Реакция Панди: что это за исследование и для чего проводится? Исследование спинномозговой жидкости при сифилисе Реакция панди в ликворе положительная

25. МОРФОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД РАЗРАБОТКИ ПРОДУКТА. МЕТОД «МОЗГОВОЙ АТАКИ» И ОЦЕНОЧНОЙ ШКАЛЫ 1. Описание проблемы без предложения каких-либо решений.2. Разложение проблемы на отдельные компоненты, которые могут влиять на решение.3. Предложение альтернативных решений для

8. Метод анкетирования. Метод тестирования. Методы оценки эффективности труда работника

8. Метод анкетирования. Метод тестирования. Методы оценки эффективности труда работника Метод анкетирования является наиболее дешевым способом, который может охватить большую группу людей и большую территорию. Основным плюсом является запас времени, предоставляемый

ГЛАВА 14 Метод Огино (календарный метод предохранения от беременности)

ГЛАВА 14 Метод Огино (календарный метод предохранения от беременности) Механизм менструального цикла понимают и достаточно в нем разбираются немногие женщины, несмотря на то, что каждая из них сталкивается с этим явлением постоянно. Понимание его даст возможность

Исследование ликвора, спинномозговой жидкости – один из самых распространенных анализов, который с успехом применяют для выявления наличия разнообразных неврологических заболеваний.

Реакция Панди – метод исследования ликвора, который впервые применил венгерский невропатолог и специалист по психическим заболеваниям Кальман Панди в 1910 году. С тех пор он стал широко применяться в медицине, так как позволяет точно и достоверно выявить наличие патологических процессов в спинном или головном мозге.

Особенности методики

Реакция Панди – метод исследования, который позволяет определить повышенный уровень глобулинов (белков) в спинномозговой жидкости.

В качестве химического реактива используется карболовая кислота. При контакте карболовой кислоты и ликвора образуются участки помутнения, при этом интенсивность помутнения напрямую зависит от количества белков, присутствующих в спинномозговой жидкости.

В норме человеческий ликвор прозрачен. Помутнение спинномозговой жидкости возникает при увеличении в нем концентрации лейкоцитов, глобулинов, эритроцитов, наличии различных микроорганизмов. Повышенная концентрация этих элементов свидетельствует о воспалительных процессах, патологиях головного или спинного мозга, сосудистых нарушениях.

Проведение исследования и интерпретация результатов

В результате люмбальной пункции производится забор спинномозговой жидкости, служащей исходном материалом для проведения реакции.

Для исследования используют вогнутое стекло, под которое подкладывают черную бумагу. В качестве реактива применяют раствор карболовой кислоты, приготовленный в следующей пропорции: 1 часть кристаллизованной карболовой кислоты к 15 частям дистиллированной воды.

В центральную часть предметного стекла капают 1 мл. концентрированной карболовой кислоты, в центр или по краям реактива наносят каплю ликвора. Возможно нанесение 2 капель ликвора, но при этом важно соблюдать пропорцию 1 капля спинномозговой жидкости: 1 мл. раствора.

Если реакция Панди в ликворе положительная, то в местах соприкосновения двух жидкостей образуется участок помутнения, интенсивность которого зависит от количества белков в спинномозговой жидкости.

Степень выраженности реакции интерпретируется с помощью крестов. Так, один крест «1+» означает слабую опалесценцию и является либо вариантом нормы, либо свидетельствует о незначительном содержании глобулинов в ликворе (немного более 0,2 г/л).

Результат «2+» — заметная опалесценция, а «3+» — умеренное помутнение. «4+» означает сильное помутнение, что свидетельствует о значительном повышении количества глобулинов в спинномозговой жидкости.

Проба Панди сродни реакции Нонне-Апельта, с той лишь разницей, что для проведения реакции Панди необходимо меньшее количество ликвора.

О чем свидетельствует положительный отклик

Повышенный уровень глобулинов в ликворе может являться следствием гнойного, туберкулезного либо , свидетельствовать о недавно проведенных операциях на мозге, абсцессе или . При этом чем больше «крестов» наблюдается по результатам пробы, тем изменения, нарушения в спинном или головном мозге более выражены.

При наличии в ликворе примесей крови проба Панди всегда будет положительной. Именно поэтому положительная реакция наблюдается при , нарушениях гемодинамики в сосудистой системе.

Нарушение гемодинамики приводит к тому, что стенки сосудов становятся легко проницаемыми и плазма крови с белковой составляющей поступает в ликвор. Наблюдается положительная проба Панди.

Реакция Панди – качественная проба, которая свидетельствует о наличии повышенной концентрации белка в ликворе. Для уточнения диагноза и более четкого определения количества глобулинов в крови используют другие более информативные и современные методы исследования.

