А. Моноциты

В. Плазмоциты

С. Микрофаги

D. Лимфоциты

Е. Макрофаги

347. Студент, отвечая на вопрос преподавателя об иммуногенезе, назвал одну из теорий образования антител наиболее обоснованной и своевременной. Какую теорию имел в виду студент?

А. Клонально-селекционная теория Бернета

В. Прямой матрицы Гауровитца-Полинга

С. Естественной селекции Эрне

D. Сетевых структур Гайдельберга

Е. Непрямой матрицы Бернета-Феннера

В одном из центральных органов иммунной системы формируются клетки, которые являются предшественниками иммунокомпетентных клеток. Часть из них затем трансформируется в Т- или В-лимфоциты. В каком органе это происходит?

А. Костный мозг

В. Вилочковая железа

С. Селезенка

D. Лимфатические узлы

Е. Небные миндалины

При некоторых инфекциях в организме одновременно существуют антитела и возбудитель заболевания, т.е. имеет место такой своеобразный вид иммунитета. Как он называется?

А. Нестерильный

В. Стерильный

С. Наследственный

D. Пассивный

Е. Искусственный

Известно, что дети не болеют корью и др. инфекционными заболеваниями до 6 мес. так как получают антитела от матери трансплацентарным путем. Как называется такой вид иммунитета?

А. Искусственный пассивный

В. Искусственный активный

С. Естественный активный

D. Естественный пассивный

Е. Врожденный видовой

351. Для проведения микроскопии в иммерсионной системе на поверхность препарата-мазка бактериолог предварительно наносит вещество. Что оно собой представляет?

С. Щелочь

D. Масло

Е. Кислота

Какой из перечисленных методов лабораторной диагностики позволяет выделить и идентифицировать возбудителя заболевания?

А. Аллергический

В. Биологический

С. Бактериологический

Серологический

Е.Микроскопический

Для специфической профилактики вирусного гепатита В сегодня широко используется вакцинация. Каким методом изготовляют препарат для вакцинации?

A. Из убитого формалином вируса гепатита

B. Из печени овец, зараженных вирусом гепатита

C. Из HBs-антигена, выделенного из крови носителей

D. Генно-инженерным методом

Е. Из вируса гепатита, выращенного в культуре клеток

Врачу- стоматологу проведена вакцинация против гепатита В. Против каких разновидностей вирусных гепатитов создан активный иммунитет?

A. Гепатитов В и D

B. Гепатитов В,С D

C. Гепатита В

D. Гепатита В и А

Е. Гепатита В и С

На губах больного появились везикулы, наполненные желтоватой жидкостью. Врач заподозрил Herpes labialis . Какие вирусы могут вызвать это заболевание?

A. Herpesvirus 6

B. Herpes simplex virus

C. Herpes zoster virus

D. Cytomegalovirus

E. Epstein-Barr virus

Во время эпидемии гриппом больному с повышенной температурой и слабостью врач поставил диагноз «Грипп». Какой препарат врач назначил больному?

A. Пенициллин

B. Стрептоцид

C. Стрептомицин

D. Ремантадин

Е. Новарсенол

Длительное время больной лечился по поводу хронической пневмонии. При микроскопическом исследовании мокроты в мазке-препарате выявлены тонкие прямые и слегка изогнутые палочки красного цвета, расположенные поодиночно. Мазок окрашен сложным методом Циля-Нильсена. Что не позволяет их выявить простым методом окрашивания?

А. Высокое содержание миколовой кислоты и липидов

С. Наличие спор

D. Выработка ферментов агрессии

Е. Образование капсулы

Для оценки пригодности питьевой воды проведено бактериологическое исследование. Какой показатель характеризует количество бактерий группы кишечных палочек, содержащихся в 1 л?

А. Коли-индекс

В. Коли-титр.

С. Титр коли-фага.

D. Перфрингенс-титр.

Е. Микробное число

359. На практическом занятии по микробиологии студентам предложено окрасить смесь бактерий по методу Грама и объяснить механизм окраски. Какие морфологические структуры бактерий определяют грамотрицательную и грамположительную окраску бактерий?

A. Клеточная стенка

C. Капсула

D. Жгутики

E. Цитоплазма

Как называется метод микробиологической диагностики, который заключается в определении титра специфических антител в сыворотке больного?

А. Аллергический

В. Биологический

С. Микробиологический

D. Серологический

Е. Микроскопический

В 2003 году появилась новая болезнь, которую обозначают как «атипичная пневмония» или SARS (тяжелый острый респираторный синдром). К какой группе микробов отнесли ее возбудитель?

A. Вирусы

B. Бактерии

C. Простейшие

К врачу обратился больной с жалобами на длительную субфебрильную температуру, увеличение региональных лимфатических узлов, снижение массы тела. Врач заподозрил у больного «СПИД». Назовите возбудитель этого заболевания?

A. Human poliovirus

В. Human T-Lymphotropic virus-2

C. Human T-Lymphotropic virus-1

Механизм этого процесса был выяснен с помощью опытов по культивированию отдельных клеток, образующих антитела. Оказалось, что синтез антител протекает под контролем генов

Д. Носсаль

Организм человека в состоянии производить любое из тысяч, а может быть, даже миллионов различных антител; каждое антитело приспособлено для связывания специфического антигена. Каким же образом человеческий организм осуществляет столь сложную задачу? Синтезируются ли антитела в клетках, подобно остальным белкам, под контролем специальных генов? Предположим, что это так; тогда для синтеза различных антител в клетках должно содержаться огромное количество специальных генов. Кроме того, необходим сложный механизм регуляции, включающий нужный ген при попадании в организм того или иного антигена: бактерии, вируса или другого инородного объекта белковой природы.

Работая с культурами клеток, мы попытались получить ответы на все эти вопросы. Вообще говоря, производство антител в клетках напоминает крупное промышленное производство, выпускающее на разных специализированных фабриках широкий ассортимент товаров. Анализируя эту систему, можно выделить в ней три элемента: во-первых, сами фабрики-клетки, синтезирующие антитела; во-вторых, продукция - молекулы антитела; в-третьих, потребители, определяющие, так сказать, спрос,- молекулы антигена. Мы подробно рассмотрим каждый из элементов и попробуем показать, каким образом достигается столь высокая продуктивность всей системы.

Еще лет двадцать назад господствовало мнение, что антитела образуются в больших клетках, поглощающих антигены,- так называемых макрофагах или «пожирающих клетках».

Позднее шведская исследовательница Астрид Фагреус в своей классической работе впервые высказала предположение, что на самом деле антитела образуются в особых специализированных клетках, так называемых плазмацитах; плазмациты в большом количестве появляются в месте заражения, как только начинается воспаление. Фагреус обнаружила, что примерно через два дня после внутривенного введения вакцины подопытному животному в его селезенке (основном источнике лейкоцитов) начинали появляться «плазмабласты».

Эти молодые плазмациты быстро делились и спустя несколько дней становились более специализированными: клеточное ядро съеживалось, а окружающая цитоплазма увеличивалась в объеме, причем было обнаружено, что она богата рибонуклеиновой кислотой (РНК). Но известно, что РНК контролирует синтез белка; следовательно, плазмацит должен был активно производить белок, иными словами - антитело. Впоследствии А. Куне и его сотрудники подтвердили, что в плазмацитах действительно содержится антитело.

«Молекулы и клетки», под ред. Г.М.Франка

Прежде всего мы выяснили, что макрофаги очень активно заглатывают антиген. Макрофаги, лежащие в глубине лимфатических узлов, оказались, как мы и ожидали, переполненными антигеном. Антиген был обнаружен, кроме того, еще в одной системе, не известной до сих пор. В наружной части лимфатического узла мы заметили настоящее сплетение тонких нитей - выростов цитоплазмы макрофага (смотрите рисунок ниже).…

Организм наделен многочисленными клонами клеток, причем клетки каждого клона потенциально способны взаимодействовать только с одним антигеном. Этот антиген лишь пускает в ход уже готовые клетки, которые начинают производить антитела определенного типа. Как мы видели, плазмабласты, скапливающиеся вокруг наполненной антигеном сети лимфатического узла, находятся в тесном контакте с антигеном. Не исключено, что простого поверхностного контакта клеток…

Благодаря исследованиям, проведенным в нашей лаборатории, мы можем теперь с уверенностью сказать, что эти клетки действительно образуют антитела. Нам удалось проследить этот процесс, культивируя отдельные плазмациты в маленьких капельках. Этот метод позволяет измерять количество образованных живыми клетками антител и изучать их природу и химические свойства. В первых опытах мы выбрали в качестве антигена белок, выделенный…

Действие антител настолько специфично, что они быстро обездвиживают Salmonella typhi, но совершенно не влияют, даже в высокой концентрации, на близко родственный штамм Salmonella paratyphi А (смотрите рисунок ниже). Опыт, показывающий специфичность антител Крысе ввели антиген, вызывающий иммобилизацию клеток Salmonella typhi. Затем выделили клетки, образующие антитела. Если эти клетки привести в контакт с бактериями Salmonella typhi,…

Создается впечатление, что отдельный плазмабласт претерпевает, как правило, девять последовательных делений, дающих «клон» или колонию клеток, после чего деление прекращается. Клон состоит не только из зрелых плазмацитов, но также и из некоторого числа «запоминающих» клеток, которые при любой повторной встрече с тем же антигеном будут его активно нейтрализовать. Не исключено, что эти клетки способны соединяться…

