлов (дубильные вещества).

Показано, что большие дозы дубильных веществ оказывают противоопухолевое действие, средние - радиосенсибилизирующее, малые - противолучевое.

Широкое применение дубильные вещества находят также в кожевенной, коньячной и пищевой промышленности.

Заготовка ЛРС, содержащего дубильные вещества

Заготовку проводят в период максимального содержания дубильных веществ. Сушат быстро при температуре 50-60 °С, так как продолжительное хранение свежего сырья ведет к гидролитическому расщеплению гидролизуемых и конденсированных дубильных веществ под влиянием ферментов. Высушенное ЛРС хранят цельным в сухом помещении в упакованном виде. При хранении измельченного ЛРС повышается скорость окисления дубильных веществ, изменяется цвет.

Для получения суммы дубильных веществ растительное сырье экстрагируют горячей водой в соотношении 1:30 или 1:10.

Качественные реакции на дубильные вещества можно подразделить

на 2 группы:

Ø Общие реакции осаждения – для обнаружения дубильных веществ

Ø Групповые – для установления принадлежности дубильных веществ к определенной группе

Для обнаружения дубильных веществ в растительном сырье используют следующие реакции:

1. Специфической реакцией на дубильные вещества является реакция осаждения желатином. Используют 1 %-й раствор желатина на 10 %-ном растворе хлорида натрия. Появляется хлопьевидный осадок, растворимый в избытке желатина. Отрицательная реакция с желатином свидетельствует об отсутствии дубильных веществ.

2. Реакция с солями алкалоидов. Образуется аморфный осадок за счет образования водородных связей с гидроксильными группами дубильных веществ и атомами азота алкалоида.

Эти реакции дают одинаковый результат независимо от группы дубильных веществ.

Реакции, позволяющие определить группу дубильных веществ.

1.Реакция Стиасни – с 40 % раствором формальдегида и конц. HCl -

Конденсированные дубильные вещества образуют осадок кирпично-красного цвета

2.Бромная вода (5 г брома в 1 л воды) - к 2-3 мл испытуемого раствора прибавляют по каплям бромную воду до появления в растворе запаха брома; в случае присутствия конденсированных дубильных веществ образуется оранжевый или желтый осадок.

3. Окрашивание с солями трехвалентного железа, железоаммонийными квасцами –

черно-синее (дубильные вещества гидролизуемой группы, которые являются производными пирогаллола)

или черно-зеленое (дубильные вещества конденсированной группы, которые являются производными пирокатехина).

4.Катехины дают красное окрашивание с ванилином

(в присутствии конц. HCl или 70 %-ной H 2 SO 4 развивается яркая красная окраска).

Катехины образуют при этой реакции окрашенный продукт следующего строения:

Реакцией отличающей пирогалловые танниды от пирокатехиновых является реакция нитрозометилуретаном.

При кипячении растворов дубильных веществ с нитрозометилуретаном танниды пирокатехинового ряда осаждаются полностью,

а присутствие пирогалловых таннидов можно обнаружить в фильтрате путем прибавления железоаммиачных квасцов и натрия ацетата – фильтрат окрашивается в фиолетовый цвет.

Свободная эллаговая кислота дает красно-фиолетовую окраску при добавлении нескольких кристаллов нитрита натрия и трех-четырех капель уксусной кислоты.

7. Для обнаружения связанной эллаговой кислоты (или гаксаоксидифеновой) уксусную кислоту заменяют 0,1 н. серной или соляной кислотой (кармино-красная окраска, переходящая в синюю).

8. Дубильные вещества с белками создают непроницаемую для воды пленку (дубление). Вызывая частичное свертывание белков, они образуют на слизистых оболочках и раневых поверхностях защитную пленку.

9. При соприкосновении с воздухом (например, резке свежих корневищ) дубильные вещества легко окисляются, превращаясь во флобафены или красени, которые обусловливают темно-бурую окраску многих кор и других органов, настоев.

Флобафены нерастворимы в холодной воде, растворяются в горячей воде, окрашивая отвары и настой в бурый цвет.

10. С 10 %-ным раствором среднего ацетата свинца (одновременно добавляют 10 %-ный раствор уксусной кислоты) :

образуется белый осадок, нерастворимый в уксусной кислоте – дубильные вещества гидролизуемой группы (осадок отфильтровывают и в фильтрате определяют содержание конденсированных дубильных веществ, с 1 %-ным раствором железоаммонийных квасцов – черно-зеленое окрашивание);

белый осадок, растворимый в уксусной кислоте – дубильные вещества конденсированной группы.

0

Кафедра управления и экономики фармации, фармацевтической технологии и фармакогнозии

ВЫПУСКНАЯ КВАЛИФИКАЦИОННАЯ РАБОТА

На тему СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СВЕЖЕСОБРАННОГО И ГОТОВОГО ЛЕКАРСТВЕННОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ, СОДЕРЖАЩЕГО ДУБИЛЬНЫЕ ВЕЩЕСТВА

Список сокращений

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ДУБИЛЬНЫЕ ВЕЩЕСТВА

2. 1. Объекты исследования

ГЛАВА 3. СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ СОДЕРЖАНИЯ ДУБИЛЬНЫХ ВЕЩЕСТВ В СВЕЖЕСОБРАННОМ И ГОТОВОМ ЛЕКАРСТЕННОМ

РАСТИТЕЛЬНОМ СЫРЬЕ

Список литературы

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АД - артериальное давление

БУВ - бутанол-кислота уксусная-вода

ВЕМ - весовой единый метод

ГСО - государственный стандартный образец

ГФ - государственная фармакопея

конц. - концентрированный

ЛС - лекарственное средство

ЛП - лекарственный препарат

ЛРС - лекарственное растительное сырье

НД - нормативная документация

УФ-лучи - ультрафиолетовые лучи

ВВЕДЕНИЕ

Дубильные вещества - группа разнообразных и сложных по составу растворимых в воде органических веществ ароматического ряда, содержащих гидроксильные радикалыфенольного характера .

Дубильные вещества широко распространены в растительном царстве, обладают характерным вяжущим вкусом. Лекарственные растения, содержащие дубильные вещества, распространенны и на территории Воронежской области.

В настоящее время сырье и препараты, содержащие дубильные вещества, применяются наружно и внутрь как вяжущие, противовоспалительные, бактерицидные и кровоостанавливающие средства. Действие основано на способности дубильных веществ связываться с белками с образованием плотных альбуминатов .

Актуальность темы объясняется тем, что содержание дубильных веществ в готовых лекарственных препаратах (ЛП) и готовом лекарственном растительном сырье (ЛРС) зачастую меньше, чем в свежесобранном сырье. На их содержание влияют большое количество факторов таких, как условия сбора и сушки, хранения самого сырья и готового лекарственного препарата.

Целью дипломной работы явился изучение лекарственного растительного сырья, содержащего дубильные вещества, произрастающие в Воронежской области.

Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

Изучить теоретические основы представления о дубильных веществах;

Изучить лекарственные растения Воронежской области, содержащие дубильные вещества;

Провести анализ содержания дубильных веществ в свежесобранном и в готовом ЛРС.

В качестве объекта исследования было выбрано свежесобранное и готовое ЛРС двух видов растений, произрастающих на территории Воронежской области: дуб обыкновенный (Quercus robur) и череда трехраздельная (Bidens tripartita).

Для определения количественного содержания дубильных веществ в сырье был использован метод спектрофотометрии.

Исследования проводились на базе ВГМА, на кафедре управления и экономики фармации, фармацевтической технологии и фармакогнозии.

ГЛАВА 1. ДУБИЛЬНЫЕ ВЕЩЕСТВА

1. 1. Общее понятие дубильных веществ и их распространение

Дубильными веществами (таннидами) называются растительные полифенольные соединения с молекулярной массой от 500 до 3000, способные образовывать прочные связи с белками и алкалоидами и обладающие дубящими свойствами.

Названы так по своей способности дубить невыделанную шкуру животных, превращая ее в прочную кожу, устойчивую к воздействию влаги и микроорганизмов, ферментов, то есть не поддающаяся гниению.

Эта способность дубильных веществ основана на их взаимодействии с коллагеном (белком кожных покровов), приводящих к образованию устойчивой поперечносвязанной структуры - кожи за счет возникновения водородных связей между молекулами коллагена и фенольными гидроксилами дубильных веществ .

Но эти связи могут образовываться в тех случаях, когда молекулы достаточно велики, чтобы присоединить соседние цепочки коллагена, и имеют достаточное количество фенольных групп для образования поперечных связей.

Полифенольные соединения с более низкой молекулярной массой (менее 500) только адсорбируются на белках и не способны образовывать устойчивые комплексы, в качестве дубителей не используются.

Высокомолекулярные полифенолы (с молекулярной массой более 3000) также не являются дубителями, так как их молекулы слишком велики и не проникают между фибриллами коллагена.

Степень дубления зависит от характера мостиков между ароматическими ядрами, т. е. от строения самого дубильного вещества и от ориентации молекулы таннида по отношению к полипептидным цепям белка.

При плоском расположении таннида на белковой молекуле возникают устойчивые водородные связи:

Прочность соединения таннидов с белком зависит от числа водородных связей и от молекулярной массы.

Наиболее надежные показатели наличия дубильных веществ в растительных экстрактах - необратимая адсорбция дубильных веществ на кожном (гольевом) порошке и осаждение желатины из водных растворов.

Термин «дубильные вещества» впервые был использован в 1796 году французским исследователем Сегеном для обозначения присутствующих в экстрактах некоторых растений веществ, способных осуществлять процесс дубления. Практические вопросы кожевенной промышленности положили начало изучению химии дубильных веществ .

Другое название дубильных веществ - «танниды» - происходит от латинизированной формы кельтского названия дуба - «тан», кору которого издавна использовали для обработки шкур.

Первые научные исследования в области химии дубильных веществ относятся ко второй половине 18 века.

Первая опубликованная работа - работа Гледича в 1754 году «Об использовании плодов черники, как сырья для получения дубильных веществ». Первой монографией была монография Деккера в 1913 году, которая обобщала весь накопленный материал по дубильным веществам.

С исследованиями строения дубильных веществ связаны имена крупнейших зарубежных химиков: Г. Проктера, Э. Фишера, К. Фрейденберга, П. Каррера.

Дубильные вещества являются производными пирогаллола, пирокатехина, флороглюцина. Простые фенолы дубящее действие не оказывают, но вместе с фенолкарбоновыми кислотами сопутствуют дубильным веществам.

В природе многие растения (особенно двудольные) содержат дубильные вещества. Среди низших растений они встречаются в лишайниках, грибах, водорослях, среди споровых - во мхах, хвощах, папоротниках. Богаты дубильными веществами представители семейств сосновых, ивовых, гречишных, вересковых, буковых, сумаховых .