119. Реакции Панди и Нонне - Апельта

В качестве реактива для проведения реакции Панди используют надосадочную прозрачную жидкость, которую получают при сильном взбалтывании 100 г жидкой карболовой кислоты с 1000 мл дистиллированной воды. Для получения осадка и прозрачной жидкости (реактива) данную смесь помещают сначала на 3-4 ч в термостат, а затем 2-3 дня выдерживают при комнатной температуре.

Часовое или предметное стекло кладут на темную бумагу и наносят на него 2-3 капли реактива, затем 1 каплю спинномозговой жидкости. При помутнении капли или появлении нитевидной мути по ее периферии реакцию считают положительной.

Для проведения реакции Нонне - Апельта необходимы чистые пробирки, насыщенный раствор аммония сульфата, дистиллированная вода, темная бумага. Насыщенный раствор аммония сульфата готовят следующим образом: в колбу емкостью 1000 мл помещают 0,5 г химически чистого нейтрального аммония сульфата, затем наливают 100 мл дистиллированной воды, подогретой до 95 °С, взбалтывают до полного растворения соли и оставляют на несколько дней при комнатной температуре. Спустя 2-3 дня раствор фильтруют и определяют рН. Реакция должна быть нейтральной.

В пробирку наливают 0,5-1 мл полученного раствора и осторожно по стенке пробирки добавляют такое же количество спинномозговой жидкости. Через 3 мин оценивают результат. Появление беловатого кольца свидетельствует о положительной реакции. Затем содержимое пробирки взбалтывают, определяют степень помутнения, сравнивая с пробиркой, содержащей дистиллированную воду. Результаты реакции оценивают на фоне черной бумаги.

120. Реакция Борде - Жангу

Ценный диагностический тест при выявлении хронической гонореи среди лиц, страдающих хроническими воспалительными заболеваниями мочеполовой системы. По данным литературы, при правильном использовании этого метода выявляют до 80 % случаев гонореи, не обнаруженной бактериоскопическим или бактериологическим методом.

Реакция Борде - Жангу может быть следовой в результате перенесенного ранее заболевания или применения гоновакцины с диагностической (иммунобиологический метод провокации), а также лечебной (лечение хронических воспалительных процессов мочеполовой системы у женщин по Бакшееву) целью. Поэтому перед ее проведением необходимо тщательно собрать анамнез,

Реакция может быть и ложноположительной при введении молока, использовании в лечебных целях пирогенала.

Следовательно, положительная реакция Борде - Жангу не служит бесспорным доказательством наличия гонококковой инфекции, как и отрицательная не может быть свидетельством отсутствия гонореи. Однако положительные результаты ее в течение длительного времени должны нацелить врача на поиск очага гонококковой инфекции в организме.

В качестве антигена используют убитую гонококковую культуру, содержащую 3-4 млрд. микробных тел в 1 мл. Гонококковый антиген консервируют раствором формальдегида и разливают в ампулы по 1- 5 мл. Не вскрытые ампулы пригодны в течение 6 мес, вскрытые можно сохранять 2-3 дня в стерильной пробирке в холодильной камере при температуре 3-5 °С,

Реакцию связывания комплемента Борде - Жангу проводят аналогично реакции Вассермана (см. № 121). Гонококковый антиген разводят изотоническим раствором натрия хлорида соответственно указанному на этикетке ампулы титру. Реакцию проводят чаще всего в объеме 2,5 мл, поэтому к 0,5 мл разведенной 1: 5 испытуемой сыворотки добавляют в каждую пробирку по 0,5 мл разведенного антигена. Остальные 1,5 мл составляют 1 мл гемолитической системы и 0,5 мл комплемента.

Реакцию считают положительной при наличии выраженной в разной степени задержки гемолиза в испытуемой сыворотке. В контроле (сыворотка крови здоровых людей) наблюдается полный гемолиз.

121. Реакция Вассермана

В сыворотке крови больных сифилисом находятся реагины и антитела. Реагины обладают свойством вступать в соединения с кардиолипиновым антигеном. Специфические антитела против бледной трепонемы вступают в соединение со специфическими антигенами. Образовавшиеся комплексы антиген - антитело сорбируют добавляемым в реакцию комплементом. Индикацию производят путем введения гемолитической системы (эритроциты барана + гемолитическая сыворотка).