Мы предвидели, что специализация должна быть достаточно строгой; действительность превзошла все наши ожидания. Оказалось, что, за редким исключением, каждая клетка производит антитела только одного типа, даже если остальные плазмациты в лимфатических узлах заняты выработкой антител другого типа. Иначе говоря, существует четкое разделение труда. Преобладает принцип: одна клетка - одно антитело. Примерно в одном случае из…

Организм, получивший прививку или перенесший инфекцию, отвечает на повторное введение того же антигена столь быстрым и интенсивным синтезом соответствующего антитела, что инфекция пресекается в самом начале. В чем же здесь дело? Производят ли плазмациты больше антител, чем в первый раз, или же повторное введение антигена стимулирует образование самих плазмацитов? Экспериментальным путем мы установили, что организм…

Мы воспользовались радиоавтографией (смотрите рисунок ниже) для определения скорости, с которой наши клетки синтезируют рибонуклеиновую кислоту (РНК), дезоксирибонуклеиновую кислоту (ДНК) и белки. Схема изотопного метода Прежде всего (1) в среду, содержащую плазмабласт, добавляют тритий, радиоактивный изотоп водорода (капля этой среды наносится на нижнюю поверхность покровного стекла). Меченый водород включается в тимидин, который затем в виде…

В клетках многих типов рибосомы соединяются в так называемые полисомы1, напоминая бусинки на нитке, причем такой «ниткой» в полисоме служит молекула информационной РНК, в которой закодирована информация о синтезе белков; рибосомы считывают эту информацию с цепи РНК так же, как машина считывает задание с перфорированной ленты. Судя по некоторым электронным микрофотографиям, рибосомы в плазмацитах также,…

Как известно, при нейтрализации антигена антителом они каким-то образом связываются друг с другом. Где же в четырехкомпонентной струк-туре антитела может находиться активный центр связывания, который «запирается» на антигене? Существует два мнения на этот счет. По данным Р. Портера, соединительный центр находится в А-цепи. В то же время Г. Эдельман, основываясь на результатах своих экспериментов, полагает,…

3090 0

Функции Т-клеток

Одной из ключевых эффекторных функций активированной СD4+-Т-клетки является синтез антиген неспецифичных растворимых факторов - цитокинов. Выделяемые СD4+-Т-клетками цитокины влияют на функции множества типов клеток, в том числе СD8+-Т-клеток, В-клеток, миелоидных клеток (таких как макрофаги и эозинофилы), а также на дифференцировку костномозговых клеток-предшественников. По этой причине потеря CD4+-T-клеток при СПИДе является такой разрушительной.

Свойства цитокинов, которые продуцируют Т-лимфоциты и другие клетки. Многие важные функции Т-клеток будут обсуждаться в следующих главах, посвященных клеточно-опосредованному иммунитету и трансплантациям. Сконцентрируемся на гетерогенности цитокинов, которые образуют СD4+-Т-клетки, а затем опишем важные аспекты взаимодействия CD4-Т-лимфоцитов и В-клеток и, наконец, обсудим функции CD8+-T- клеток.

Субпопуляции СD4+-Т-клеток, отличающиеся по выделяемым цитокинам

Наивная СD4+-Т-клетка после стимуляции пептидом, связанным с молекулой МНС, начинает синтезировать IL-2. Активированная СD4+-Т-клетка может дифференцироваться дальше, чтобы синтезировать более широкий набор цитокинов. Однако после антигенной стимуляции не все СD4+-Т-клетки синтезируют одинаковые цитокины. Исследования функционирования Т-клеток у мыши и человека показали, что активированные антигеном СD4+-Т-клетки могут быть разделены по меньшей мере на три субпопуляции на основании продукции различных цитокинов: ТH0, Тн1 и Тн2. Как показано на рис. 10.5, Тн1 и Тн2 образуются в результате вызываемой антигеном дифференцировки клеток Тн0, которые синтезируют IL-2, IFNγ и IL-4.

Тн1-клетки, которые синтезируют IL-2, IFNγ и TNFβ, и Тн2-клетки, синтезирующие IL-4, IL-5, IL-10 и IL-13, играют разные важные роли в иммунном ответе. Поскольку разные цитокины взаимодействуют с различными клетками-мишенями, главным следствием продукции уникальных наборов цитокинов Тн1- и Тн2-клетками является то, что каждая субпопуляция обладает разной эффекторной функцией. Так, цитокины, синтезируемые Тн1-клетками, активируют клетки, вовлеченные в клеточно-опосредованный иммунитет: СD8+-Т-клетки, NK-клетки и макрофаги.

Кроме того, цитокины, выделяемые Тн1-клетками, индуцируют В-клетки к синтезу таких изотипов Ig, как IgG2, которые усиливают фагоцитоз возбудителей фагоцитирующими клетками. Напротив, цитокины, синтезируемые Тн2-клетками, переключают В-клетки на продукцию антител класса IgE и активацию эозинофилов; такая модель характерна для ответа на аллергены и гельминты.

Пока результаты попыток охарактеризовать поверхностные молекулы, по которым можно было бы отличать субпопуляции Тн1- и Тн2-клеток, не дали однозначных результатов, а сами эти исследования интенсивно продолжаются. Результаты некоторых недавних исследований показали, что, возможно, Тн1- и Тн2-клетки экспрессируют различные молекулы, используемые при межклеточном взаимодействии в процессе хоминга, в том числе различные хемокиновые рецепторы; однако для подтверждения или изменения этих выводов необходимы дальнейшие исследования.

Рис. 10. 5. Цитокиновый контроль образования Тн1- и Тн2-субпопуляций CD4+-T-клеток. Волнистые линии означают угнетение

Тн1-клетки развиваются, если в момент антигенной стимуляции присутствует IL-12. Как показано в начале этой главы, IL-12 и другие провоспалительные цитокины образуются дендритными клетками и другими АПК в самом начале ответа на такие возбудители, как бактерии и вирусы. Эти цитокины также синтезируются другими клетками врожденного иммунитета, в том числе NK-клетками. Напротив, присутствие IL-4 в начале иммунного ответа приводит к дифференцировке в сторону Тн2-клеток. Источник этого IL-4 до сих пор не ясен; он может образовываться или активированными СD4+-Т-клетками, или тучными клетками. Предполагается, что и другие факторы, такие как концентрация и путь введения антигена, степень аффинности взаимодействия между комплексом пептид-МНС и TCR и природа АПК, участвовавшей в ответе, могут влиять на то, какая субпопуляция СD4+-Т-клеток разовьется.

На рис. 10.5 также показано, что цитокины, выделяемые Тн1, могут угнетать функции Тн2, и наоборот. Например, IFNγ, образуемый Тн1-клетками, угнетает размножение Тн2-клеток, a IL-4 и 1L-10, образуемые Тн2-клетками, угнетают размножение Тн1-клеток. В табл. 10.1 представлены две важные характеристики субпопуляций Тн1 и Тн2 СD4+-T-клеток. Во-первых, субпопуляции синтезируют несколько общих цитокинов, в том числе IL-3 и гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор (ГМ КСФ) . Во-вторых, субпопуляции Тн1 и Тн2 CD4+-T-клеток больше различаются у мышей, чем у человека.