Семейства розоцветных, бобовых, миртовых насчитывают многочисленные роды и виды, в которых содержание дубильных веществ доходит до 20-30% и более. Больше всего (до 50-70%) дубильных веществ найдено в патологических образованиях - галлах. Наиболее богаты дубильными веществами тропические растения .

Дуб, лапчатка, змеевик, кровохлебка, бадан толстолистный, скумпия кожевенная как впрочем, и многие другие растения содержат дубильные вещества смешанной группы - конденсированные и гидролизуемые.

Дубильные вещества содержатся в подземных и надземных частях растений: накапливаются в клеточном соке. В листьях дубильные вещества, или танниды, обнаружены в клетках эпидермы и паренхимы, окружающих проводящие пучки и жилки, в корневищах и корнях -накапливаются в паренхиме коры и сердцевинных лучах.

1. 2. Классификация дубильных веществ

Дубильные вещества - это смеси различных полифенолов, то из-за разнообразия их химического состава классификация затруднена.

По классификации Проктера (1894) дубильные вещества в зависимости от природы продуктов их разложения при температуре 180-200 0 С (без доступа воздуха) подразделил на две основные группы:

1. пирогалловые (дают при разложении пирогаллол);

2. пирокатехиновые (образуется пирокатехин) (табл. 1)

В результате дальнейшего исследования химизма танидов Фрейденберг в 1933 году уточнил классификацию Проктера и рекомендовал обозначить первую группу (пирогалловые дубильные вещества) как гидролизуемые дубильные вещества, а вторую (пирокатехиновые дубильные вещества) -конденсированные .

Большинство дубильных веществ растений невозможно однозначно отнести к типу гидролизуемых или конденсированных, поскольку эти группы во многих случаях недостаточно резко разграничены.

В растениях часто содержится смесь дубильных веществ обеих групп

В настоящее время наиболее часто пользуются классификацией Фрейденберга, который выделяет 2 основных группы:

1. Гидролизуемые дубильные вещества:

Галлотанины - эфиры галловой кислоты и сахаров;

Несахаридные эфиры фенолкарбоновых кислот;

Эллаготанины - эфиры эллаговой кислоты и сахаров.

2. Конденсированные дубильные вещества:

Производные флаванолов- 3;

Производные флавандиолов- 3, 4;

Производные оксистильбенов .

1. 3. Методика определения качественного и количественного содержания дубильных веществ в лекарственном растительном сырье

Реакции, для обнаружения дубильных веществ:

Специфической реакцией на дубильные вещества является реакция осаждения желатином. Используют 1%-й раствор желатина на 10%-ном растворе хлорида натрия. Появляется хлопьевидный осадок, растворимый в избытке желатина. Отрицательная реакция с желатином свидетельствует об отсутствии дубильных веществ.

Реакция с солями алкалоидов. Образуется аморфный осадок за счет образования водородных связей с гидроксильными группами дубильных веществ и атомами азота алкалоида.

Эти реакции дают одинаковый результат независимо от группы дубильных веществ.

Реакции, для определения группы дубильных веществ:

Реакция Стиасни - с 40 % раствором формальдегида и конц. HCl -Конденсированные дубильные вещества образуют осадок кирпично-красного цвета

Бромная вода (5 г брома в 1 л воды) - к 2-3 мл испытуемого раствора прибавляют по каплям бромную воду до появления в растворе запаха брома; в случае присутствия конденсированных дубильных веществ образуется оранжевый или желтый осадок.

Окрашивание с солями трехвалентного железа, железоаммонийными квасцами - черно-синее (дубильные вещества гидролизуемой группы, которые являются производными пирогаллола) или черно-зеленое (дубильные вещества конденсированной группы, которые являются производными пирокатехина).

Катехины дают красное окрашивание с ванилином (в присутствии конц. HCl или 70 %-ной H 2 SO 4 развивается яркая красная окраска).

Катехины образуют при этой реакции окрашенный продукт следующего строения:

Количественное определение.

1) Гравиметрические или весовые методы - основаны на количественном осаждении дубильных веществ желатином, ионами тяжелых металлов или адсорбцией кожным (гольевым) порошком.

Официальным в дубильно-экстрактовой промышленности является весовой единый метод (ВЕМ):

В водных вытяжках из растительного материала вначале определяют общее количество растворимых веществ (сухой остаток) путем высушивания определенного объема вытяжки до постоянной массы; затем из вытяжки удаляют дубильные вещества, обрабатывая ее обезжиренным кожным порошком; после отделения осадка в фильтрате вновь устанавливают количество сухого остатка. Разность в массе сухого остатка до и после обработки вытяжки кожным порошком показывает количество подлинных таннидов .

2) Титриметрические методы

Желатиновый метод - Метод Якимова и Курницкой - основан на способности дубильных веществ образовывать нерастворимые комплексы с белками. Водные извлечения из сырья титруют 1 % раствором желатина, в точке эквивалентности комплексы желатино-таннаты растворяются в избытке реактива. Титр устанавливают по чистому таннину. Точку валентности определяют путем отбора наименьшего объема титрованного раствора, вызывающего полное осаждение дубильных веществ.

Метод наиболее точный, т. к. позволяет определить количество истинных дубильных веществ.

Недостатки: длительность определения и трудность установления точки эквивалености.

Перманганатометрический метод (метод Левенталя в модификации Курсанова). Это фармакопейный метод, основан на легкой окисляемости перманганатом калия в кислой среде в присутствии индикатора и катализатора индигосульфокислоты, которая в точке эквивалентности раствора меняется от синего до золотисто-желтого.

Особенности определения, позволяющие оттитровать только макромолекулы дубильных веществ: титрование проводится в сильно разбавленных растворах (извлечение разбавляеттся в 20 раз) при комнатной температуре в кислой среде, перманганат добавляется медленно, по каплям, при интенсивном перемешивании.

Метод экономичный, быстрый, прост в исполнении, но недостаточно точен, так как перманганат калия окисляет частично и низкомолекулярные фенольные соединения.

3) Физико-химические методы

Фотоэлектроколориметрический метод. Основан на способности ДВ образовывать окрашенные химические соединения с солями железа (III), фосфорно-вольфрамовой кислотой, реактивом Фолина-Дениса и другими веществами. К исследуемому извлечению из ЛРС добавляют один из реактивов, после появления устойчивой окраски измеряют оптическую плотность на фотоколориметре. Процентное содержание ДВ определяют по калибровочному графику, постороенному с использованием серии растворов танина известной концентрации.

Спектрофотометрическое определение. После получения водного извлечения часть его центрифугируют в течение 5 мин при 3000 об/мин. К центрифугату добавляют 2 % водной раствор аммония молибдата, после чего разбавляют водой и оставляют на 15 мин. Интенсивность образовавшейся окраски измеряют на спектрофотометре при длине волны 420 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. Расчет танидов производят по стандартному образцу. В качестве стандартного образца используют ГСО танина.

Хроматографическое определение. Для идентификации конденсированных дубильных веществ получают спиртовое (95 % этиловый спирт) и водное извлечения и проводят бумажную и тонкослойную хроматографию. В качестве стандартного образца используют ГСО катехина. Разделение осуществляют в системах растворителей бутанол - кислота уксусная - вода (БУВ) (40: 12: 28), (4: 1: 2), 5 % уксусная кислота на бумаге марки "Filtrak” и пластинках "Silufol”. Обнаружение зон веществ на хроматограмме проводят в УФ-свете, с последующей обработкой 1 % раствором железоаммониевых квасцов или 1 % раствором ванилина, концентрированной кислотой хлористоводородной. В дальнейшем возможно проведение количественного анализа путём элюирования с пластины ДВ спиртом этиловым и проведения спектофотометрического анализа, снимая спектр поглощения в интервале 250-420 нм .

Амперометрический метод. Сущность метода заключается в измерении электрического тока, возникающего при окислении групп -ОН природных антиоксидантов фенольной природы на поверхности рабочего электрода при определенном потенциале. Предварительно строят графическую зависимость сигнала образца сравнения (кверцетина) от его концентрации и с помощью полученной градуировки рассчитывают содержание фенолов в исследуемых образцах в единицах концентрации кверцетина.

Потенциометрическое титрование. Данный вид титрования водного извлечения (в частности, отваров коры дуба) производили раствором калия перманганата (0, 02 М), результаты регистрировали с помощью рН-метра (рН-410). Определение конечной точки титрования проводилось по методу Грана с использованием компьютерной программы "GRAN v. 0. 5” . Потенциометрический вид титрования дает более точные результаты, так как при этом точка эквивалентности четко фиксируется, что исключает необъективность результатов за счет человеческого фактора. Потенциометрическое титрование особенно актуально по сравнению с индикаторным при исследовании цветных растворов, таких как водные извлечения, содержащие дубильных веществ.

Кулонометрическое титрование. Метод количественного определения содержания дубильных веществ в ЛРС в пересчете на танин путем кулонометрического титрования заключается в том, что исследуемое извлечение из сырья вступает в реакцию с кулонометрическим титрантом - гипоиодит-ионами, которые образуются при диспропорционировании электрогенерированного йода в щелочной среде. Электрогенерация гипоиодит-ионов осуществляется из 0, 1 М раствора йодида калия в фосфатном буферном растворе (рН 9, 8) на платиновом электроде при постоянной силе тока 5, 0 мА .

Таким образом, для количественного определения дубильных веществ в ЛРС используются такие методы количественного определения дубильных веществ в ЛРС, как титриметрические (в том числе титрование желатином, перманганатом калия, комплексонометрическое титрование трилоном Б, потенциометрическое и кулонометрическое титрование), гравиметрические, фотоэлектроколориметрические, спектрофотометрические, амперометрические методы.

1. 4. Применение дубильных веществ

Лекарственное сырьё, содержащее дубильные вещества, применяют для получения препаратов, используемых как вяжущие, кровоостанавливающие, противовоспалительные, антимикробные средства. Сырьё, содержащее конденсированные дубильные вещества, может применяться как антиоксидант. Кроме того, установлено, что гидролизуемые и конденсированные дубильные вещества проявляют высокую Р-витаминную активность, антигипоксическое и антисклеротическое действие. Конденсированные дубильные вещества проявляют противоопухолевый эффект, они способны гасить цепные свободнорадикальные реакции, что объясняет их определённую эффективность в химиотерапии рака. Причём в больших дозах танниды проявляют противоопухолевое действие, в средних дозах -радиосенсибилизирующее, а в малых - противолучевое.

Сырье и препараты, содержащие дубильные вещества, применяются наружно и внутрь как вяжущие, противовоспалительные, бактерицидные и кровоостанавливающие средства. Действие основано на способности дубильных веществ связываться с белками с образованием плотных альбуминатов.

При соприкосновении с воспаленной слизистой оболочкой или раневой поверхностью образуются тонкая поверхностная пленка, защищающая от раздражения чувствительные нервные окончания. Происходит уплотнение клеточных мембран, сужение кровеносных сосудов, уменьшается выделение экссудатов, что приводит к уменьшению воспалительного процесса.