Для проведения реакции требуются:

а) изотонический раствор натрия хлорида;

б) ультраозвученный трепонемный (хранят в холодильнике при температуре +4 °С) и кардиолипиновый (хранят при комнатной температуре) антигены;

в) комплемент, представляющий собой сыворотку крови, полученной при пункции сердца 5-10 здоровых гвинейских свинок. Может сохраняться в холодильнике в течение 2 мес при условии
консервирования 4 % раствором борной кислоты и 5 % раствором натрия Сульфата;

г) гемолизин - гемолитическая сыворотка крови кролика, иммунизированная эритроцитами барана с разными титрами (хранят в холодильнике при температуре 4 °С);

д) эритроциты барана, получаемые пункцией яремной вены. Кровь собирают в стерильную банку со стеклянными шариками (для перемешивания), встряхивают 15 мин. Сгустки фибрина отделяют фильтрованием через стерильную марлю. Дефибринированную кровь можно хранить в холодильнике до 5 сут.

Иногда возникает необходимость более длительного хранения крови барана, в связи с чем ее консервируют специальным консервантом (6 г глюкозы, 4,5 г кислоты борной, 100 мл изотонического раствора натрия хлорида), который кипятят на водяной бане по 20 мин в день в течение 3 сут. На 100 мл дефибринированной крови барана требуется 15 мл консерванта. Консервированную таким образом дефибринированную кровь хранят в холодильнике.

Проведению основного опыта предшествует несколько этапов.

У больного из локтевой вены берут 5-10 мл крови и обрабатывают сыворотку. У детей кровь можно взять из височной вены или разреза на пятке. Пункцию делают стерильными инструментами, шприц и иглу
предварительно промывают изотоническим раствором натрия хлорида.

Кровь для исследования берут натощак; за 3-4 дня до исследования больному запрещают употреблять наркотические средства, препараты наперстянки, принимать алкоголь.

Не следует проводить исследование у больных с повышенной температурой тела, после травмы, операции, наркоза, перенесенных недавно инфекционных заболеваний, у женщин во время менструации, у беременных (в последние 10 дней беременности), рожениц (в первые 10 дней после родов), а также новорожденных (в первые 10 дней жизни).

Полученную кровь в стерильной пробирке помещают на 15-30 мин в термостат при температуре 37 °С. Образовавшийся сгусток отделяют от стенок пробирки стерильной стеклянной палочкой и ставят в холодильник на сутки. Отделившуюся прозрачную сыворотку (над сгустком) отсасывают пастеровской пипеткой с помощью резиновой груши либо осторожно сливают в другую стерильную пробирку и инактивируют на водяной бане в течение 30 мин при температуре 56 °С. Приготовленную таким образом для опыта сыворотку можно хранить в холодильнике до 5-6 дней.

Антигены разводят соответственно способу и титру, указанным на этикетке.

Приготавливают гемолитическую систему. Для этого дефибринированную кровь или эритроциты барана в количестве, необходимом для проведения реакции, центрифугируют, плазму осторожно отделяют, а осадок промывают 5-6 объемами изотонического раствора натрия хлорида до тех пор, пока надосадочная жидкость не станет совершенно бесцветной. Из осадка готовят 3 % взвесь эритроцитов в изотоническом растворе натрия хлорида по утроенному титру.

Раствор гемолитической сыворотки и взвесь эритроцитов барана быстро смешивают и помещают в термостат на 30 мин.

Сухой комплемент разводят изотоническим раствором натрия хлорида в пропорции 1:10, нормальную инактивированную сыворотку человека- 1:5.

Комплемент титруют в 30 пробирках, помещенных в штатив по 10 пробирок в 3 ряда. В двух рядах его титруют в присутствии двух антигенов, в третьем - с изотоническим раствором натрия хлорида. Пять пробирок являются контрольными: две для соответствующих двух антигенов и по одной - для контроля комплемента, гемолитической сыворотки и изотонического раствора натрия хлорида на гемотоксичность; заполняют их следующим образом:

Пробирки помещают на 45 мин в термостат, после чего их проверяют. Гемолиза не должно быть ни в одной пробирке.

Комплемент в разведении 1:10 разливают в 10 пробирок 1-го ряда штатива в дозах: 0,1, 0,16, 0,2,0,24, 0,3, 0,36,0,4,0,44, 0,5 и 0,55 мл. К содержимому каждой пробирки добавляют изотонический раствор натрия хлорида до 1 мл и тщательно перемешивают. По 0,25 мл смеси из каждой пробирки переносят в соответствующие пробирки 2-го и 3-го рядов. Штатив с пробирками встряхивают, в 3-й ряд пробирок добавляют по 0,5 мл гемолитической системы, вновь встряхивают и помещают на 45 мин в термостат при температуре 37 °С. Нормальную сыворотку крови человека, разведенную изотоническим раствором натрия хлорида в пропорции 1:5, по 0,25 мл разливают во все 30 пробирок.