Таблица 10.1. Синтез цитокинов субпопуляциями Тн1 и Тн2 СD4+-Т-клеток

Цитокин

Рис. 10.6. В-клетки захватывают антиген путем взаимодействия с молекулами lg, процессируют его и презентируют CD4+-T-клеткам антиген, связанный с молекулами МНС II класса Т-В-кооперация Почти все белки являются тимусзависимыми антигенами. Их называют так потому, что для синтеза антител им необходима «помощь» или кооперация СD4+-Т-клеток с В-клетками. По этой причине группу СD4+-Т-клеток, которые участвуют в иммунном ответе, помогая продуцировать антитела на тимусзависимые антигены, называют Т-клетками-хелперами (Тн). Т-клетка-хелпер и В-клетка, которые взаимодействуют в ответе на конкретный тимусзависимый антиген, должны быть специфичны к нему. Тн-клетка и В-клетка обычно отвечают на разные эпитопы антигена, но для эффективной кооперации Т-хелпера и В-клетки эти эпитопы должны быть частью одной белковой последовательности. По этой причине кооперацию Т- и В-лимфоцитов при ответе на тимусзависимый антиген также называют связанным распознаванием. Ключевые стадии Т-В-клеточной кооперации, приводящие к синтезу антител, представлены на рис. 10.6 и 10.7. На рис. 10.6 показано, как В-клетка выступает в качестве АПК для СD4+-Т-клетки. Вначале В-клетка, экспрессирующая иммуноглобулин, специфичный к конкретному белковому антигену, захватывает антиген путем связывания его с Ig на мембране клетки. После этого комплекс антигена с Ig перемещается внутрь клетки и антиген подвергается процессингу в вакуолях с кислым содержимым. Некоторые пептиды, образованные при разрушении антигена, избирательно связываются с молекулами МНС II класса, также присутствующими в этих вакуолях с кислым содержимым. Комплексы пептид -МНС II класса транспортируются к поверхности В-клетки, где взаимодействуют с СD4+-Т-клеткой, обладающей подходящим TCR (вверху на рис. 10.7). В дополнение к комплексу пептид-МНС, презентируемому В-клеткой для TCR подходящей Т-клетки, на поверхностях Т- и В-лимфоцитов взаимодействуют еще несколько пар молекул (см. рис. 10.7). Эти взаимодействия необходимы для взаимной активации Т- и В-клеток; в результате Т-клетка синтезирует цитокины, а В-клетка - антитела. Пары адгезионных молекул CD11a/CD18- CD54 (LFA-1/ICAM-1) и CD2-CD58, которые описаны ранее в этой главе на примере взаимодействия АПК и Т-клетки, поддерживают контакт между Т- и В-клетками. Костимуляторные пары В7-CD28 и CD40-CD154 также играют ключевую роль во взаимодействии В- и Т-лимфоцитов. Рис. 10.7. Ключевые участники Т-В-кооперации. Штриховкой обозначены элементы, экспрессия которых усиливается при активации. Также показаны цитокины, образуемые T-клеткой, и их влияние на изотип Ig, секретируемый В-клеткой Презентация В-клеткой комплекса пептид-МНС II класса для TCR увеличивает экспрессию CD154 (лиганд CD40 или CD40L) на Т-клетке-хелпере. Взаимодействие CD40-CD154 в свою очередь усиливает экспрессию костимуляторной молекулы В7 на В-клетке, и В7 взаимодействует с CD28, экспрессированном на Т-клетке. Как указано ранее в подразделе, посвященном взаимодействию АПК с СD4+-T-клетками, взаимодействия CD40-CD154 и В7-CD28 стимулируют в активированной Т-клетке синтез цитокинов, которые индуцируют пролиферацию. Продукция цитокинов Т-хелперной клеткой ведет к пролиферации как самого Т-хелпера, так и В-клетки и синтезу Ig, что обеспечивается за счет увеличения количества цитокиновых рецепторов на активированной В-клетке. Взаимодействие CD40-CD154 также необходимо для переключения В-клетки на синтез других изотипов Ig, отличающихся от IgM. например IgG (переключение изотипов). Если такого взаимодействия не происходит, возможен синтез только IgM. Эта ситуация описана у людей с нефункциональным CD154 при клиническом состоянии, названном гипep-IgM-синдром, и у так называемых «нокаутных» мышей, не имеющих гена CD154. В обеих ситуациях продуцируются только антитела класса IgM, а антитела других изотипов отсутствуют. Для переключения изотипов В-клетками также необходимы цитокины, синтезируемые активированными Т-клетками. На рис. 10.7 показано, что изотип антител, которые синтезирует В-клетка, зависит от цитокинов, продуцируемых Т-клеткой. Так, если Т-клетка секретирует IL-4, то В-клетка переключается на продукцию преимущественно IgE и IgG4, а если Т-клетка выделяет IFNγ, то В-клетка переключается на продукцию таких подтипов IgG, которые активируют комплемент. В-клетки являются особенно эффективными АПК для CD4+-T-клеток при ответах на антигены, с которыми обе клетки уже встречались ранее. Это взаимодействие обычно происходит в специализированных участках лимфатических узлов - фолликулах - с последующей активацией В-клеток, соматическими мутациями и индукцией В-клеток памяти, происходящей в зародышевом центре лимфатического узла. Однако, как уже ранее описывалось в данной главе, наивные СD4+-Т-клетки наиболее эффективно активируются антигенами, которые прошли процессинг и презентируются дендритными клетками. Т-клетки, активированные дендритными клетками при первичном ответе, затем, вероятно, взаимодействуют и активируют В-клетки, которые захватывают антиген с использованием описанных ранее механизмов. Значение вовлечения Т-клеток в синтез антител В-клетками может быть адекватно оценено с учетом данных об антигенах, для ответа на которые не требуется помощь Т-клеток, - так называемых Т-независимых антигенах, которые обсуждаются далее в этой главе. Эти антигены не приводят к образованию В-клеток памяти, а В-клетки при ответе на них не переключают изотипы синтезируемых Ig, секретируя только IgM. Функции СD8+-Т-клеток Рассмотрим другую важную субпопуляцию Т-клеток - СD8+-Т-клетки. Их основной функцией является уничтожение (киллинг) клеток, которые заражены бактериями или вирусами. СD8+-Т-клетки также ответственны за гибель пересаженных чужеродных клеток при отторжении трансплантата и за уничтожение опухолевых клеток. По этой причине СD8+-Т-клетки часто называют Т-киллерами или цитотоксическими Т-лимфоцитами (ЦТЛ) . Клетка, уничтожаемая ЦТЛ, называется мишенью. В этой роли может выступать специализированная АПК, такая как дендритная клетка, или любая другая клетка организма. В отличие от рецепторов СD4+-Т-клеток TCR СD8+-Т-клеток распознают комбинацию пептидов, связанных с молекулами МНС I класса на поверхности клеток. Это взаимодействие в присутствии соответствующих вторых сигналов (обсуждаются далее) приводит к гибели клетки, представившей пептид. СD8+-Т-клетки также синтезируют цитокины, в основном те, которые ассоциируются с фенотипом Тн1 СD4+-Т-клеток. В частности, это IFNγ, который необходим при некоторых вирусных и бактериальных инфекциях, а также TNFβ, участвующий в уничтожении клетки-мишени. Однако некоторые СD8+-Т-клетки синтезируют такие цитокины, как IL-4, которые ассоциированы с профилем Тн2 СD4+-Т-клеток. Активация СD8+-Т-клеток Выходящие из тимуса СD8+-Т-клетки не могут уничтожать клетки; вначале они должны активироваться, чтобы затем пролиферировать и дифференцироваться. Для активации необходимо присутствие как первого сигнала - взаимодействия комплекса пептид-МНС с TCR, так и вторых, или костимуляторных. Развитие цитолитической функции также требует синтеза цитокинов, в том числе IL-2, IFNγ и IL-12. На рис. 10.8 показаны два наиболее важных способа активации ЦТЛ в ответ на вирусную инфекцию. В его верхней части показан первый способ, в котором принимают участие СD4+-Т-клетки, специфичные к вирусу и продуцирующие IL-2. При наличии клетки-мишени, инфицированной вирусом, и IL-2, выделяемого СD4+-T-клеткой, индуцируются пролиферация и дифференцировка СD8+-Т-клеток. При таком ответе вирусспецифичные СD4+-Т-клетки активируются при презентации вирусного антигена молекулами МНС II класса на АПК, такой как дендритная клетка или макрофаг. При этом пути активации вирусный эпитоп, который активирует CD4+-T-клетку, вероятнее всего будет отличаться от эпитопа, активирующего СD8+-Т-клетку. Рис. 10.8. Активация и уничтожение клеток-мишеней CD8+-ЦТЛ В средней части рис. 10.8 показано, как CD8+-Т-клетки могут активироваться без участия CD4+-Т-клеток. Такой механизм описан при ответе на некоторые вирусы. В этой ситуации используется перекрестное примирование. При таком пути активации вирусные антигены переносятся от мертвой или умирающей инфицированной клетки в профессиональные АПК, такие как дендритные клетки. Затем дендритные клетки процессируют вирусный антиген, размещают его в молекулы МНС I класса и представляют пептиды вирусспецифичным CD8+-T-клеткам. Так как дендритные клетки также экспрессируют костимуляторные молекулы, такие как В7, они могут активировать вирусспецифичные наивные СD8+-Т-клетки. При этом пути активации СD8+-Т-клетка, вероятно, самостоятельно продуцирует цитокины, необходимые для пролиферации и дифференцировки. Предполагают, что перекрестное примирование может играть важную роль при активации ответов СD8+-Т-клеток на клетки инфицированной ткани, у которых отсутствуют костимуляторные молекулы, а также при ответах на клетки некоторых опухолей. Какие бы межклеточные взаимодействия ни участвовали в активации СD8+-Т-клеток, весьма вероятно, что первые события этой активации похожи на описанные ранее стадии активации СD4+-Т-клеток. Как и CD4, CD8 связан с тирозиновой киназой Lck, а также взаимодействуют те же пары костимуляторных и адгезионных молекул, что и при активации СD4+-Т-клеток: CD28-В7, CD110/CD18-CD54 (LFA-1-ICAM-1) и CD2-CD58. Уничтожение СD8+-Т-клетками клеток-мишеней После активации теперь уже зрелые СD8+-Т-клетки начинают уничтожение клетки-мишени с того, что прикрепляются к ней. В нижней части рис. 10.8 показано, что пары адгезионных молекул, экспрессируемые и на Т-клетке, и на клетке-мишени, помогают поддерживать контакт между клетками в течение нескольких часов. На рисунке также показано, что активированная СD8+-Т-клетка обладает гранулами, в которых содержатся цитотоксические белки, и экспрессирует на поверхности клетки молекулу CD178 (Fas-лиганд). Далее описано, почему эти молекулы являются ключевыми для уничтожения клеток-мишеней. Предполагают, что СD8+-Т-клетки могут уничтожать мишени двумя способами. Первым и, вероятно, преимущественным путем уничтожения большинства мишеней является выделение цитотоксических веществ, содержащихся в гранулах внутри Т-клеток. После прикрепления к клетке-мишени СD8+-Т-клетка перемещает гранулы к поверхности мембраны, обращенной к мишени, и с помощью процесса, называемого экзоцитозом, выделяет их содержимое на поверхность уничтожаемой клетки. Эти цитотоксические вещества образуют поры в мембране клетки-мишени. Основными компонентами гранул, участвующих в уничтожении клеток-мишеней, являются перфорин и гранзимы. Перфорин - это молекула, которая полимеризуется с образованием кольцевидных трансмембранных каналов (или пор) в мембране клеток-мишеней. Это приводит к повышению проницаемости клеточной мембраны и, неизбежно, к смерти клетки. Действие перфорина на мембрану клетки похоже на действие мембраноатакующего комплекса комплемента. При уничтожении клеток этим способом ЦТЛ дополнительно используют гранзимы, набор сериновых протеаз. Гранзимы попадают в уничтожаемую клетку через поры, образуемые при полимеризации молекул перфорина, и взаимодействуют с внутриклеточными компонентами клетки-мишени, стимулируя апоптоз. Поскольку клеточная смерть путем апоптоза не приводит к высвобождению клеточного содержимого, уничтожение инфицированной клетки по этому механизму может предотвращать распространение инфекционного агента (вируса) в другие клетки. Вторым способом уничтожения клеток-мишеней является взаимодействие CD178 (Fas-лиганда) на поверхности Т-клетки с CD95 (Fas) Fas-рецептором, поверхностной молекулой, экспрессируемой на многих клетках организма. Это взаимодействие активирует апоптоз клетки-мишени путем последовательной активации протеолитических ферментов каспазы внутри клетки. Это приводит к тому, что клетка умирает в течение нескольких часов. После того как СD8+-Т-клетка запустит один или оба описанных механизма уничтожения, она отрывается от клетки-мишени, чтобы атаковать и уничтожить следующие клетки-мишени. Как будет показано в следующих подразделах, активация СD8+-Т-клеток и уничтожение клетки-мишени являются не связанными событиями. Это можно продемонстрировать на препарате СD8+-Т-клеток человека, инфицированного вирусом. Эти вирусспецифичные цитотоксические клетки способны уничтожать клетки, инфицированные вирусом, и за пределами организма. При уничтожении инфицированных клеток-мишеней не нужно добавлять никакие дополнительные факторы. Еще раз повторим концепцию МНС-рестрикции Т-клеточного ответа, о которой уже упоминалось в предыдущих главах. Вирусспецифичный СD8+-ЦТЛ распознает, а впоследствии уничтожает клетку-мишень, экспрессируюшую специфическую комбинацию вирусного пептида и определенной молекулы МНС I класса. Это означает, что СD8+-ЦТЛ, специфичный к вирусу гриппа и HLA-A2, например, уничтожает только клетки, которые экспрессируют HLA-A2, нагруженный пептидом, полученным из вируса гриппа. Этот ЦТЛ не уничтожит нормальную неинфицированную клетку организма, экспрессирующую HLA-A2, в отсутствие пептида гриппа. Кроме того, эта вирусспецифичная СD8+-Т-клетка не уничтожит клетки-мишени, экспрессирующие другие комбинации пептидов с молекулами МНС, такие как пептид из вируса кори с HLA-A2 или даже тот же пептид вируса гриппа, связанный с HLA-B3. Эти открытия Р. Цинкернагеля (R.Zinkernagel) и П.Догерти (P.Doherty) (оба получили Нобелевскую премию в 1996 г.) позволили разработать концепцию МНС-рестрикции Т-клеточного ответа, согласно которой Т-клетка распознает комбинацию антигена с молекулой МНС, а не собственно молекулу антигена. Экспрессия комплексов пептидов возбудителя с МНС I класса на поверхности клетки приводит к распознаванию инфицированной клетки СD8+-Т-клетками и ее последующему уничтожению. Таким образом, уничтожение СD8+-Т-клетками обеспечивает механизм элиминации любой клетки организма, инфицированной патогенным агентом. Очевидно, что элиминация патогена приводит к разрушению клеток организма-хозяина, но это приемлемая цена, которую организм может заплатить за удаление источника инфекции. СD8+-Т-клетки практически всегда выступают в качестве цитотоксических клеток как у человека, так и у мыши. Однако существенная часть СD4+-Т-клеток у человека и некоторые - у мыши также обладают цитотоксическими функциями. Как можно предположить из продолжающегося обсуждения МНС-рестрикции, эти цитотоксические СD4+-Т-клетки активируются к уничтожению при распознавании комплекса пептид - МНС II класса на АПК или клетке-мишени. Поскольку активированные СD4+-Т-клетки экспрессируют CD178, но не содержат гранул с цитотоксической активностью, вероятно, они используют взаимодействие CD95-CD178 как основной метод уничтожения клеток-мишеней. Окончание иммунного ответа: индукция клеток памяти Антигенная стимуляция увеличивает количество лимфоцитов, специфичных к стимулирующему антигену, а также число лимфоцитов и других эффекторных клеток, которые рекрутируются цитокинами, синтезированными в ходе ответа. Однако, когда антиген уже уничтожен, необходимо уменьшить объем этого пула активированных клеток; в противном случае организм вскоре переполнится размножающимися клеточными популяциями. На рис. 10.9 показан основной механизм уничтожения активированных Т-клеток - клеточная смерть, вызванная активацией. Рис. 10.9. Клеточная смерть, вызванная активацией. После стимуляции антигеном Т-клетка может уничтожить: 1) саму себя путем выделения растворимой формы CD178 (FasL), который взаимодействует с CD95 (Fas) на той же клетке; 2) другую Т-клетку с CD95, который будет взаимодействовать либо с растворимой, либо мембранной формой CD178 Исследования показывают, что Т-клетки чувствительны к апоптозу после того, как они были активированы, и особенно после повторной стимуляции антигеном. Апоптоз развивается в результате взаимодействия CD95-CD178, которое описано в этой главе ранее. Активированные Т-клетки экспрессируют одновременно и CD95, и CD178 (экспрессия последнего индуцируется активацией). После удаления антигена, например после того, как активированные ЦТЛ уничтожили свои инфицированные мишени, эти ЦТЛ взаимодействуют друг с другом и индуцируют апоптоз. На рис. 10.9 также показано, что активированные клетки выделяют CD178, и эти секретированные молекулы также могут взаимодействовать с экспрессируемыми на поверхности клеток CD95 и вызывать апоптоз. Предполагают, что взаимодействие CD95- CD178 играет ключевую роль в уничтожении большинства активированных CD4+- и СD8+-Т-клеток по окончании антигенной стимуляции . Однако не все клетки, активированные антигеном, умирают; выживает небольшая популяция долгоживущих антигенспецифичных клеток. Они образуют популяцию Т-клеток памяти для антигена и CD4+- или СD8+-Т-клетки памяти. Вторичные (с участием клеток памяти) Т-клеточные ответы более эффективны, чем первичные. Одна из причин этого в том, что стартовый объем клонирования популяции памяти, специфичной для определенного антигена, больше, чем размер непримированной популяции, даже после того, как посредством клеточной смерти, вызванной активацией, удалится большинство размножившихся клеток. Также предполагают, что для индукции полной активации Т-клетки памяти не нуждаются в костимуляторных взаимодействиях В7-CD28. Никаких поверхностных молекул, уникальных для Т-клеток памяти, не обнаружено. Скорее, выявлены небольшие различия в уровне экспрессии тех же молекул (для одних больше, для других меньше) между непримированными Т-клетками и клетками памяти. Также описываются изменения изоформ мембранной фосфатазы CD45; предполагается, что при активации CD45 переходит из формы CD45RA в форму CD45RO, что вызвано альтернативным сплайсингом РНК, транскрибированной с ее гена. Не ясно, необходимо ли наличие антигена, хотя бы и в самой незначительной концентрации, при персистировании клеток памяти; результаты некоторых исследований показывают, что при отсутствии примирующего антигена клетки памяти умирают. Р.Койко, Д.Саншайн, Э.Бенджамини