Благодаря способности дубильных веществ образовывать осадки с алкалоидами, сердечными гликозидами, солями тяжелых металлов их используют как антидоты при отравлении этими веществами.

Наружно при заболеваниях полости рта, зева, гортани (стоматиты, гингивиты, фарингиты, ангины), а также при ожогах применяют отвары коры дуба, корневищ бадана, змеевика, лапчатки, корневищ и корней кровохлебки, и препарат «Альтан».

Внутрь при желудочно-кишечных заболеваниях (колитах, энтероколитах, поносах, дизентерии) применяют препараты танина («Танальбин», «Тансал», «Альтан», отвары плодов черники, черемухи (особенно в детской практике»), соплодий ольхи, корневищ бадана, змеевика, лапчатки, корневищ и корней кровохлебки.

Как кровоостанавливающие средства при маточных, желудочных и геморроидальных кровотечениях применяют отвары коры калины, корневищ и корней кровохлебки, корневищ лапчатки, соплодий ольхи.

Отвары готовят в соотношении 1: 5 или 1: 10. Нельзя применять сильно концентрированные отвары, так как при этом, пленка альбуминатов высыхает, появляются трещины и возникает вторичный воспалительный процесс.

Экспериментально установлено противоопухолевое действие дубильных веществ водного экстракта экзокарпия плодов гранатника (при лимфосаркоме, саркоме и других заболеваниях) и препарата «Ханерол», полученного основе соцветий кипрея обыкновенного (Иван-чай) при раке желудка и легких.

Дубильные вещества можно использовать как противоядия при отравлении гликозидами, алкалоидами и солями тяжёлых металлов.

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2. 1. Объекты исследования

На территории Воронежской области наиболее часто встречаются семейства растений, содержащих дубильные вещества: Буковые - Fagaceae, (дуб черешчатый - Quercus robur), Астровые - Asteraceae (череда трехраздельная - Bidens tripartita), семейства Розовые - Rosaceae обыкновенная - Padus avium), Ивовые - Salicaceae (Ива белая - Salix alba), гераниевых - Geraniaceae (герань леснаая - Geranium sylvaticum) и др.

В данной работе в качестве объектов исследования были выбраны такие лекарственные растения, как дуб обыкновенный (Quercus robur) и череда трехраздельная (Bidens tripartita).

1) Дуб черешчатый (обыкновенный) - Quercus robur L. (рис. 1) Используемое сырье - кора дуба (Cortex Quercus).

Семейство буковые - Fagaceae

Рис. 1. Дуб черешчатый

Ботаническая характеристика. Дуб черешчатый - дерево высотой до 40 м, с широкой, раскидистой кроной, стволом до 7 м в диаметре, темно-коричневой корой. Листья обратно-яйцевидные, перисто-лопастные, с опадающими прилистниками, кожистые, сверху блестящие, снизу светло-зеленые, короткочерешковые; распускаются позднее, чем у многих древесных пород. Цветение дуба начинается с 50-летнего возраста. Цветет одновременно с распусканием листьев. Цветки однополые: мужские - в повислых кистях-сережках, женские - сидячие, по 1 -2, с многочисленными чешуйчатыми обвертками. Плод - односемянный желудь, сидит в плюске на длинной плодоножке. Деревья, растущие свободно, плодоносят ежегодно, в лесу - через 4-8 лет. Цветет в мае, плоды созревают в сентябре.

Распространение. Европейская часть страны. На севере доходит до Санкт-Петербурга и Вологды, восточная граница распространения - Урал. В Сибири не растет. На Дальнем Востоке, в Крыму и на Кавказе встречаются другие виды. Дуб черешчатый - основная порода широколиственных лесов.

Местообитание. В лесостепных и степных зонах на юго-востоке образует леса на водоразделах и по балкам. Растет обычно на удобренной и влажной почве, но встречается также на довольно сухих почвах. Иногда образует обширные дубовые леса.

Заготовка. Кора заготавливается ранней весной, во время сокодвижения, когда она легко отделяется от древесины, на местах рубок с ветвей и молодых стволов до распускания листьев. Стволы старых деревьев, как правило, покрыты толстым пробковым слоем с трещинами. Кора таких деревьев непригодна к заготовке. В молодой коре значительно больше дубильных веществ. Для снятия коры делают кольцевые надрезы ножом на расстоянии 3035 см один от другого, а затем соединяют их продольными разрезами. Целесообразно проводить поиски аналогов дуба.

Охранные мероприятия. Заготовка ведется с разрешения лесничества в специально отведенных местах. Дуб растет медленно.

Сушка. В тени, под навесом или в хорошо проветриваемом помещении. Нужно следить, чтобы в сырье не попала дождевая вода, так как подмоченная кора теряет значительное количество дубильных веществ. При сушке кору перевертывают; к вечеру заносят в помещения. Перед упаковкой (кору связывают в пучки) просматривают высушенное сырье, удаляют кору с остатками древесины, покрытую мхом.

Внешние признаки. Трубчатые желобоватые куски или узкие полоски различной длины, но не менее 3 см, толщиной около 2-3 мм, но не более 6 мм. Наружная поверхность коры светло-бурая или светло-серая, серебристая ("зеркальная"), реже матовая, гладкая или слегка морщинистая, но без трещин. Часто заметны поперечно вытянутые чечевички, внутренняя поверхность желтовато- или красновато-бурая с многочисленными продольными тонкими выдающимися ребрышками. Излом наружной коры зернистый, ровный, внутренней - сильно волокнистый, "занозистый". Сухая кора без запаха, но при смачивании водой появляется своеобразный запах. Вкус сильновяжущий. При смачивании внутренней поверхности коры раствором железоаммониевых квасцов появляется черно-синее окрашивание (дубильные вещества). Снижают качество сырья старая кора (толще 6 мм), потемневшие куски и куски короче 3 см, органические примеси.

На микроскопии - бурая пробка, механический пояс, каменистые клетки большими группами, лубяные волокна с кристаллоносной обкладкой, сердцевинные лучи (на поперечном срезе).

Возможные примеси. Кора ясеня - Fraxinus excelsior L. - матовая, серая, легко отличается по морфолого-анатомическим признакам. Под микроскопом виден прерывистый механический пояс с незначительным числом каменистых клеток. Волокна без кристаллоносной обкладки.

Химический состав. Кора содержит 10-20% дубильных веществ (по ГФ XI требуется не менее 8%) - производных галловой и эллаговой кислот; 13-14% пентозанов; до 6% пектиновых веществ; кверцетин и сахара.

Хранение. В сухих, хорошо проветриваемых помещениях, упаковав в тюки по 100 кг. Срок хранения до 5 лет.

Фармакологические свойства. Отвары коры дуба обладают вяжущими, денатурирующими белки свойствами, что обеспечивает противовоспалительное действие при наружном и внутреннем применении.

При экспериментальных исследованиях действия отваров коры дуба, введенных в желудок, обнаружено усиление моторики желудка, уменьшение сокоотделения, снижение ферментативной активности и кислотности желудочного содержимого, замедление всасывания слизистой оболочкой желудка.

Все части растения оказывают дезинфицирующее действие. Галловая кислота и ее производные обладают широкой фармакологической активностью, аналогичной действию биофлавоноидов: уплотняют сосудисто-тканевые мембраны, повышают их прочность и снижают проницаемость, обладают противолучевым и антигеморрагическим свойством.

Противомикробное и противопротозойное действие связано как с производными галловой кислоты, так и с наличием катехинов.

Водный отвар желудей дуба, очищенных от кожуры, и настойка 1: 5 и 1: 10 на спирте (с удаленным спиртом) у кроликов с аллоксановым диабетом снижают содержание сахара в крови, увеличивают количество гликогена в печени и в сердечной мышце.

Применение. Отвары коры дуба (1: 10) применяют при острых и хронических воспалительных заболеваниях полости рта в виде полосканий, аппликаций на десны при стоматитах, гингивитах и т. д.

Как противоядие при отравлениях солями тяжелых металлов, алкалоидами, грибами, беленой, дурманом, при пищевых токсикоинфекциях и других отравлениях применяют 20% отвар коры дуба для повторных промываний желудка .

При ожогах и отморожениях также используют 20% отвар коры дуба в виде аппликаций салфеток, смоченных холодным отваром, на пораженные места в первые сутки. При заболеваниях кожи, сопровождающихся мокнутием, при детских диатезах отвар коры дуба применяют в виде общих или местных ванн, обмываний, аппликаций; при потливости стоп рекомендуют местные ванночки из 10% отвара коры дуба или отвара коры дуба пополам с отваром шалфея. При гинекологических заболеваниях (кольпиты, вульвовагиниты, опущение стенок влагалища, выпадение влагалища и матки, эрозии шейки матки и стенок влагалища) назначают спринцевания 10% отваром.

Реже кору дуба используют при гастроэнтероколитах, дизентерии, небольших желудочно-кишечных кровотечениях (внутрь 10% отвар), при проктитах, парапроктитах, трещинах заднего прохода, геморрое, выпадении прямой кишки (лечебные клизмы, обмывания, аппликации, сидячие ванны).

Отвар коры дуба (Decoctum corticis Quercus) готовят в соотношении 1: 10. Кору измельчают до величины частиц не более 3 мм, помещают в эмалированную посуду, заливают горячей кипяченой водой, закрывают крышкой, нагревают на кипящей водяной бане при частом помешивании в течение 30 минут, охлаждают 10 мин, процеживают, отжимают, объем полученного отвара доливают кипяченой водой до 200 мл.

В аптеке, из ЛП, содержащих кору дуба, встречаются «Дуба кора» и стоматологический гель «Витадент».

«Витадент» используется для лечения и профилактики воспалительных заболеваний полости рта и пародонта.

«Дуба кора» применяется для лечения стоматита, гингивита, тонзиллита, фарингита, устранения и профилактики неприятного запах изо рта; при ожогах, отморожениях, инфицированных ранах, пролежнях, мозолях.

2) Череда трехраздельная - Bidens tripartita

Используемое сырье - трава череды (Herba Bidentis) (рис. 2)

Рис. 2. Череда трехраздельная

Ботаническая характеристика. Однолетнее травянистое растение высотой от 15 до 100 см. Корни стержневые, разветвленные. Стебель круглый, супротивно-ветвящийся. Листья короткочерешковые, трехраздельные, с более крупной по краю ланцетной и пильчатой средней долей, расположены супротивно. Корзинки, чаще одиночные на концах веток, обертка двухрядная. Цветки трубчатые грязновато-желтые. Плод - семянка клиновидная, сплюснутая, длиной 6-8 мм, с двумя "цепкими" остями на верхушке. Цветет с июня по сентябрь, плодоносит в августе-сентябре. Возможная примесь -другие, вместе растущие, виды череды. Изучены и подтверждаются лечебные свойства череды лучистой и поникшей, но они пока не заготовляются, так же как и посконник.

Распространение. Повсеместно, кроме Крайнего Севера.