Антиген I (трепонемный ультраозвученный), разведенный по титру изотоническим раствором натрия хлорида, по 0,25 мл добавляют в 10 пробирок 1-го ряда; антиген II (кардиолипиновый в том же разведении и в том же количестве) - в 10 пробирок 2-го ряда. В 10 пробирок 3-го ряда приливают по 0,25 мл изотонического раствора натрия хлорида, оставшиеся 0,25 мл выливают. После инкубации в термостате в 20 пробирок (1-го и 2-го ряда) добавляют по 0,5 мл гемолитической системы, встряхивают и повторно помещают в термостат на 45 мин.

Через 45 мин определяют рабочую дозу комплемента, то есть титр его с надбавкой в пределах 15-20 %.

Титром комплемента считают его минимальное количество, вызывающее полный гемолиз эритроцитов барана в присутствии антигена и нормальной сыворотки крови человека.

Основной опыт заключается в том, что каждую испытуемую инактивированную сыворотку, разведенную в пропорции 1: 5 изотоническим раствором натрия хлорида, разливают по 0,25 мл в три пробирки. В первую пробирку добавляют 0,25 мл антигена I, во вторую - 0,25 мл антигена II, в третью (контроль) -0,25 мл изотонического раствора натрия хлорида. Во все пробирки добавляют также по 0,25 мл разведенного до рабочей дозы комплемента. Все пробирки помещают на 45 мин в термостат, затем в них добавляют по 0,5 мл гемолитической системы, встряхивают и ставят в термостат на 45-50 мин. Результат опыта регистрируют после наступления полного гемолиза в контрольных пробирках.

Результаты реакции оценивают плюсами: полная задержка гемолиза (резкоположительная реакция) ++++, значительная (положительная реакция) +++, частичная (слабоположительная реакция) ++, незначительная (сомнительная реакция) - ±, отсутствие задержки гемолиза (отрицательная реакция) -.

При количественном методе проведения реакции Вассермана опыт ставят с уменьшающимися объемами сыворотки, разведенной изотоническим раствором натрия хлорида.

Схема проведения основного опыта реакции Вассермана

Клиническое значение реакции Вассермана трудно переоценить. Ее проводят всем больным до начала лечения, но особое значение она имеет при скрытом сифилисе, поражении внутренних органов и нервной системы.

Результаты реакции Вассермана характеризуют качество проведенного лечения, что дает основание в определенные сроки снимать с учета лечившихся больных.

При первичном сифилисе реакция Вассермана положительная обычно в конце 6-й недели с момента заражения; при вторичном свежем сифилисе она положительная почти в 100 % случаев, при вторичном рецидивном -в 98-100%; третичном активном - в 85%; третичном скрытом - в 60 % случаев.

Реакцию Вассермана проводят двукратно всем беременным, больным с соматическими, нервными, психическими и кожными болезнями, а также декретируемым контингентам населения. В то же время к.положительным и слабоположительным результатам реакции следует относиться критически, так как они могут быть в конце беременности и после родов, при гипертиреозе, малярии, проказе, распаде злокачественной опухоли, инфекционных заболеваниях, коллагенозах и др. Поэтому при наличии клинических проявлений болезни их следует учитывать, наряду с данными бактериоскопии, в первую очередь.

Вместе с тем имеются факторы, которые могут исказить истинный характер полученных результатов реакции Вассермана: плохо вымытая лабораторная посуда (следы кислоты и щелочи в пробирках), длительное хранение крови, взятой для исследования, употребление больными жиров и алкоголя перед обследованием, период менструации и др.

Во всех случаях желательно проводить комплексное обследование больного, включающее, помимо реакции Вассермана, также РИБТ (см. 122, 123, 124) и др.

122. Реакция Закса - Витебского (цитохолевая)

Применяется для выявления сифилиса. Основана на образовании осадка при смешивании сыворотки крови больного с антигеном.

Для приготовления антигена мышцы нескольких бычьих сердец очищают от сухожилий, фасций, жира, измельчают на мясорубке и экстрагируют 5-кратным объемом 96 % этилового спирта в течение 15 дней при ежедневном 20-минутном встряхивании. Полученный экстракт выпаривают на водяной бане в фарфоровой чашке под вакуумом. К остатку (ярко-желтой массе липоидов) добавляют горячий 96 % этиловый спирт в количестве 1/3 объема взятых для экстрагирования мышц.

Экстракт держат 3 дня при комнатной температуре, фильтруют (в холодной воде) и добавляют 0,3-0,6 % раствор кристаллического холестерина в зависимости of результатов титрования положительными и отрицательными сыворотками. Хранят цитохолевый антиген при комнатной температуре в запаянных ампулах либо закупоренных пробирках.