В ответ на присутствие антигенов. Для каждого антигена формируются соответствующие ему специализировавшиеся плазматические клетки, вырабатывающие специфичные для этого антигена антитела. Антитела распознают антигены, связываясь с определённым эпитопом - характерным фрагментом поверхности или линейной аминокислотной цепи антигена.

Лимфоциты возникают непрерывно из клеток-предшественников в костном мозге . Лимфоциты синтезируют рецепторы клеточной поверхности или секретируют белки, которые специфически связываются с чужеродными молекулами. Эти секретируемые белки известны как антитела. Любая молекула, которая может связываться с антителом, называется антигеном. Термин антитело используется взаимозаменяемо с иммуноглобулином.

Патогены, связанные с антителами, обозначены как клиренс или разрушение. Большинство функций адаптивной иммунной системы можно описать, группируя лимфоциты по трем основным типам. В-клетки Цитотоксические Т-клетки Т-клетки-помощники. . Адаптивный иммунный ответ может быть как гуморальным, так и клеточным. Гуморальный ответ опосредуется В-лимфоцитами, которые выделяют антитела, специфичные для инфекционного агента. Клеточно-опосредованный ответ включает связывание цитотоксических Т-лимфоцитов с инородными или инфицированными клетками с последующим лизису этих клеток.

Антитела состоят из двух лёгких цепей и двух тяжелых цепей. У млекопитающих выделяют пять классов антител (иммуноглобулинов) - IgG, IgA, IgM, IgD, IgE, различающихся между собой по строению и аминокислотному составу тяжёлых цепей и по выполняемым эффекторным функциям.

История изучения

Самое первое антитело было обнаружено Берингом и Китазато в 1890 году, однако в это время о природе обнаруженного столбнячного антитоксина, кроме его специфичности и его присутствия в сыворотке иммунного животного, ничего определенного сказать было нельзя. Только с 1937 года - исследований Тизелиуса и Кабата, начинается изучение молекулярной природы антител. Авторы использовали метод электрофореза белков и продемонстрировали увеличение гамма-глобулиновой фракции сыворотки крови иммунизированных животных. Адсорбция сыворотки антигеном, который был взят для иммунизации, снижала количество белка в данной фракции до уровня интактных животных.