Местообитание. Растение влаголюбивое. Растет в сырых местах, по болотам, берегам рек и ручьев, на огородах как сорняк.

Заготовка. Траву или листья длиной до 15 см срезают или ощипывают в фазе вегетации до образования бутонов. В более поздние сроки собирают только боковые побеги. Сырье очищают от грубых цветоносных стеблей. На плантациях применяют механизированный сбор облиственных стеблей череды.

Семейство астровые - Asteraceae

Охранные мероприятия. Растение культивируется. При заготовке на лугах не следует вытаптывать череду и травяной покров.

Сушка. В сушилках естественного тепла. Сырье раскладывают слоем 5-7 см. Конец сушки определяют по ломкости черешков и стеблей. Выход сухого сырья 25%. В начале сушки сырье следует ежедневно переворачивать. При искусственной сушке допускается температура до 35-40°С.

Внешние признаки. По ГФ XI сырье состоит из верхних олиственных стеблей длиной до 15 см, с бутонами или без них. Цвет темно-зеленый. Запах своеобразный, усиливающийся при растирании. Вкус вяжуще-горьковатый. Снижают качество сырья примеси в виде стеблей длиннее 15 см, побуревших частей и частей других растений, семян. Подлинность сырья определяется по внешним признакам и микроскопически. Характерны многоклеточные волоски двух типов: гусеничные - состоят из 9-12 (до 18) коротких, с тонкими оболочками клеток, у основания волоска лежит вытянутая крупная клетка, покрытая складчатой кутикулой; более крупные волоски с толстыми оболочками - основание волоска многоклеточное, часто клетки располагаются в 2-3 ряда; конечная клетка заостренная; поверхность волосков с продольными складками кутикулы.

Химический состав. Трава содержит эфирное масло, флавоноиды, производные коричной кислоты, дубильные вещества с большим содержанием фракции полифенолов (наибольшее количество в фазе бутонизации), полисахариды (2, 46%, ГФ XI не менее 3, 5%), каротиноиды и каротин (накапливаются ко времени цветения до 50-60 мг% в верхушках), аскорбиновую кислоту (во время цветения до 950 мг%), кумарины, халконы. Растение способно накапливать марганец.

Хранение. В сухом месте, упакованным в тюки, кипы или мешки. Срок годности 3 года.

Фармакологические свойства. Настойка череды, введенная в вену животного, обладает седативными свойствами, понижает аретриальное давление (АД), одновременно несколько увеличивает амплитуду сердечных сокращений. В экспериментах обнаружены антиаллергические свойства препаратов череды, которые объясняют высоким содержанием в растении аскорбиновой кислоты, стимулирующей функцию надпочечников и оказывающей разностороннее влияние на обменные процессы в организме. Антиаллергическое действие проявляется ослаблением симптомов экспериментального анафилактического шока и задержкой развития феномена Артюса у животных. При удалении гипофиза у экспериментальных животных антиаллергического действия череды не отмечено.

Комплекс флавоноидов и полисахаридов, череды трехраздельной, поникшей и лучевой обладает истинным холеретическим свойством. Комбинация флавоноидов и полисахаридов череды поникшей в эксперименте превосходит фламин по стимулирующему действию на холатосинтезирующую функцию, увеличивает содержание конъюгированных желчных кислот и показатель холатохолестеринового коэффициента желчи. Флавоноидам присущи гепатозащитные свойства, которые включают холеретическое, холатостимулирующее, противовоспалительное и капилляроукрепляющие компоненты. Сочетание в череде флавоноидов и водорастворимых полисахаридов способствует улучшению всасываемости растительного комплекса череды и повышению его активности. В эксперименте флавоноиды череды трехраздельной и поникшей устраняли действие гепатотропных ядов, восстанавливали секрецию желчи и уровень холатов до контрольных цифр. На обмен веществ влияют и ионы марганца, найденные в растении. Они входят в состав различных ферментных систем, влияют на процессы кроветворения, функцию печеночной клетки, тонус стенок сосудов, желчных ходов, способны предупреждать образование внутрисосудистых тромбов.

Эфирные экстракты из череды в эксперименте оказывают противомикробное действие в отношении грамположительных бактерий и некоторых патогенных грибов. Флавоноидные соединения череды (флавоны и халконы) обладают бактериостатическим и инсектицидным свойством.

Противомикробные и противовоспалительные свойства препаратов череды связаны также с дубильными веществами, в составе которых преобладают простейшие по строению полифенолы, обладающие более выраженными противомикробными свойствами, чем дубильные вещества типа танинов.

Выраженные противомикробные свойства череды связаны, кроме того, с большим содержанием марганца в ее препаратах.

Препараты череды при местном применении улучшают трофику тканей; при термическом ожоге у животных спиртовые экстракты череды оказывают противовоспалительное и защитное действие.

Применение. Череда относится к древнейшим народным ЛС. Внутрь череду принимают как мочегонное, потогонное и жаропонижающее средство в виде настоев и "чаев".

При заболеваниях почек и мочевыводящих путей рекомендуется следующий лекарственный сбор: череды 2 части, толокнянки 3 части, березовых почек 1 часть. Из сбора готовят отвар.

Череду применяют при псориазе, микробной экземе, эпидермофитии, гнездном облысении. При псориазе череду принимают внутрь в виде настоя (20, 0: 200, 0). Принимают настой по 1/4 стакана 2-3 раза в день.

При крапивнице применяют лекарственный сбор, в который входят трава череды, листья крапивы, трава (или цветки) тысячелистника, листья черной смородины, корни лопуха и листья земляники. Для приготовления настоя берут по 1 столовой ложке каждого растения и заливают 1 л холодной воды, кипятят на слабом огне 10 мин, процеживают и принимают по 2 столовые ложки каждый час до исчезновения высыпаний.

Смесь череды, листьев крапивы, цветков тысячелистника, листьев черной смородины по 10 г, травы трехцветной фиалки (20 г), корня лопуха (15 г) и листьев земляники (15 г) используют при кожных заболеваниях в виде отвара (1 столовая ложка сбора на 200 мл воды).

При кожных заболеваниях (диатез) и рахите череду применяют также в виде настоя (из 10-30 г травы) для ванны. Настой выливают в ванну и добавляют 100 г поваренной или морской соли. Температура воды в ванне 37-38°С. При мокнущих экземах и диатезах назначают общие и местные ванны с травой череды, дубовой корой и цветками ромашки. Берут по 1 столовой ложке каждого растения, настаивают в 1 л холодной воды 10-12 ч. Затем доводят до кипения, процеживают и выливают настой в ванну (для детской ванны 10 л воды, температура 37-38°С). При купании больного с экссудативным диатезом и кожными высыпаниями концентрацию череды можно увеличить в 2-3 раза. При всех видах локальных зудящих дерматозов используют местные ванны (например, для конечностей; сидячие ванны при зуде промежности у больных сахарным диабетом, при геморрое). При зуде в области спины, шеи, подмышечной и паховой областях можно рекомендовать аппликации распаренной травы череды или компрессы с крепкими настоями. При нейродермитах, сопровождающихся выраженным зудом, настой череды применяют в виде аппликаций с местноанестезирующими веществами (новокаин, анестезин). При мокнущих диатезах у детей смачивают ткань отваром череды и накладывают на кожу, меняя примочки 5-6 раз в день. При явлениях воспаления примочки применяют холодными.

Наружно череду применяют также при лечении гнойных ран, трофических язв с признаками воспаления. Череда подсушивает раневую поверхность и способствует более быстрому заживлению пораженных участков кожи. Череда используется для приготовления ванночек, примочек и обтираний при микробной экземе стоп, эпидермофитии (лучшие результаты получены при лечении интертригинозной формы эпидермофитии).

Череду применяют как косметическое средство при угрях, себорее. Отваром череды умываются, делают косметические маски.

Настой травы череды (Infusum herbae Bidentis): 10 г травы помещают в эмалированную посуду, заливают 200 мл воды комнатной температуры, накрывают крышкой, нагревают на кипящей водяной бане при частом помешивании в течение 15 мин, охлаждают при комнатной температуре 45 мин, процеживают, добавляют воды до 200 мл. Принимают по 1 столовой ложке 2-3 раза в день.

В качестве ЛС встречается «Череды трава», выпускаемая в двух видах: измельченная и в фильтр-пакетах. К ЛП, содержащим траву череды относятся Элекасол, Бруснивер.

Бруснивер - препарат растительного происхождения, обладает диуретическим, противомикробным и противовоспалительным действием, применяемый при заболеваниях мочеполовых органов и прямой кишки.

Элекасол - комбинированный препарат растительного происхождения, оказывает противомикробное и противовоспалительное действие. Активен в отношении стафилококков, кишечной палочки, синегнойной палочки, протея. Стимулирует репаративные процессы. Применяется в комплексной терапии заболеваний дыхательных путей и ЛОР-органов (хронический тонзиллит, острый ларингофарингит, острый и хронический фарингит, трахеит, бронхит); в стоматологии (острый и рецидивирующий афтозный стоматит, красный плоский лишай слизистой оболочки полости рта, пародонтит); в гастроэнтерологии (хронический гастродуоденит, энтерит, колит, энтероколит); в дерматологии (микробная экзема, нейродермит, розовые угри, вульгарные угри); в гинекологии (неспецифические воспалительные заболевания влагалища и шейки матки, в т. ч. кольпит, цервицит, состояния после диатермо-и криодеструкции эрозии шейки матки); в урологии (хронический пиелонефрит, хронический цистит, уретрит, хронический простатит).

2. 2. Техника микроскопического исследования лекарственного растительного сырья

Для подтверждения подлинности сырья проводилось микроскопическое исследование ЛРС.

Микроскопическое исследование образцов проводили с использованием биологического микроскопа Motic BA 600 («Motic», страна-производитель Испания)

Микроскоп оборудован бинокулярной головной частью, широкопольными окулярами WF 10х/18, 4-х гнездной револьверной головкой, механическим предметным столиком с возможностью перемещения препарата в диапазоне 75х35 мм в направлении Х и Y, соответственно, с точностью 0. 1 мм, что позволяет выбирать оптимальное положение наблюдаемого объекта, имеет раздельную грубую и точную фокусировку. В стандартной комплектации применяется цифровая цветная 12-битная камера Motic Pro 285A. Микропрепарат представляется в виде виртуального препарата (графического файла).

Автоматическое цифровое сканирование биологических микропрепаратов осуществлялось с помощью программного обеспечения Motic Educator.

Растительный материал, отобранный для микроскопического изучения, помещают в пробирку и проводят его обработку для просветления: растительный материал заливают 2-3% раствором едкого натра (или водой очищенной) и кипятят в течение 1-2 мин. После этого жидкость осторожно сливают, а материал тщательно промывают водой и помещают в чашку Петри.

Кусочки сырья вынимают из воды с помощью скальпеля (или лопаточки) и препаровальной иглы и помещают на предметное стекло в каплю раствора глицерина или воды.