Методика. К 2 мл изотонического раствора натрия хлорида быстро приливают 1 мл цитохолевого антигена и оставляют при комнатной температуре на 15 мин до появления хлопьев. В пробирку к 0,2 мл инактивированной сыворотки добавляют 0,1 мл антигенной эмульсии, встряхивают в течение 3 мин и оставляют в покое на 30 мин, после чего добавляют 1 мл изотонического раствора натрия хлорида.

В контрольную пробирку с антигеном добавляют 1,2 мл изотонического раствора натрия хлорида и 0,1 мл антигенной эмульсии. В контроле хлопьев не должно быть. Результаты реакции учитывают визуально или с помощью лупы и обозначают в зависимости от количества выпавших хлопьев плюсами (++++, +++, ++). При отрицательной реакции хлопьев нет, но содержимое пробирки может слегка опалесцировать.

В 1931 г. П. Sachs и Е. Witebsky предложили модификацию данной методики, заключающуюся в том, что антиген разводят двухфазно: к 1 части антигена добавляют 2 части изотонического раствора натрия хлорида, выдерживают при комнатной температуре 5 мин и добавляют еще 9 частей изотонического раствора натрия хлорида. Рекомендовано также разводить антиген 2 % раствором натрия хлорида, что, по мнению авторов, повышает чувствительность реакции. Возможна и количественная модификация реакции с разведением сыворотки (1:4, 1:8, 1: 16, 1:32, 1: 64 и т. д.).

Реакция достаточно чувствительна, занимает мало времени (около 1 ч), результаты ее читаются сразу.

123. Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ)

С помощью реакции в сыворотке крови больных сифилисом выявляют антитела и комплемент, обездвиживающие бледную трепонему.

При первичном сифилисе РИБТ преимущественно отрицательная, при вторичном - положительная в 92-96 % случаев, при третичном - в 92-100 %,при сифилисе нервной системы и врожденном - в 86-89 % случаев.

Положительные результаты РИБТ отмечены при саркоиде, эритематозе, диабете, злокачественных опухолях, вирусном гепатите, циррозе печени, малярии, лепре, инфекционном мононуклеозе, некоторых болезнях жарких стран (пинта, фрамбезия и др.).

Антигеном служит взвесь бледных трепонем, взятых из яичек кролика, зараженного сифилисом путем введения в яичко 0,75-1 мл взвеси бледных трепонем в изотоническом растворе натрия хлорида (50 особей в поле зрения).

Материал из яичка следует брать через 6-8 дней после заражения животного. Перед взятием антигена кролика забивают методом обескровливания (пункция сердца или сонной артерии). Ткань яичка измельчают и заливают сывороткой крови здорового кролика, разведенной изотоническим раствором натрия хлорида, встряхивают в течение -30 мин, а затем 10 мин центрифугируют (1000 оборотов в 1 мин). Надосадочную жидкость микроскопируют. В каждом поле зрения должно быть не менее 10-15 бледных трепонем.

Комплемент готовят обычным способом из крови гвинейских свинок.

Для проведения РИБТ необходимы: 1,2 мл 0,2 % раствора желатина, 2,8 мл 5 % раствора альбумина, 1,6 мл взвеси бледных трепонем; рН среды - 7,2. К указанной смеси прибавляют 0,15 мл комплемента (коктейль). Параллельно ставят две пробы: с активным (опыт) и реактивным (контроль) комплементами.

В меланжеры до отметки «1» набирают исследуемую сыворотку, а затем до отметки «2» - коктейль и закрывают их стерильным резиновым кольцом.

Одновременно аналогичную реакцию проводят с заведомо положительной и заведомо отрицательной сыворотками.

Меланжеры нумеруют и ставят в термостат при температуре 35 °С на 18-20 ч, после чего попарно (опыт - контроль) извлекают их из термостата и содержимое выливают в соответствующие пробирки. На предметное стекло наносят 2 капли: слева - опыт, справа - контроль, накрывают покровным стеклом и микроскопируют в темном поле зрения.

Вначале изучают результаты контроля: определяют процент подвижных и неподвижных бледных трепонем. Формула подсчета: X = (А - В)/А * 100, где А - количество подвижных бледных трепонем в контроле; В - количество подвижных бледных трепонем в опыте.

Пример: (24 - 19) / 24 * 100 = 21 %.

Оценки результатов РИБТ: ниже 20 % - отрицательный. 21-30 % - сомнительный, 31-50 % - слабоположительный, свыше 50 % -положительный.