В каких органах формируются иммунные клетки крови

Т-клетки участвуют в обоих ответах через выделение белков цитокинов. Все три типа лимфоцитов переносят рецепторы клеточной поверхности, которые могут связывать антигены. Все антигенные рецепторы представляют собой гликопротеины, и только один тип рецептора синтезируется в любой клетке. Специфика иммунной системы объясняется тем, что одна клетка распознает только один антиген.

Генерация и производство антител

Взаимодействие антитела с антигеном является основой всех иммуногистохимических методов, но также является основой для иммунного ответа. Область антитела, которая реагирует с антигеном, называется паратопом. Область антигена, которая взаимодействует с антителом, определяется как эпитоп. Аффинность является мерой силы связывания эпитопа с антителом.

Строение антител

Антитела являются относительно крупными (~150 кДа - IgG) гликопротеинами, имеющими сложное строение. Состоят из двух идентичных тяжелых цепей (H-цепи, в свою очередь состоящие из V H , C H1 , шарнира, C H2 и C H3 доменов) и из двух идентичных лёгких цепей (L-цепей, состоящих из V L и C L доменов). К тяжелым цепям ковалентно присоединены олигосахариды. При помощи протеазы папаина антитела можно расщепить на два Fab (англ. fragment antigen binding - антиген-связывающий фрагмент) и один (англ. fragment crystallizable - фрагмент, способный к кристаллизации). В зависимости от класса и исполняемых функций антитела могут существовать как в мономерной форме (IgG, IgD, IgE, сывороточный IgA) так и в олигомерной форме (димер-секреторный IgA, пентамер - IgM). Всего различают пять типов тяжелых цепей (α-, γ-, δ-, ε-и μ- цепи) и два типа легких цепей (κ-цепь и λ-цепь).

Реакция антитела является кульминацией ряда взаимодействий между макрофагами, Т-лимфоцитами и В-лимфоцитами. Инфекционные агенты-антигены поглощаются и частично деградируют с помощью антигенпредставляющих клеток, таких как макрофаги, клетки Лангерганса, дендритные клетки, лимфатические узлы и моноциты.

Какие бывают иммуноглобулины

В-клетки меняются на плазматические клетки, которые выделяют большие количества тонко настроенных антител, специфичных для внешнего агента. Некоторые В-клетки превращаются в ячейки памяти, которые могут генерировать более быстрый опосредованный антителом иммунный ответ на будущую инфекцию.

Классификация по тяжелым цепям

Различают пять классов (изотипов ) иммуноглобулинов, различающихся:

• величиной
• зарядом
• последовательностью аминокислот
• содержанием углеводов

Класс IgG классифицируют на четыре подкласса (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), класс IgA - на два подкласса (IgA1, IgA2). Все классы и подклассы составляют девять изотипов, которые присутствуют в норме у всех индивидов. Каждый изотип определяется последовательностью аминокислот константной области тяжелой цепи.

Тесты на антитела включают анализ образца пациента на наличие или отсутствие конкретного антитела или количество присутствующего антитела. Антитела являются частью иммунной системы организма. Это белки иммуноглобулина, которые помогают защитить людей от микроскопических захватчиков, таких как вирусы, бактерии, химические вещества или токсины.

Каждое антитело, которое производится, уникально. Он создан для распознавания конкретной структуры на инвазивной посторонней ячейке или частице. Определенная структура, которая распознается, называется антигеном. Антитела присоединяются к антигенам, создавая комплексы антиген-антитело, которые служат сигналами для остальной части иммунной системы для разрушения клетки или частицы. Существует пять различных классов иммуноглобулинов.

Функции антител

Иммуноглобулины всех изотипов бифункциональны. Это означает, что иммуноглобулин любого типа

• распознает и связывает антиген, а затем
• усиливает киллинг и/или удаление иммунных комплексов, сформированных в результате активации эффекторных механизмов.

Одна область молекулы антител (Fab) определяет ее антигенную специфичность, а другая (Fc) осуществляет эффекторные функции: связывание с рецепторами, которые экспрессированы на клетках организма (например, фагоцитах); связывание с первым компонентом (C1q) системы комплемента для инициации классического пути каскада комплемента.

Что означают результаты теста?

В первый раз, когда кто-то подвергается воздействию чужеродного вещества, такого как вирус или бактерия, он может занять иммунную систему до двух недель, чтобы сделать план антител и создать достаточное количество специфического антитела для борьбы с инфекцией. Он помнит план борьбы с этим микроорганизмом и поддерживает небольшой запас антител. Тесты на антитела обычно включают смешивание образца пациента с известным антигеном, вещество, которое антитело направлено против или продуцируется в ответ, и наблюдение, происходит ли реакция.

Имеет в виду то, что каждый лимфоцит синтезирует антитела только одной определенной специфичности. И эти антитела располагаются на поверхности этого лимфоцита в качестве рецепторов.

Как показывают опыты, все поверхностные иммуноглобулины клетки имеют одинаковый идиотип: когда растворимый антиген, похожий на полимеризованный флагеллин, связывается со специфической клеткой, то все иммуноглобулины клеточной поверхности связываются с данным антигеном и они имеют одинаковую специфичность то есть одинаковый идиотип.

Если присутствует антитело и связывается с известным антигеном, можно определить образование комплекса антитело-антиген. Действительно, нет «нормальной» концентрации антител, поскольку люди производят антитела с разной скоростью. Значение конкретного результата теста зависит от симптомов пациента и конкретных обстоятельств, которые привели к тестированию.

Результаты могут быть представлены качественным образом как «обнаруженные» или «не обнаруженные» в случае антител к агентам, вызывающим хронические инфекции, где любое количество антител считается значимым. Они могут сообщаться как «больше» определенного уровня отсечения, если иммунитет проверяется, или как «иммунный» или «невосприимчивый». Результаты также могут быть представлены как число, представляющее концентрацию.

Антиген связывается с рецепторами, затем избирательно активирует клетку с образованием большого количества антител. И так как клетка синтезирует антитела только одной специфичности, то эта специфичность должна совпадать со специфичностью начального поверхностного рецептора.

Специфичность взаимодействия антител с антигенами не абсолютна, они могут в разной степени перекрестно реагировать с другими антигенами. Антисыворотка, полученная к одному антигену, может реагировать с родственным антигеном, несущим одну или несколько одинаковых или похожих детерминант. Поэтому каждое антитело может реагировать не только с антигеном, который вызвал его образование, но и с другими, иногда совершенно неродственными молекулами. Специфичность антител определяется аминокислотной последовательностью их вариабельных областей.

Титры антител иногда используются для оценки того, насколько значительным является положительный уровень антител. Эти титры включают разбавление образца - создание и тестирование серийных разведений. Наибольшее разведение, которое все еще является положительным, сообщается как отношение «1 к степени разбавления». Это все еще используется, чтобы сообщать о некоторых уровнях антител, особенно в случае аутоиммунных состояний. «Титр антител» - это термин, который также иногда используется в общих чертах для обозначения концентраций антител.

Клонально-селекционная теория :

1. Антитела и лимфоциты с нужной специфичностью уже существуют в организме до первого контакта с антигеном.
2. Лимфоциты, которые участвуют в иммунном ответе, имеют антигенспецифические рецепторы на поверхности своей мембраны. У B-лимфоцитов рецепторы- молекулы той же специфичности, что и антитела, которые лимфоциты впоследствии продуцируют и секретируют.
3. Любой лимфоцит несет на своей поверхности рецепторы только одной специфичности.
4. Лимфоциты, имеющие антиген, проходят стадию пролиферации и формируют большой клон плазматических клеток. Плазматические клетки синтезируют антитела только той специфичности, на которую был запрограммирован лимфоцит-предшественник. Сигналами к пролиферации служат цитокины, которые выделяются другими клетками. Лимфоциты могут сами выделять цитокины.

Вариабельность антител

Антитела являются чрезвычайно вариабельными (в организме одного человека может существовать до 10 8 вариантов антител). Все разнообразие антител проистекает из вариабельности как тяжёлых цепей, так и лёгких цепей. У антител, вырабатываемых тем или иным организмом в ответ на те или иные антигены, выделяют:

Однако с последующим воздействием концентрации арахисового антитела человека снова повышались. Моноспот для инфекционного мононуклеоза. . Они отличаются типом тяжелой цепи, которую они содержат. Изменение полипептидов тяжелой цепи позволяет каждому классу иммуноглобулина функционировать в виде иммунного ответа другого типа или на другой стадии защиты организма. Классы антител также отличаются по своей валентности, т.е. количеству доступных для связывания антигенов.

Классы и подклассы иммуноглобулина человека

Доступ к ссылкам ниже для каждого из пяти основных классов для просмотра их свойств. У людей существует только два вида легких цепей - κ и λ. Цепи κ и λ находятся в 67 и 33% случаев соответственно. Любое антитело может быть образовано ассоциацией одного типа тяжелой цепи с одним типом легкой цепи. В любой возможной комбинации в блоке антител будут две одинаковые тяжелые и легкие цепи.

• Изотипическая вариабельность - проявляется в наличии классов антител (изотипов), различающихся по строению тяжёлых цепей и олигомерностью, вырабатываемых всеми организмами данного вида;
• Аллотипическая вариабельность - проявляется на индивидуальном уровне в пределах данного вида в виде вариабельности аллелей иммуноглобулинов - является генетически детерминированным отличием данного организма от другого;
• Идиотипическая вариабельность - проявляется в различии аминокислотного состава антиген-связывающего участка. Это касается вариабельных и гипервариабельных доменов тяжёлой и лёгкой цепей, непосредственно контактирующих с антигеном.