На предметном стекле его кусочек 4 мм разделяют скальпелем или препаровальной иглой на две части; одну из них осторожно переворачивают, чтобы получить возможность наблюдать сырье под микроскопом с верхней и нижней сторон.

Стекла, используемые для приготовления микропрепаратов, должны быть чистыми и сухими. Препарат на предметном стекле накрывают покровным стеклом. При неосторожном накладывании покровного стекла в препарате часто образуются пузырьки воздуха, поэтому стекло следует класть наклонно, прикоснувшись сначала одним краем к жидкости, а затем, придерживая стекло иглой, положить полностью. Попавшие пузырьки воздуха можно удалить легким постукиванием по покровному стеклу тупым концом препаровальной иглы или слегка подогреть над пламенем горелки. После охлаждения рассматривают под микроскопом, сначала при малом, затем при большом увеличении.

Если включающая жидкость не заполняет всего пространства между предметным и покровным стеклом или она испарилась при нагревании препарата, то ее добавляют сбоку небольшими каплями. Если наоборот, покровное стекло свободно плавает вследствие избыточного количества жидкости, то ее следует отсосать при помощи полоски фильтровальной бумаги, подведенной сбоку.

При приготовлении микропрепарата из толстых листьев предварительно раздавливают скальпелем толстые жилки, а с пластинки стараются снять эпидермис или, размяв лист, отделяют мезофилл от эпидермиса, чтобы препарат был более тонким .

2. 3. Спектрофотометрический метод исследования

Для сравнительной оценки содержания дубильных веществ в ЛСР использовался метод спектрофотометрии . Определение проводили на спектрофотометре «UNICO - 2800».

При определении наблюдался максимум поглощения водно-спиртового извлечения из сырья при длинне волны 276±2 нм. Этот показатель соответствует максимуму поглощения танина, что дало возможность использовать длину волны 276±2 нм как аналитический показатель присутствия дубильных веществ в сырье. В процессе спектрофотометрического определения дубильных веществ в коре дуба обыкновенного было выявлено суммарное содержание дубильных веществ в ЛРС .

Около 0, 8 г (точная навеска) измельченного до размера частиц 2 мм сырья заливали 100 мл воды и нагревали на кипящей бане в течении 30 мин с последующим 30-минутным отстаиванием при комнатной температуре. полученное извлечение фильтровали через складчатый бумажный фильтр в колбу емкостью 100 мл, и доводили водой до метки .

5 мл полученного извлечения помещали в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводили водой до метки спиртом этиловым 70%. Измеряли оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре кювете толщиной слоя 10 мм при длине волны от 274, 5 до 277, 5 нм относительно спирта этилового. Параллельно измеряли оптическую плотность образца танина .

где M CT - масса танина; M x - масса сырья; D CT - оптическая плотность раствора СО танина; Dx - оптическая плотность исследуемого раствора.

Спектрофотометрическое определение содержания дубильных веществ в коре дубе проводилось на двух видах сырья: свежесобранном (дата сбора -05. 05. 13г, сбор проводился на расстоянии 70 км от города оренбурга) и готовом ЛРС 9производитель ОАО «Красногорсклексредства». дта изготовления -01. 04. 2009г)

ГЛАВА 3. СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ СОДЕРЖАНИЯ ДУБИЛЬНЫХ ВЕЩЕСТВ В СВЕЖЕСОБРАННОМ И ГОТОВОМ ЛЕКАРСТЕННОМ РАСТИТЕЛЬНОМ СЫРЬЕ

Был проведен микроскопический анализ ЛРС дуба обыкновенного и череды трехраздельной.

На поперечном срезе коры дуба виден бурый пробковый слой из многочисленных рядов клеток. В наружной коре находятся друзы кальция оксалата, группы каменистых клеток и имеющий диагностическое значение так называемый механический пояс, тангенциально расположенный на некотором расстоянии от пробки и состоящий из чередующихся групп лубяных волокон и каменистых клеток. В наружной коре по направлению от пояса внутрь разбросаны группы волокон и каменистых клеток. Некоторые клетки паренхимы содержат флобафены в виде включений красно-бурого цвета. Во внутренней коре заметны многочисленные тангенциально вытянутые группы лубяных волокон с кристаллоносной обкладкой, расположенные параллельными концентрическими поясами. Между группами волокон проходят однорядные сердцевинные лучи, реже встречаются более широкие лучи, которые близ камбия содержат группы каменистых клеток, что обусловливает при высыхании образование продольных ребер, видимых на внутренней поверхности коры (рис. 3). Порошок характеризуется наличием многочисленных обрывков групп волокон с кристаллоносной обкладкой и группами каменистых клеток, видны кусочки бурой пробки; изредка встречаются друзы кальция оксалата; содержимое паренхимных клеток окрашивается раствором квасцов железоаммонийных в черно-синий цвет.

Рис. 3. Микроскопия коры дуба (фрагмент поперечного среза):

1 - пробка; 2 - колленхима; 3 - друза кальция оксалата; 4 - механический пояс;

5 - каменистые клетки; 6 - лубяные волокна с кристаллоносной обкладкой; 7 - сердцевинный луч.

При рассмотрении листа череды трехраздельной с поверхности виден эпидермис верхней и нижней стороны с извилистыми стенками. Устьица многочисленные, окружены 3-5 клетками эпидермиса (аномоцитный тип). По всей пластинке листа встречаются простые «гусеницеобразные» волоски с тонкими стенками, состоящие из 9-12 клеток, иногда заполненных бурым содержимым; на нижней клетке волоска хорошо выражена продольная складчатость кутикулы. По краю листа и жилкам встречаются простые волоски с толстыми стенками и продольной складчатостью кутикулы, состоящие из 213 клеток. У основания таких волосков лежат несколько клеток эпидермиса, слегка приподнимающихся над поверхностью листа. Вдоль жилок проходят секреторные ходы с красновато-бурым содержимым, особенно хорошо заметные по краю листа (рис. 4).

Рис. 4. Микроскопия листа череды трехраздельной: А - эпидермис верхней стороны листа; Б - эпидермис нижней стороны листа; В - край листа: 1 - волоски; 2 - толстостенные

волоски; 3 - секреторные ходы.

Результаты спектрофотометрического определения количественного содержания дубильных веществ в сырье дуба обыкновенного представлены на рис. 5 и табл. 2.

Рис. 5. Спектры поглощения растворов в 70% спирте этиловом:

1 - водного извлечения из свежесобранного ЛРС; 2 - водного извлечения из готового ЛРС.

Таблица 2.

Спектрофотометрическое определение содержания дубильных веществ в траве череды трехраздельной проводилось на двух видах сырья: свежесобранном (дата сбора - 21. 05. 13г, сбор проводился на расстоянии 70 км от города оренбурга) и готовом ЛРС (производитель ООО «Фито-Бот», дата изготовления - 01. 02. 2011г)

Результаты спектрофотометрического определения количественного содержания дубильных веществ в сырье череды трехраздельной представлены на рис. 6 и табл. 3.

Рис. 6. Спектры поглощения растворов в 70%спирте этиловом: 1 - водного извлечения из свежесобранного ЛРС; 2 - водного извлечения из готового ЛРС.

Таким образом видно, что содержание дубильных веществ в свежесобранном и готовом ЛРС одно и того же вида растения отличаются. И хотя оба показателя отвечают требования нормативной документации (НД), в свежесобранном ЛРС содержание дубильных веществ выше. Различия в значения можно объяснить влиянием условий заготовки, сушки и хранения ЛРС, так как под влиянием различных факторов (свет, температура, влажность и тд.) происходят окисление и гидролиз дубильных веществ, что отражается на количественном содержании дубильных веществ в сырье.

Таблица 3.

ВЫВОДЫ

1. Дубильные вещества - это безазотистые неядовитые, обычно аморфные соединения, многие из них хорошо растворимы в воде и спирте, обладают сильно вяжущим вкусом. На территории Оренбургской области наиболее часто встречаются семейства растений, содержащих дубильные вещества: Буковые - Fagaceae, (дуб черешчатый - Quercus robur), Астровые-Asteraceae (череда трехраздельная - Bidens tripartita), семейства Розовые -Rosaceae обыкновенная - Padus avium), Ивовые - Salicaceae (Ива белая - Salix alba), гераниевых - Geraniaceae (герань леснаая - Geranium sylvaticum) и др.

Из вышеперечисленных растений наибольшее внимание следует уделить таким лекарственные растениям, как дуб обыкновенный (Quercus robur) и череда трехраздельная (Bidens tripartita), так как они наиболее часто встречается как в свежем виде, так и в качестве готового ЛРС.

2. Показатели содержания дубильных веществ в сырье, полученные в ходе исследования, отвечают требования НД.

3. На основании проведенного исследования можно сделать вывод, что в свежесобранном растительном сырье содержание дубильных веществ выше, чем в готовом ЛРС.

4. Различия в значения можно объяснить влиянием условий заготовки, сушки и хранения ЛРС, так как под влиянием различных факторов (свет, температура, влажность и тд.) происходят окисление и гидролиз дубильных веществ, что отражается на количественном содержании дубильных веществ в сырье.

5. Для повышения качества лечения и профилактики различных заболеваний, при которых используются ЛП, содержащие дубильные вещества, эффективнее будет использовать отвары и настои из свежесобранного сырья.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Брезгин Н. Н. Лекарственные растения Верхневолжья. - Ярославль, 1984, 224 с.

2. ГОСТ 24027. 2-80 Сырье лекартсвенное растительное. методы определения влажности, содржания золы, экстрактивных и дубильных веществ, эфирного масла 06. 03. 1980

3. Данилова Н. А., Попова ДМ. Количественное определение дубильныхвеществ в корнях щавеля конского методом спектрофотомерии в сравнении с методом перманганатометрии. Вестник ВГУ. Серия: Химия. Биология. Фармация. 2004. № 2. с. 179-182. RU 2127878 C1, 20. 03. 1999.

4. Дикорастущие полезные растения России / Отв. ред. А. Л. Буданцев, Е. Е. Лесиовская. - СПб.: Издательство СПХФА, 2001. - 664 с.

5. Куркин В. А. Фармакогнозия: Учебник для студентов фармацевтических вузов. - Самара: ООО «Офорт», ГОУВПО «СамГМУ», 2004. - 1200 с.

6. Ковалев В. Н. Практикум по фармакогнозии. Учеб. пособие для студ. вузов: -М., Изд-во НФаУ; Золотые страницы, 2003. - 512 с.

7. Лекарственное растительное сырье. Фармакогнозия: Учебное пособие / Под ред. Г. П. Яковлева и К. Ф. Блиновой. - СПб.: СпецЛит, 2004. - 765 с.

8. Лекарственное сырье растительного и животного происхождения. Фармакогнозия: учеб. пособие/ Под. ред. Г. П. Яковлева. - СПб.: СпецЛит, 2006. - 845 с.