Контроль пролиферации

Наиболее эффективный контролирующий механизм заключается в том, что продукт реакции одновременно служит ее ингибитором. Этот тип отрицательной обратной связи имеет место при образовании антител. Действие антител нельзя объяснить просто нейтрализацией антигена, потому что целые молекулы IgG подавляют синтез антител намного эффективнее, чем F(ab")2 -фрагменты. Предполагают, что блокада продуктивной фазы T-зависимого B-клеточного ответа возникает в результате образования перекрестных связей между антигеном, IgG и Fc - рецепторами на поверхности B-клеток. Инъекция IgM, усиливает иммунный ответ. Так как антитела именно этого изотипа появляются первыми после введения антигена, то на ранней стадии иммунного ответа им приписывается усиливающая роль.

Кроме того, известно, что существует несколько подклассов х и λ легких цепей. Структурные и функциональные свойства подгрупп вариабельной области легкой цепи лямбда-лёгкой. Антигены представляют собой белки, которые находятся на поверхности патогена. Антигены уникальны для этого патогена.

Когда антиген входит в организм, иммунная система продуцирует против нее антитела. Это похоже на битву с армией, сражающейся с захватчиком. Тип лейкоцитов, называемый лимфоцитом, распознает антиген как чужеродный и продуцирует антитела, специфичные к этому антигену. Каждое антитело имеет уникальную форму сайта связывания, которая фиксирует специфическую форму антигена.

• А. Ройт, Дж. Брюсстофф, Д. Мейл. Иммунология- М.: Мир, 2000 - ISBN 5-03-003362-9
• Иммунология в 3 томах / Под. ред. У. Пола.- М.:Мир, 1988
• В. Г. Галактионов. Иммунология- М.: Изд. МГУ, 1998 - ISBN 5-211-03717-0

См. также

• Абзимы - каталитически активные антитела
• Авидность, аффинность - характеристики связывания антигена и антитела

Антитела - специфические белки гамма- глобулиновой природы, образующиеся в организме в ответ на антигенную стимуляцию и способные специфически взаимодействовать с антигеном (in vivo, in vitro). В соответствии с международной классификацией совокупность сывороточных белков, обладающих свойствами антител, называют иммуноглобулинами .

Как проводится ИФА крови

Антитела уничтожают антиген, который затем поглощается и переваривается макрофагами. Лейкоциты могут также продуцировать химические вещества, называемые антитоксинами, которые разрушают токсины, которые некоторые бактерии производят, когда они вторгаются в организм. Столбняк, дифтерия и скарлатина являются всеми заболеваниями, где бактерии выделяют токсины.

Как только вторгшиеся микробы уничтожены, иммунный ответ падает. Как только у человека была болезнь, они обычно не ловят его снова, потому что организм вырабатывает клетки памяти, специфичные для этого антигена. Ячейки памяти помнят микроб, который вызвал болезнь и быстро превратил правильное антитело, если организм снова подвергся заражению. Патоген быстро разрушается, предотвращая симптомы болезни.

Уникальность антител заключается в том, что они способны специфически взаимодействовать только с тем антигеном, который вызвал их образование.

Иммуноглобулины (Ig) разделены в зависимости от локализации на три группы:

Сывороточные (в крови);

Секреторные (в секретах- содержимом желудочно- кишечного тракта, слезном секрете, слюне, особенно- в грудном молоке) обеспечивают местный иммунитет (иммунитет слизистых);

Антитела представляют собой белковые молекулы, продуцируемые иммунной системой в ответ на аллергены, инфекционные организмы, а иногда и собственные компоненты организма. Инфекционные организмы и аллергены проявляют характерные белки, называемые антигенами. Иммунная система распознает и реагирует на антигены, генерируя соответствующие антитела. Антитело предназначено для «подгонки» только одного конкретного антигена, скорее как ключ в замке. Запираясь на антиген-несущие нарушители, антитела стремятся сделать их безвредными, убить их прямо или «пометить» их для уничтожения другими компонентами иммунной системы.

Поверхностные (на поверхности иммунокомпетентных клеток, особенно В- лимфоцитов).

Любая молекула антител имеет сходное строение (Y- образную форму) и состоит из двух тяжелых (Н) и двух легких (L) цепей, связанных дисульфидными мостиками. Каждая молекула антител имеет два одинаковых антигенсвязывающих фрагмента Fab (fragment antigen binding), определяющих антительную специфичность, и один Fc (fragment constant) фрагмент, который не связывает антиген, но обладает эффекторными биологическими функциями. Он взаимодействует со “своим” рецептором в мембране различных типов клеток (макрофаг, тучная клетка, нейтрофил).

Антитела генерируются в ответ на множество различных вирусных антигенов. Тест-тесты чаще всего ориентированы на антитела к этим белкам оболочки. Более того, почти все быстрые тесты ищут только антитела. Общими особенностями зарегистрированных случаев являются высокие вирусные нагрузки, быстрое прогрессирование заболевания и высокая смертность.

Диагностика проводится для обнаружения

Иммуноглобулины, также известные как антитела, представляют собой молекулы гликопротеина, продуцируемые плазматическими клетками. Они действуют как критическая часть иммунного ответа, специфически распознавая и связываясь с конкретными антигенами, такими как бактерии или вирусы, и помогают в их уничтожении. Иммунный ответ антитела является очень сложным и чрезвычайно специфичным. Различные классы и подклассы иммуноглобулина различаются по своим биологическим особенностям, структуре, специфичности и распределению мишени.

Концевые участки легких и тяжелых цепей молекулы иммуноглобулина вариабельны по составу (аминокислотным последовательностям) и обозначаются как VL и VH области. В их составе выделяют гипервариабельные участки, которые определяют структуру активного центра антител (антигенсвязывающий центр или паратоп). Именно с ним взаимодействует антигенная детерминанта (эпитоп) антигена. Антигенсвязывающий центр антител комплементарен эпитопу антигена по принципу “ключ - замок” и образован гипервариабельными областями L- и Н- цепей. Антитело свяжется антигеном (ключ попадет в замок) только в том случае, если детерминантная группа антигена полностью вместится в щель активного центра антител.

Следовательно, оценка изотипа иммуноглобулина может дать полезную информацию о комплексном гуморальном иммунном ответе. Оценка и знание структуры и классов иммуноглобулина также важны для отбора и подготовки антител в качестве инструментов для иммунологических анализов и других приложений обнаружения.

Растворимые и мембранные иммуноглобулины

Иммуноглобулины встречаются в двух основных формах: растворимые антитела и связанные с мембраной антитела. Альтернативный сплайсинг регулирует производство секретируемых антител и поверхностно-связанных рецепторов В-клеток в В-клетках. Рецептор является прототипом антитела, которое В-клетка готовится к продуцированию.

Легкие и тяжелые цепи состоят из отдельных блоков- доменов . В легких (L) цепях - два домена- один вариабельный (V) и один константный (C), в тяжелых (H) цепях- один V и 3 или 4 (в зависимости от класса иммуноглобулина) C домена.

Существуют легкие цепи двух типов- каппа и лямбда, они встречаются в различных пропорциях в составе различных (всех) классов иммуноглобулинов.

Классы иммуноглобулина

В-клеточный рецептор может связывать только антигены. Генерируемый сигнал вызывает рост и пролиферацию продукции В-клеток и антител внутри плазматической клетки. Различные антитела, продуцируемые плазматическими клетками, классифицируются по изотипу, каждый из которых отличается функцией и антигенными ответами в основном из-за изменчивости структуры. Эта классификация основана на различиях в аминокислотной последовательности в константной области тяжелых цепей антител. Основываясь на различиях в аминокислотной последовательности в константной области легкой цепи, иммуноглобулины могут быть дополнительно подклассифицированы путем определения типа легкой цепи.

Выявлено пять классов тяжелых цепей- альфа (с двумя подклассами), гамма (с четырьмя подклассами), эксилон, мю и дельта. Соответственно обозначению тяжелой цепи обозначается и класс молекул иммуноглобулинов- А, G, E, M и D.

Именно константные области тяжелых цепей, различаясь по аминокислотному составу у различных классов иммуноглобулинов, в конечном результате и определяют специфические свойства иммуноглобулинов каждого класса.

Известно пять классов иммуноглобулинов, отличающихся по строению тяжелых цепей, молекулярной массе, физико- химическим и биологическим характеристикам: IgG, IgM, IgA, IgE, IgD. В составе IgG выделяют 4 подкласса (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), в составе IgA- два подкласса (IgA1, IgA2).

Структурной единицей антител является мономер , состоящий из двух легких и двух тяжелых цепей. Мономерами являются IgG, IgA (сывороточный), IgD и IgE. IgM- пентамер (полимерный Ig). У полимерных иммуноглобулинов имеется дополнительная j (joint) полипептидная цепь, которая объединяет (полимеризует) отдельные субъединицы (в составе пентамера IgM, ди- и тримера секреторного IgA).

Основные биологические характеристики антител.

1. Специфичность - способность взаимодействия с определенным (своим) антигеном (соответствие эпитопа антигена и активного центра антител).