9. Материалы сайта http: //med-tutorial. ru

10. Материалы сайта http: //medencped. ru

11. Муравьева Д. А. Фармакогнозия: Учебник / Д. А. Муравьева, И. А. Самылина, Г. П. Яковлев. - М.: Медицина, 2002. - 656с.

12. Носаль М. А., Носаль И. М. Лекарственные растения в народной медицине. Москва СП «Внешиберика» 1991. -573 с.

13. Практикум по фармакогнозии: Учеб. пособие для вузов / В. Н. Ковалев, Н. В. Попова, В. С. Кисличенко и др.; Под общ. ред. В. Н. Ковалева. - Харьков: Изд-во НфаУ: Золотые страницы: МТК - Книга, 2004. - 512 с.

14. Руководство по методам контроля качества и безопасности биологически активных добавок к пище. Руководство. Р 4. 1. 1672-03. - М., 2003, c. 120.

15. Соколов С. Я., Замотаев И. П. Справочник по лекарственным растениям. -М.: Просвещение, 1984.

16. Справочник пособие Н. И. Гринкевич. Лекарственные растения. -М.: Высшая школа, 1991.

Скачать диплом: У вас нет доступа к скачиванию файлов с нашего сервера.

ГОСТ 24027.2-80

Группа Р69

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

СЫРЬЕ ЛЕКАРСТВЕННОЕ РАСТИТЕЛЬНОЕ

Методы определения влажности, содержания золы, экстрактивных и дубильных веществ, эфирного масла

Methods for determination of moisture, ash content, extractive and tannin materials, essential oil

Дата введения 1981-01-01

Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 6 марта 1980 г. N 1038 срок введения установлен с 01.01.81

Ограничение срока действия снято по протоколу N 5-94 Межгосударственного Совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС 11-12-94)

ВЗАМЕН ГОСТ 6076-74 в части методов определения влажности, содержания золы, экстрактивных и дубильных веществ, эфирного масла

ПЕРЕИЗДАНИЕ.


Настоящий стандарт распространяется на лекарственное растительное сырье и устанавливает методы определения влажности, содержания золы, экстрактивных, дубильных веществ и эфирного масла.

1. МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВЛАЖНОСТИ

1.1. Метод определения влажности основан на определении потери в массе за счет гигроскопической влаги и летучих веществ при высушивании сырья до абсолютно сухого состояния.

1.2. Отбор проб

1.2.1. Отбор проб - по ГОСТ 24027.0-80 .

1.3. Аппаратура, материалы и реактивы



шкаф сушильный лабораторный по НД;

весы лабораторные по ГОСТ 24104-88 *;
______________
ГОСТ Р 53228-2008

весы аналитические по ГОСТ 24104-88 ;

разновесы по ГОСТ 7328-82 *;
______________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ 7328-2001 , здесь и далее по тексту. - Примечание изготовителя базы данных.

эксикатор по ГОСТ 25336-82 ;

совочек;

ножницы;

стаканчики для взвешивания (бюксы) с притертой крышкой по ГОСТ 25336-82 ;

щипцы тигельные;

вазелин технический;

кальций хлористый плавленый по НД.

1.4. Подготовка к испытанию

Аналитическую пробу быстро измельчают ножницами или секатором до размера частиц около 10 мм, перемешивают и берут две навески массой по 3-5 г, взвешенные с погрешностью не более 0,01 г. Каждую навеску помещают в предварительно взвешенную вместе с крышкой и пронумерованную бюксу.

При пересчете содержания золы и действующих веществ на абсолютно сухое сырье определяют потерю в массе при высушивании в пробах, подготовленных для соответствующих испытаний. При этом одновременно с навесками для определения золы и действующих веществ берут две навески сырья массой по 1-2 г, взвешенные с погрешностью не более 0,0005 г.

1.5. Проведение испытания

В сушильный шкаф, нагретый до 100-105 °С, быстро помещают подготовленные бюксы с навесками вместе со снятыми крышками. При этом температура в шкафу падает. Время, в течение которого сырье должно сушиться, отсчитывают с момента, когда температура в шкафу достигает 100-105 °С. Высушивание проводят до постоянной массы.

Постоянная масса считается достигнутой, если разница между двумя последующими взвешиваниями после 30 мин высушивания и 30 мин охлаждения в эксикаторе не превышает 0,01 г.

При пересчете содержания золы и действующих веществ на абсолютно сухое сырье высушивание проводят до тех пор, пока разница между двумя последующими взвешиваниями не будет превышать 0,0005 г.

Первое взвешивание корней, семян, плодов и коры проводят через 3 ч, листьев, цветков и трав - через 2 ч. Бюксы с навесками вынимают из шкафа тигельными щипцами и помещают на 30 мин для охлаждения в эксикатор, на дне которого находится безводный хлористый кальций. Охлажденные бюксы закрывают крышками и взвешивают. Хлористый кальций периодически прокаливают или заменяют новым.

1.6. Обработка результатов

Влажность сырья () в процентах вычисляют по формуле

где - масса сырья до высушивания, г;

Масса сырья после высушивания, г.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, вычисленных до десятых долей процента, допускаемое расхождение между которыми не должно превышать 0,5%.

2. МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ЗОЛЫ

2.1. Метод определения содержания золы основан на определении несгораемого остатка неорганических веществ, остающегося после сжигания и прокаливания сырья. Золу делят на:

золу общую, представляющую собой сумму минеральных веществ, свойственных растению, и посторонних минеральных примесей (земля, песок, камешки, пыль);

золу, нерастворимую в 10%-ной соляной кислоте, представляющую собой остаток после обработки общей золы соляной кислотой и состоящую главным образом из кремнезема.

2.2. Отбор проб

2.2.1. Отбор проб - по ГОСТ 24027.0-80 .

2.3. Аппаратура и реактивы

Для проведения испытания применяют:

весы лабораторные по ГОСТ 24104-88 ;

весы аналитические по ГОСТ 24104-88 ;

разновесы по ГОСТ 7328-82 ;

сито по ТУ 23.2.2068-89;

тигли фарфоровые по ГОСТ 9147-80 ;

кальций хлористый плавленый по НТД;

эксикатор по ГОСТ 25336-82 ;

горелку газовую или электроплитку бытовую по НТД;

печь муфельную;

баню водяную;

стекла часовые;

фильтр беззольный;

кислоту азотную по ГОСТ 4461-77 ;

аммоний азотнокислый, ч.д.а., 10%-ный раствор;

кислоту соляную по ГОСТ 3118-77 , х.ч., 10%-ный раствор;

перекись водорода (пергидроль) по ГОСТ 10929-76 , 5%-ный раствор;

серебро азотнокислое по ГОСТ 1277-75 , ч.д.а., 2%-ный раствор;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72 ;

2.4. Подготовка к испытанию

Аналитическую пробу сырья измельчают и просеивают сквозь сито с отверстиями диаметром 2 мм.

В предварительно прокаленный до постоянной массы фарфоровый тигель берут навеску массой 1-3 г для определения общей золы и 5 г для определения золы, нерастворимой в 10%-ной соляной кислоте. Навеску взвешивают с погрешностью не более 0,0005 г.

2.5. Проведение испытания

Сырье в тигле осторожно обугливают над слабым пламенем газовой горелки, стараясь, чтобы пламя не касалось дна тигля, или на электроплитке. При этом на нее помещают асбестовую сетку. После полного обугливания сырья тигель переносят в муфельную печь для сжигания угля и полного прокаливания остатка. Прокаливание ведут при красном калении (550-650 °С) до постоянной массы, избегая сплавления золы и спекания ее со стенками тигля. По окончании прокаливания, тигель охлаждают в течение 2 ч, затем ставят в эксикатор, на дне которого находится безводный хлористый кальций, охлаждают и взвешивают. Постоянная масса считается достигнутой, если разница между двумя последующими взвешиваниями не превышает 0,0005 г.

Если после охлаждения остаток еще содержит частицы угля, то к нему прибавляют несколько капель 5%-ного раствора перекиси водорода, концентрированной азотной кислоты или 10%-ного раствора азотнокислого аммония, выпаривают под тягой на водяной бане и вновь прокаливают до тех пор, пока остаток примет равномерную окраску. В случае необходимости такую операцию повторяют несколько раз.

Для определения содержания золы, нерастворимой в 10%-ном растворе соляной кислоты, в тигель с общей золой приливают 15 см 10%-ного раствора соляной кислоты (плотность 1,050 г/см); тигель покрывают часовым стеклом и нагревают на кипящей водяной бане в течение 10 мин. Затем тигель снимают и после остывания содержимое фильтруют через беззольный фильтр. Тигель, часовое стекло и фильтр промывают дистиллированной водой до прекращения появления мути в промывных водах от капли 2%-ного раствора нитрата серебра. Фильтр помещают в тигель, высушивают, осторожно сжигают в тигле после чего тигель прокаливают до постоянной массы остатка.

Проводят два параллельных определения.

2.6. Обработка результатов

Содержание общей золы () в процентах в абсолютно сухом сырье вычисляют по формуле

где - масса золы, г;

Масса сырья, г;


Содержание золы, не растворимой в 10%-ном растворе соляной кислоты (), в процентах в абсолютно сухом сырье вычисляют по формуле

где - масса золы, г;

- масса золы фильтра (если золы последнего более 0,002 г);

- масса сырья, г;

- потеря в массе при высушивании сырья, %.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, вычисленных до сотых долей процента для сырья с содержанием золы (общей или нерастворимой) не более 5% и до десятых долей процента - для сырья с содержанием золы (общей или нерастворимой) более 5%, допускаемые расхождения между которыми не должны превышать 0,1% для сырья с содержанием общей или нерастворимой золы 5% и 0,5% для сырья с содержанием общей или нерастворимой золы более 5%.

3. МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ЭКСТРАКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ

3.1. Отбор проб

3.1.1. Отбор проб - по ГОСТ 24027.0-80 .

3.2. Аппаратура и материалы

Для проведения испытания применяют:

весы лабораторные по ГОСТ 24104-88 ;

чашки фарфоровые диаметром 7-9 см по ГОСТ 9147-80 ;

баню водяную;

эксикатор по ГОСТ 25336-82 ;

колбу коническую вместимостью 250 см по ГОСТ 25336-82 ;

пипетки вместимостью 25 см по НТД;

холодильник стеклянный лабораторный по ГОСТ 25336-82 ;

сита по ТУ 23.2.2068-89;

мельницу электрическую лабораторную по НТД.

3.3. Подготовка к испытанию

Аналитическую пробу сырья измельчают и просеивают сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм, после чего отбирают навеску массой 1 г.

3.4. Проведение испытания

Навеску сырья помещают в коническую колбу, приливают 50 см растворителя, указанного в нормативно-техническом документе на конкретное сырье, колбу закрывают пробкой, взвешивают с погрешностью не более 0,01 г и оставляют на 1 ч. Затем колбу соединяют с обратным холодильником, нагревают до кипения и поддерживают слабое кипение жидкости в течение 2 ч. После охлаждения колбу с содержимым вновь закрывают той же пробкой, взвешивают и потерю в массе дополняют тем же растворителем. Содержимое тщательно взбалтывают и фильтруют через сухой бумажный фильтр в сухую колбу вместимостью 150-200 см. 25 см фильтрата пипеткой переносят в фарфоровую чашку диаметром 7-9 см, предварительно высушенную при 100-105 °С до постоянной массы и взвешенную на аналитических весах, выпаривают на водяной бане досуха, сушат при температуре 100-105 °С в течение 3 ч, затем охлаждают в течение 30 мин в эксикаторе, на дне которого находится безводный хлористый кальций и взвешивают.

Проводят два параллельных определения.

3.5. Обработка результатов

Содержание экстрактивных веществ () в процентах в абсолютно сухом сырье вычисляют по формуле

где - масса сухого остатка в чашке, г;

- масса сырья, г;

- потеря в массе при высушивании сырья, г.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений.

4. МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ДУБИЛЬНЫХ ВЕЩЕСТВ

4.1. Отбор проб

4.1.1. Отбор проб - по ГОСТ 24027.0-80 .

4.2. Аппаратура, материалы и реактивы

Для проведения испытания применяют:

весы лабораторные по ГОСТ 24104-88 ;

весы аналитические по ГОСТ 24104-88 ;

разновесы по ГОСТ 7328-82 ;

сито по ТУ 23.2.2068-89 с отверстиями диаметром 3 мм;

колбы конические вместимостью 500 и 750 см по ГОСТ 25336-82 ;

баню водяную;

бюретки вместимостью 25-50 см по НТД;

пипетки вместимостью 2, 20, 25 см по НТД;

фильтры стеклянные;

склянки оранжевого стекла с притертыми пробками;

вату медицинскую по ГОСТ 5556-81 ;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72 ;

индиго-5, 6-дисульфокислоты динатриевую соль (индигокармин);

калий йодистый по ГОСТ 4232-74 ;

кислоту серную по ГОСТ 4204-77 ;

кислоту соляную по ГОСТ 3118-77 ;

крахмал растворимый по ГОСТ 10163-76 ;

калий марганцовокислый по ГОСТ 5777-84 ;

натрия тиосульфат кристаллический по ГОСТ 244-76 ;

калий двухромовокислый по ГОСТ 4220-75 , х.ч.;

натрий углекислый безводный по ГОСТ 83-79 , х.ч.;

мельницу электрическую лабораторную по НТД.

4.3. Подготовка к испытанию

Для приготовления 0,1 н. раствора марганцовокислого калия 3,3 г марганцовокислого калия растворяют в 1000 см воды и кипятят в течение 10 мин. Колбу закрывают пробкой, оставляют на двое суток в темном месте, затем фильтруют через стеклянный фильтр.

Для установки титра раствора марганцовокислого калия точно отмеривают из бюретки 25 см приготовленного раствора в склянку с притертой пробкой, содержащую 20 см раствора йодида калия. Подкисляют 2 см разведенной серной кислоты, закрывают пробкой, смоченной раствором йодида калия, и оставляют в течение 10 мин в темном месте. Разбавляют 200 см воды, обмывая пробку водой, и выделившийся йод титруют 0,1 н. раствором тиосульфата натрия до обесцвечивания (индикатор - крахмал).

где - объем раствора тиосульфата натрия, израсходованного на титрование, см;

- объем раствора марганцовокислого калия, взятого для установки титра (25 см);

- поправочный коэффициент раствора тиосульфата натрия.

Для приготовления разведенной серной кислоты к 5 частям воды осторожно приливают 1 часть концентрированной серной кислоты.

Для приготовления раствора йодистого калия 10 г реактива растворяют в свежепрокипяченной и охлажденной воде и разбавляют такой же водой до 100 см. Раствор должен быть бесцветным. Раствор необходимо хранить в банках оранжевого стекла с притертыми пробками в защищенном от света месте.

Для приготовления 0,1 н. раствора тиосульфата натрия 26 г тиосульфата натрия и 0,1 г углекислого натрия растворяют в свежепрокипяченной и охлажденной воде и доводят такой же водой до 1000 см. Раствору дают стоять 10 суток в защищенном от света месте. При наличии осадка жидкость сифонируют.

Титр раствора тиосульфата натрия устанавливают по двухромовокислому калию. Для этого около 0,15 г перекристаллизованного из горячей воды и высушенного при 130-150 °С до постоянной массы мелкорастертого двухромовокислого калия взвешивают с погрешностью не более 0,0002 г и растворяют в 50 см воды в склянке с притертой пробкой. Прибавляют 2 г йодистого калия, растворенного в 10 см воды, 5 см соляной кислоты, закрывают пробкой, смоченной раствором йодистого калия, и оставляют в темном месте в течение 10 мин. Разбавляют 200 см воды, обмывая пробку водой, и титруют приготовленным раствором тиосульфата натрия до зеленовато-желтого окрашивания. Затем приливают 2-3 см раствора крахмала и продолжают титровать до перехода синей окраски в светло-зеленую.

Поправочный коэффициент () вычисляют по формуле

где 0,004904 - количество двухромовокислого калия, содержащегося в 1 см 0,1 н. раствора, г;

- навеска двухромовокислого калия, г;

- объем раствора тиосульфата, см.

Для приготовления индигосульфокислоты 1 г индигокармина растворяют в 25 см концентрированной серной кислоты, затем прибавляют еще 25 см концентрированной серной кислоты и разбавляют дистиллированной водой до 1000 см, осторожно приливая раствор в воду.

От аналитической пробы сырья, измельченного и просеянного сквозь сито с отверстиями диаметром 3 мм, берут навеску массой 2 г с погрешностью не более 0,001 г

4.4. Проведение испытания

Сырье помещают в коническую колбу вместимостью 500 см, заливают 250 см нагретой до кипения воды и нагревают с обратным холодильником на кипящей водяной бане в течение 30 мин при периодическом перемешивании. Жидкость отстаивают, охлаждая до комнатной температуры, и декантируют около 100 см в коническую колбу вместимостью 200-250 см через вату, чтобы частицы сырья не попали в колбу. Затем отбирают пипеткой 25 см полученной жидкости в другую коническую колбу вместимостью 750 см, добавляют 500 см воды, 25 см раствора индигосульфокислоты и титруют при постоянном перемешивании 0,1 н. раствором калия марганцовокислого до золотисто-желтого окрашивания, сравнивая его с окраской раствора контрольного испытания.

Для проведения контрольного испытания в коническую колбу вместимостью 750 см, наливают 525 см дистиллированной воды, добавляют 25 см раствора индигосульфокислоты и титруют при постоянном перемешивании 0,1 н. раствором марганцовокислого калия до золотисто-желтого окрашив

4.5. Обработка результатов

Содержание дубильных веществ () в процентах в абсолютно сухом сырье вычисляют по формуле

где - объем точно 0,1 н. раствора марганцовокислого калия, израсходованного на титрование извлечения, см;

- объем точно 0,1 н. раствора марганцовокислого калия, израсходованного на титрование в контрольном анализе, см;

0,004157 - количество дубильных веществ, соответствующее 1 см точно 0,1 н. раствора марганцовокислого калия (в пересчете на танин), г;

- масса сырья, г;

- потеря в массе при высушивании сырья, %;

250 - вместимость мерной колбы, см;

25 - объем жидкого извлечения, взятого для титрования, см.

5. МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ЭФИРНОГО МАСЛА

5.1. Сущность метода заключается в перегонке из растительного сырья с водяным паром эфирного масла и последующем измерении его объема, выраженного в процентах по отношению к абсолютно сухому сырью.

Определение проводят методом 1, 2а или 2б. Метод 2б используют в тех случаях, когда сырье содержит эфирные масла, которые при перегонке претерпевают изменения, образуют эмульсию, легко загустевают или имеют плотность, близкую к единице или больше единицы.

Масса навески сырья взятого для анализа, степень его измельчения, время перегонки - по нормативно-техническому документу на конкретное растительное сырье.

5.2. Отбор проб

5.2.1. Отбор проб - по ГОСТ 24027.0-80 .

5.3. Определение содержания эфирного масла методом 1 (Гинзбурга)

5.3.1. Аппаратура, материалы и реактивы

Для проведения испытания применяют:

весы лабораторные по ГОСТ 24104-88 ;

мельницу электрическую лабораторную по НТД;

колбу широкогорлую круглодонную вместимостью 1000 см по ГОСТ 25336-82 ;

колбу плоскодонную вместимостью 1000 см по
пробку резиновую;

ножницы;

ацетон по ГОСТ 2603-79 , ч.д.а.

5.3.2. Проведение испытания

Навеску измельченного сырья помещают в широкогорлую круглодонную или плоскодонную колбу, наливают 300 см воды и закрывают резиновой пробкой с обратным шариковым холодильником. В пробке снизу укрепляют металлические крючки, на которые при помощи тонкой проволоки подвешивают градуированный приемник так, чтобы конец холодильника находился точно под воронкообразным расширением приемника на расстоянии около 1 мм, не касаясь его. Приемник должен свободно помещаться в горле колбы, не прикасаясь к стенкам горла, и отстоять от уровня воды не менее чем на 50 мм (черт.1). Колбу с содержимым нагревают до кипения и поддерживают его в течение времени, указанного в нормативно-техническом документе на конкретное сырье.

Черт.1. - Прибор для определения содержания эфирного масла методом 1

Прибор для определения содержания эфирного масла методом 1 (Гинзбурга)

1 - колба; 2 - резиновая пробка; 3 - холодильник; 4 - градуированный приемник

Пары воды и эфирного масла конденсируются в холодильнике и жидкость стекает в приемник. Масло отстаивается в градуированном колене приемника, а вода через меньшее колено приемника вытекает обратно в колбу.

Объем масла в градуированной части приемника определяют после окончания перегонки и охлаждения колбы до комнатной температуры. Прибор после шести-восьми определений промывают ацетоном, затем водой.

5.3.3. Обработка результатов

- масса сырья, г;

- потеря в массе при высушивании сырья, %.

5.4. Определение содержания эфирного масла методом 2а (Клевенджера)
;

электромельницу;

мельницу электрическую лабораторную по НД.

Черт.2. - Прибор для определения содержания эфирного масла методами 2а и 2б

Прибор для определения содержания эфирного масла методами 2а и 2б (Клевенджера)

1 - колба; 2 - паропроводная изогнутая трубка; 3 - холодильник; 4 - градуированный приемник; 5 - спускной кран; 6 - расширение приемника; 7 - боковая трубка приемника; 8 - резиновый шланг; 9 - сливная трубка

5.4.2. Подготовка к испытанию

Перед каждым определением прибор очищают, пропуская пар в течение 15-20 мин.