2 . Валентность- количество способных реагировать с антигеном активных центров (это связано с молекулярной организацией- моно- или полимер). Иммуноглобулины могут быть двухвалентными (IgG) или поливалентными (пентамер IgM имеет 10 активных центров). Двух- и более валентные антитела навывают полными антителами . Неполные антитела имеют только один участвующий во взаимодействии с антигеном активный центр (блокирующий эффект на иммунологические реакции , например, на агглютинационные тесты). Их выявляют в антиглобулиновой пробе Кумбса, реакции угнетения связывания комплемента.

3. Афинность - прочность связи между эпитопом антигена и активным центром антител, зависит от их пространственного соответствия.

4. Авидность - интегральная характеристика силы связи между антигеном и антителами, с учетом взаимодействия всех активных центров антител с эпитопами. Поскольку антигены часто поливалентны, связь между отдельными молекулами антигена осуществляется с помощью нескольких антител.

5. Гетерогенность - обусловлена антигенными свойствами антител, наличием у них трех видов антигенных детерминант:

- изотипические - принадлежность антител к определенному классу иммуноглобулинов;

- аллотипические- обусловлены аллельными различиями иммуноглобулинов, кодируемых соответствующими аллелями Ig гена;

- идиотипические- отражают индивидуальные особенности иммуноглобулина, определяемые характеристиками активных центров молекул антител. Даже тогда, когда антитела к конкретному антигену относятся к одному классу, субклассу и даже аллотипу, они характеризуются специфическими отличиями друг от друга (идиотипом ). Это зависит от особенностей строения V- участков H- и L- цепей, множества различных вариантов их аминокислотных последовательностей.

Понятие о поликлональных и моноклональных антителах будет дано в следующих разделах.

Характеристика основных классов иммуноглобулинов.

Ig G. Мономеры, включают четыре субкласса. Концентрация в крови- от 8 до 17 г/л, период полураспада- около 3- 4 недель. Это основной класс иммуноглобулинов, защищающих организм от бактерий, токсинов и вирусов. В наибольшем количестве IgG- антитела вырабатываются на стадии выздоровления после инфекционного заболевания (поздние или 7S антитела), при вторичном иммунном ответе. IgG1 и IgG4 специфически (через Fab- фрагменты) связывают возбудителей (опсонизация) , благодаря Fc- фрагментам IgG взаимодействуют с Fc- рецепторам фагоцитов, способствуя фагоцитозу и лизису микроорганизмов. IgG способны нейтрализовать бактериальные экзотоксины, связывать комплемент. Только IgG способны транспортироваться через плаценту от матери к плоду (проходить через плацентарный барьер) и обеспечивать защиту материнскими антителами плода и новорожденного. В отличие от IgM- антител, IgG- антитела относятся к категории поздних- появляются позже и более длительно выявляются в крови.

IgM. Молекула этого иммуноглобулина представляет собой полимерный Ig из пяти субъединиц, соединенных дисульфидными связями и дополнительной J- цепью, имеет 10 антиген- связывающих центров. Филогенетически это наиболее древний иммуноглобулин. IgM- наиболее ранний класс антител, образующихся при первичном попадании антигена в организм. Наличие IgM- антител к соответствующему возбудителю свидетельствует о свежем инфицировании (текущем инфекционном процессе). Антитела к антигенам грамотрицательных бактерий, жгутиковым антигенам- преимущественно IgM- антитела. IgM- основной класс иммуноглобулинов, синтезируемых у новорожденных и младенцев. IgM у новорожденных- это показатель внутриутробного заражения (краснуха, ЦМВ, токсоплазмоз и другие внутриутробные инфекции), поскольку материнские IgM через плаценту не проходят. Концентрация IgM в крови ниже, чем IgG- 0,5- 2,0 г/л, период полураспада- около недели. IgM способны агглютинировать бактерии, нейтрализовать вирусы, активировать комплемент, активизировать фагоцитоз, связывать эндотоксины грамотрицательных бактерий. IgM обладают большей, чем IgG авидностью (10 активных центров), аффинность (сродство к антигену) меньше, чем у IgG.

IgA. Выделяют сывороточные IgA (мономер) и секреторные IgA (IgAs). Сывороточные IgA составляют 1,4- 4,2 г/л. Секреторные IgAs находятся в слюне, пищеварительных соках, секрете слизистой носа, в молозиве. Они являются первой линией защиты слизистых, обеспечивая их местный иммунитет. IgAs состоят из Ig мономера, J-цепи и гликопротеина (секреторного компонента). Выделяют два изотипа- IgA1 преобладает в сыворотке, субкласс IgA2 - в экстраваскулярных секретах.

Секреторный компонент вырабатывается эпителиальными клетками слизистых оболочек и присоединяется к молекуле IgA в момент прохождения последней через эпителиальные клетки. Секреторный компонент повышает устойчивость молекул IgAs к действию протеолитических ферментов . Основная роль IgA- обеспечение местного иммунитета слизистых. Они препятствуют прикреплению бактерий к слизистым, обеспечивают транспорт полимерных иммунных комплексов с IgA, нейтрализуют энтеротоксин, активируют фагоцитоз и систему комплемента.

IgE . Представляет мономер, в сыворотке крови находится в низких концентрациях . Основная роль- своими Fc- фрагментами прикрепляется к тучным клеткам (мастоцитам) и базофилам и опосредует реакции гиперчувствительности немедленного типа. К IgE относятся “антитела аллергии”- реагины. Уровень IgE повышается при аллергических состояниях, гельминтозах. Антигенсвязывающие Fab- фрагменты молекулы IgE специфически взаимодействует с антигеном (аллергеном), сформировавшийся иммунный комплекс взаимодействует с рецепторами Fc- фрагментов IgE, встроенных в клеточную мембрану базофила или тучной клетки. Это является сигналом для выделения гистамина, других биологически активных веществ и развертывания острой аллергической реакции.

IgD. Мономеры IgD обнаруживают на поверхности развивающихся В- лимфоцитов, в сыворотке находятся в крайне низких концентрациях. Их биологическая роль точно не установлена. Полагают, что IgD участвуют в дифференциации В-клеток, способствуют развитию антиидиотипического ответа, участвуют в аутоиммунных процессах.

С целью определения концентраций иммуноглобулинов отдельных классов применяют несколько методов, чаще используют метод радиальной иммунодиффузии в геле (по Манчини)- разновидность реакции преципитации и ИФА.

Определение антител различных классов имеет важное значение для диагностики инфекционных заболеваний . Обнаружение антител к антигенам микроорганизмов в сыворотках крови- важный критерий при постановке диагноза- серологический метод диагностики. Антитела класса IgM появляются в остром периоде заболевания и относительно быстро исчезают, антитела класса IgG выявляются в более поздние сроки и более длительно (иногда- годами) сохраняются в сыворотках крови переболевших, их в этом случае называют анамнестическими антителами.

Выделяют понятия: титр антител, диагностический титр, исследования парных сывороток. Наибольшее значение имеет выявление IgM- антител и четырехкратное повышение титров антител (или сероконверсия - антитела выявляют во второй пробе при отрицательных результатах с первой сывороткой крови) при исследовании парных - взятых в динамике инфекционного процесса с интервалом в несколько дней- недель проб.

Реакции взаимодействия антител с возбудителями и их антигенами (реакция “антиген- антитело ”) проявляется в виде ряда феноменов- агглютинации, преципитации, нейтрализации, лизиса, связывания комплемента, опсонизации, цитотоксичности и могут быть выявлены различными серологическими реакциями.

Динамика выработки антител. Первичный и вторичный иммунный ответ.

Первичный ответ- при первичном контакте с возбудителем (антигеном), вторичный- при повторном контакте. Основные отличия:

Продолжительность скрытого периода (больше- при первичном);

Скорость нарастания антител (быстрее- при вторичном);

Количество синтезируемых антител (больше- при повторном контакте);

Последовательность синтеза антител различных классов (при первичном более длительно преобладают IgM, при вторичном- быстро синтезируются и преобладают IgG- антитела).

Вторичный иммунный ответ обусловлен формированием клеток иммунной памяти. Пример вторичного иммунного ответа- встреча с возбудителем после вакцинации.

Роль антител в формировании иммунитета.

Антитела имеют важное значение в формировании приобретенного постинфекционного и поствакцинального иммунитета.

1. Связываясь с токсинами, антитела нейтрализуют их, обеспечивая антитоксический иммунитет.

2. Блокируя рецепторы вирусов, антитела препятствуют адсорбции вирусов на клетках, участвуют в противовирусном иммунитете.

3. Комплекс антиген- антитело запускает классический путь активации комплемента с его эффекторными функциями (лизис бактерий, опсонизация, воспаление, стимуляция макрофагов).

4. Антитела принимают участие в опсонизации бактерий, способствуя более эффективному фагоцитозу.

5. Антитела способствуют выведению из организма (с мочой, желчью) растворимых антигенов в виде циркулирующих иммунных комплексов.

IgG принадлежит наибольшая роль в антитоксическом иммунитете, IgM- в антимикробном иммунитете (фагоцитоз корпускулярных антигенов), особенно в отношении грамотрицательных бактерий, IgA- в противовирусном иммунитете (нейтрализация вирусов), IgAs- в местном иммунитете слизистых оболочек, IgE- в реакциях гиперчувствительности немедленного типа.