5.4.3. Проведение испытания

Навеску измельченного растительного сырья помещают в колбу, приливают 300 см воды, колбу соединяют через шлиф с паропроводящей трубкой и заполняют водой градуированную и сливную трубки через кран при помощи резинового шланга, оканчивающегося воронкой. Содержимое колбы нагревают до кипения и кипятят с интенсивностью, при которой скорость стекания дистиллята должна быть 60-65 капель в минуту в течение времени, указанного в нормативно-техническом документе на конкретное сырье. Через 5 мин после окончания перегонки замеряют объем эфирного масла в градуированной части приемника. Для этого открывают кран и спускают часть дистиллята до уровня градуированной трубки.

5.4.4. Обработка результатов

Содержание эфирного масла () в процентах в абсолютно сухом сырье вычисляют по формуле

где - объем эфирного масла, см;

- масса сырья, г;

- потеря в массе при высушивании сырья, %.

5.5. Определение содержания эфирного масла методом 2б

5.5.1. Аппаратура и реактивы

Для проведения испытания применяют аппаратуру, указанную в п.5.4.1, и декалин.

5.5.2. Проведение испытания

Навеску измельченного растительного сырья помещают в колбу, приливают 300 см воды, колбу соединяют через шлиф с паропроводной трубкой и заполняют водой градуированную и сливную трубки через кран при помощи резинового шланга, оканчивающегося воронкой. Затем через воздушную трубку при помощи пипетки приливают в приемник около 0,5 мл декалина и точно измеряют объем взятого декалина, опуская уровень жидкости в градуированную часть трубки. Далее испытание проводят по п.5.4.3.

Проводят два параллельных определения.

5.5.3. Обработка результатов

Содержание эфирного масла () в процентах в абсолютно сухом сырье вычисляют по формуле

где - объем раствора масла в декалине, см;

- объем декалина, см;

- масса навески сырья, г;

- потеря в массе при высушивании сырья, %.

За окончательный результат испытаний принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, вычисленное до сотых долей процента.



Электронный текст документа
подготовлен АО "Кодекс" и сверен по:
официальное издание
Лекарственное растительное сырье. Часть 2.
Корни, плоды, сырье: Сб. ГОСТов. -
М.: ИПК Издательство стандартов, 1999

Выходные данные сборника:

МЕТОДЫ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДУБИЛЬНЫХ ВЕЩЕСТВ В ЛЕКАРСТВЕННОМ РАСТИТЕЛЬНОМ СЫРЬЕ

Михайлова Елена Владимировна

канд. биол. наук, ассистент ВГМА им. Н.Н. Бурденко,

г. Воронеж

E-mail: milenok 2007@ rambler. ru

Васильева Анна Петровна

Мартынова Дарья Михайловна

студент ВГМА им. Н.Н. Бурденко, г. Воронеж

E-mail: darjamartynova 92@ rambler. ru

Дубильные вещества (ДВ) - весьма распространённая группа биологически активных веществ (БАВ) растений, обладающая различными фармакологическими свойствами, чем и обусловлено их широкое применение в медицине. Поэтому весьма актуальна проблема определения доброкачественности лекарственных средств и лекарственного растительного сырья (ЛРС), содержащего данную группу БАВ. Одним из основных методов установления доброкачественности ЛРС является количественный фитохимический анализ. В настоящее время существует несколько методик, позволяю­щих провести данный вид анализа ЛРС, содержащего ДВ, нолитера­турные данные разрозненны. В связи с вышесказанным необходима систематизация методов количественного анализа ДВвЛРС.

Классическими методами определения содержания ДВ являются гравиметрический (весовой) и титриметрический методы. В основе весового метода лежит свойство ДВ осаждаться желатином, ионами тяжелых металлов, кожным (гольевым) порошком. Первым этапом является определение массы сухого остатка в водном извлечении из ЛРС. При этом извлечение высушивают до постоянной массы. Следующий этап - освобождение извлечения от ДВ путем обработки гольевым порошком. При этом выпадает осадок, который затем удаляют фильтрованием, снова определяют количество сухого остатка и по разнице указанных масс сухого остатка устанавливают количество ДВ.

К титриметрическим методам относятся:

1.Титрование раствором желатина. В основе данного метода также лежит свойство ДВ осаждаться белками (желатином). Водные извлечения из сырья титруют 1 % раствором желатина. Титр устанавливают по чистому таннину. Точку эквивалентности устанавливают путем отбора наименьшего объема титранта, вызываю­щего полное осаждение ДВ. Данный метод высокоспецифичный и позволяет установить содержание истинных ДВ, но достаточно долгий в исполнении, а установление точки эквивалентности зависит от человеческого фактора .

2.Перманганатометрическое титрование. Этот метод представ­лен в общей фармакопейной статье и основан на легкой окисляемости ДВ калием марганцовокислым в кислой среде в присутствии индигосульфокислоты. В конечной точке титрования окраска раствора изменяется от синего до золотисто-желтого. Несмотря на экономич­ность, быстроту, простоту выполнения, метод недостаточно точен, что связано с трудностью установления точки эквивалентности, а также с завышением результатов измерения из-за сильной окислительной способности титранта .

3.Комплексонометрическое титрование трилоном Б с предва­рительным осаждением ДВ цинка сульфатом. Метод используется для количественного определения танина в сырье сумаха дубильного и скумпии кожевенной. В качестве индикатора применяют ксиленоловый оранжевый .

К физико-химическим методам количественного определения ДВ в ЛРС относятся фотоэлектроколориметрический, спектрофотомет­рический, амперометрический метод и метод потенциометрического и кулонометрического титрования.

1.Фотоэлектроколориметрический метод. Основан на способ­ности ДВ образовывать окрашенные химические соединения с солями железа (III), фосфорно-вольфрамовой кислотой, реактивом Фолина-Дениса и другими веществами. К исследуемому извлечению из ЛРС добавляют один из реактивов, после появления устойчивой окраски измеряют оптическую плотность на фотоколориметре. Процентное содержание ДВ определяют по калибровочному графику, постороенному с использованием серии растворов танина известной концентрации .

2.Спектрофотометрическое определение. После получения водного извлечения часть его центрифугируют в течение 5 мин при 3000 об/мин. К центрифугату добавляют 2 % водной раствор аммония молибдата, после чего разбавляют водой и оставляют на 15 мин. Интенсивность образовавшейся окраски измеряют на спектрофотометре при длине волны 420 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. Расчет танидов производят по стандартному образцу. В качестве стандартного образца используют ГСО танина .

3.Хроматографическое определение. Для идентификации конденсированных дубильных веществ получают спиртовое (95 % этиловый спирт) и водное извлечения и проводят бумажную и тонкослойную хроматографию. В качестве стандартного образца используют ГСО катехина . Разделение осуществляют в системах растворителей бутанол - кислота уксусная - вода (БУВ) (40: 12: 28), (4: 1: 2), 5 % уксуснаякислота на бумаге марки “Filtrak” и пластинках “Silufol”. Обнаружение зон веществ на хроматограмме проводят в УФ-свете, с последующей обработкой 1 % раствором железоаммониевых квасцов или 1 % раствором ванилина, концентрированной кислотой хлористоводородной. В дальнейшем возможно проведение количественного анализа путём элюирования с пластины ДВ спиртом этиловым и проведения спектофотометрического анализа, снимая спектр поглощения в интервале 250-420 нм .

4.Амперометрический метод. Сущность метода заключается в измерении электрического тока, возникающего при окислении групп –ОН природных антиоксидантов фенольной природы на поверхности рабочего электрода при определенном потенциале. Предварительно строят графическую зависимость сигнала образца сравнения (кверцетина) от его концентрации и с помощью полученной градуировки рассчитывают содержание фенолов в исследуемых образцах в единицах концентрации кверцетина .

5.Потенциометрическое титрование. Данный вид титрования водного извлечения (в частности, отваров коры дуба) производили раствором калия перманганата (0,02 М), результаты регистрировали с помощью рН-метра (рН-410). Определение конечной точки титрования проводилось по методу Грана с использованием компьютерной программы “GRAN v.0.5” . Потенцио­метрический вид титрования дает более точные результаты, так как при этом точка эквивалентности четко фиксируется, чтоисключает необъективность результатов за счет человеческого фактора.Потенциометрическое титрование особенно актуально по сравнению с индикаторным при исследовании цветных растворов, таких как водные извлечения, содержащие ДВ.

6.Кулонометрическое титрование. Метод количественного определения содержания ДВ в ЛРС в пересчете на танин путем кулонометрического титрования заключается в том, что исследуемое извлечение из сырья вступает в реакцию с кулонометрическим титрантом - гипоиодит-ионами, которые образуются при диспропор­ционировании электрогенерированного йода в щелочной среде. Электрогенерация гипоиодит-ионов осуществляется из 0,1 М раствора йодида калия в фосфатном буферном растворе (рН 9,8) на платиновом электроде при постоянной силе тока 5,0 мА .

Таким образом, для количественного определения ДВ в ЛРС используются такие методы количественного определения ДВ в ЛРС, как титриметрические (в том числе титрование желатином, перманганатом калия, комплексонометрическое титрование трилоном Б, потенциометрическое и кулонометрическое титрование), гравиметрические, фотоэлектроколориметрические, спектрофотомет­рические, амперометрические методы.

Список литературы :

1. Васильева А.П. Изучение динамики содержания дубильных веществ в отваре коры дуба при хранении // Молодёжный инновационный вестник. - 2012. - Т. 1, № 1. - С. 199-200.
2. Государственная Фармакопея СССР, XI издание, вып. 1. - М.: Медицина, 1987. - 336 с.
3. Гринкевич Н.И., Л.Н. Сафронич Химический анализ лекарственных растений. - М., 1983. - 176 с.
4. Ермаков А.И., Арасимович В.В. Определение суммарного содержания дубильных веществ. Методы биологического исследования растений: Уч. Пособие. Л.: Агропромиздат. 1987. - 456 с.
5. Исламбеков Ш.Ю. Каримджанов С.М., Мавлянов А.К. Растительные дубильные вещества // Химия природных соединений. - 1990. - № 3. - C. 293-307.
6. Кемертелидзе Э.П., Явич П.А., Сарабунович А.Г. Количественное определение танина // Фармация. - 1984. № 4. - С. 34-37.
7. Пат. РФ № 2436084 Способ кулонометрического определения содержания дубильных веществ в растительном сырье; заявл. 06.04.2010, опубл. 10.12.2011. [Электронный ресурс]. Режим доступа. URL: http://www.freepatent.ru/patents/2436084 (дата обращения: 02.12.2012).
8. Рябинина Е.И. Сравнение химико-аналитических методов определения танинов и антиоксидантной активности растительного сырья // Аналитика и контроль. - 2011. - Т. 15, № 2. - С. 202-204.
9. Федосеева Л.М. Изучение дубильных веществ подземных и надземных вегетативных органов бадана толстолистного, произрастающего на Алтае. // Химия растительного сырья. - 2005. № 3. С. 45-50.