Глава 5. АНТИТЕЛА. B-ЛИМФОЦИТЫ

Глава 5. АНТИТЕЛА. B-ЛИМФОЦИТЫ

АНТИГЕН

Антиген - любая молекула (соединения разной химической природы: пептиды, углеводы, полифосфаты, стероиды), которая потенциально может быть распознана иммунной системой организма как чужеродная («не своя»). Таким образом, антиген - молекула, несущая признаки генетически чужеродной информации. В качестве синонима применяют также термин «иммуноген», подразумевая, что иммуноген (антиген) способен вызвать ответные реакции иммунной системы, в итоге приводящие к развитию приобретённого иммунитета. Способность вызывать такие ответные реакции (т.е. образование антител и сенсибилизацию - приобретение организмом чувствительности к антигену) присуща не всей молекуле антигена, а только особой её части, которую называют антигенной детерминантой, или эпитопом. У большинства белковых антигенов такую детерминанту образует последовательность из 4-8 аминокислотных остатков, а у полисахаридных антигенов - 3-6 гексозных остатков. Число детерминант у одного вещества может быть различным. Так, у яичного альбумина их не менее 5, у дифтерийного токсина - минимум 80, у тиреоглобулина - более 40. Различают экзогенные (поступающие в организм извне) и эндогенные антигены (аутоантигены - продукты собственных клеток организма), а также антигены, вызывающие аллергические реакции, - аллергены.

АНТИТЕЛА

Антитело - особый растворимый белок с определённой биохимической структурой - иммуноглобулин, который присутствует

в сыворотке крови и других биологических жидкостях и предназначен для связывания антигена. В энциклопедическом словаре медицинских терминов указано следующее определение: антитела (анти- + тела) - глобулины сыворотки крови человека и животных, образующиеся в ответ на попадание в организм различных антигенов (принадлежащих бактериям, вирусам, белковым токсинам и др.) и специфически взаимодействующие с этими антигенами.

. Антитела связывают антиген. Существенным и уникальным свойством антител, отличающим их даже от TCR, служит их способность связывать антиген непосредственно в том виде, в каком он проникает в организм (в нативной конформации). При этом времени на предварительную метаболическую обработку антигена не требуется, поэтому антитела - очень важный фактор безотлагательной защиты организма (например, от сильных ядов, при укусах змей, скорпионов, пчёл и др.).

. Конкретное антитело синтезируется исключительно B-лимфоцитами одного клона. При дифференцировке каждый B-лимфоцит и его дочерние клетки (клон В-лимфоцитов) приобретают способность синтезировать единственный вариант антител с уникальной структурой антигенсвязывающего центра молекулы - т.е. имеет место клональность биосинтеза иммуноглобулинов .

. Множество антител. В то же время вся совокупность В-лимфоцитов организма способна синтезировать огромное разнообразие антител - около 10 6 -10 9 , однако точно установить, сколько разных антигенов потенциально способно связать одно антитело, принципиально невозможно.

. Иммуноглобулины. Все антитела - белки, имеющие глобулярную вторичную структуру, поэтому молекулы этого типа и названы иммуноглобулинами. Антитела принадлежат к суперсемейству иммуноглобулинов (рис. 5-1), куда входят также белки MHC, некоторые молекулы адгезии , TCR, отдельные рецепторы цитокинов [для ИЛ-1 типов I и II, ИЛ-6, M-CSF, c-kit (CD117)], рецепторы для Fc-фрагментов иммуноглобулинов (FcαR, FcγRI, FcγRII), мембранные молекулы CD3, CD4, CD8, CD80 и др.

Рис. 5-1. Структура белков суперсемейства иммуноглобулинов: а - молекула MHC-I состоит из a -цепи, внемембранная её часть связана с короткой цепью Р 2 -микроглобулина; б - молекула MHC-II состоит из двух субъединиц: более длинной a -цепи и р -цепи. Часть каждой цепи выступает над поверхностью клеточной мембраны, цепь содержит трансмембранный участок и небольшой фрагмент в цитоплазме; в - антигенсвязывающая область молекулы TCR состоит из двух цепей: a и р. Каждая цепь представлена двумя внеклеточными иммуноглобулинподобными доменами (вариабельным на NH конце и константным), стабилизированными при помощи S-S связей, и цитоплазматическим стабильным COOH-концом. SH-группа, присутствующая в цитоплазматическом фрагменте a -цепи, может взаимодействовать с мембранными или цитоплазматическими белками; г - мономер молекулы IgM, встроенный в плазматическую мембрану B-лимфоцитов, это рецептор для антигена. Разнообразие специфичностей TCR и иммуноглобулинов обеспечивается возможностью сайтспецифической рекомбинации множества различных генных сегментов, кодирующих отдельные фрагменты молекулы

ИММУНОГЛОБУЛИНЫ

Иммуноглобулины [международная аббревиатура - Ig (Immunoglobulin)] - класс структурно связанных белков, содержащих 2 вида парных полипептидных цепей: лёгкие (L, от англ. Light - лёгкий), с низкой молекулярной массой, и тяжёлые (H, от англ. Heavy - тяжёлый), с высокой молекулярной массой. Все 4 цепи соединены вместе дисульфидными связями. Принципиальная схема строения молекулы иммуноглобулина (мономер) приведена на рис. 5-2.

Рис. 5-2. Молекула иммуноглобулина: L - лёгкие цепи; H - тяжёлые цепи; V - вариабельная область; С - константная область; N-концевые области L- и Н-цепей (V-область) образуют 2 антигенсвязывающих центра - (Fab) 2 -фрагмент. Fc-фрагмент молекулы взаимодействует со своим рецептором на мембране различных типов клеток (макрофаги, нейтрофилы, тучные клетки)

Классы иммуноглобулинов

На основании структурных и антигенных признаков Н-цепей иммуноглобулины подразделяют (в порядке относительного содержания в сыворотке крови) на 5 классов: IgG (80%), IgA (15%), IgM (10%), IgD (менее 0,1%), IgE (менее 0,01%). Заглавная латинская буква справа от «Ig» обозначает класс иммуноглобулина - М, G, А, Е или D. Молекулы IgG, IgD и IgE мономеры, IgM - пентамер; молекулы IgA в сыворотке крови - мономеры, а в экскретируемых жидкостях (слёзная, слюна, секреты слизистых оболочек) - димеры (рис. 5-3).

Рис. 5-3. Мономеры и полимеры иммуноглобулинов. J-цепь (от англ. Joining - связывающая) связывает остатки цистеина на C-концах тяжёлых цепей IgM и IgA

. Подклассы. У иммуноглобулинов классов G (IgG) и A (IgA) имеется несколько подклассов: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 и IgA1,

IgA2.

. Изотипы. Классы и подклассы иммуноглобулинов иначе называют изотипами, они одинаковы у всех особей данного вида.

. Аллотипы. Индивидуальные аллельные варианты иммуноглобулинов в пределах одного изотипа называются аллотипами.

. Идиотипы. По антигенной специфичности антитела относят к различным идиотипам.

Структура иммуноглобулинов

. Фрагменты молекулы иммуноглобулина (см. рис. 5-2). Путём протеолитического расщепления молекулы иммуноглобулина с последующей ионообменной хроматографией можно получить 3 фрагмента: 1 Fc-фрагмент и 2 Fab-фрагмента.

◊ Fab-фрагменты (Fragment, antigen binding - антигенсвязывающие фрагменты) - 2 одинаковых фрагмента, сохраняющих способность связывать антиген.

◊ Fc-фрагмент (Fragment, constantorcrystallizable - константный фрагмент) - непарный, легко кристаллизуется. Fc-фрагменты иммуноглобулинов в пределах одного изотипа строго идентичны (независимо от специфичности антител к антигенам). Они обеспечивают взаимодействие комплексов антиген-антитело с системой комплемента, фагоцитами, эозинофилами, базофилами, тучными клетками. При этом каждый класс иммуноглобулинов взаимодействует только с определёнными эффекторными клетками или молекулами.

. Тяжёлые цепи определяют различия между классами иммуноглобулинов, поэтому разные типы тяжёлых цепей обозначают греческими буквами соответственно латинской аббревиатуре класса: для IgM - μ, для IgG - γ, для IgA - α, для IgE - ε, для IgD - δ. Каждая из H-цепей молекул IgG, IgD и IgA состоит из 4 доменов (см. рис. 5-2): вариабельного - VH и константных (СН1, СН2, СН3). H-цепи молекул IgM и IgE содержат дополнительный домен - СН4.

. Лёгкие цепи примыкают к N-концу тяжёлых цепей. Каждая L-цепь состоит из двух доменов - VL и CL. Известно 2 типа лёгких цепей иммуноглобулинов - κ и λ. Функциональ-

ные различия между иммуноглобулинами с лёгкими κ- или λ-цепями не выявлены.

. Домены. Вторичная структура полипептидных цепей представлена доменами (см. рис. 5-1), каждый из которых включает около 110 аминокислотных остатков.

◊ V-домены обеих цепей имеют сильно варьирующий аминокислотный состав (отсюда и их обозначение - Variable), что позволяет им связывать разные антигены.

♦ Гипервариабельные участки. Внутри V-доменов выделяют несколько гипервариабельных участков: HVR1,

HVR2, HVR3 (HVR - от Hypervariable Region). Другое

обозначение - CDR (Complementarity Determining Region), т.е. области молекулы иммуноглобулина, определяющие её комплементарность антигену.

♦ Каркасные области. Промежутки между гипервариабельными участками обозначают как FR (Framework Regions), т.е. каркасные области: FR1, FR2, FR3 и FR4. Помимо чисто «скелетной», для них характерны и другие функции, не связанные с распознаванием антигенов: FRучастки V-области молекул иммуноглобулинов могут обладать ферментативной (протеазной и нуклеазной) активностью, связывать ионы металлов и суперантигены.

◊ C-домены. Остальные домены имеют строго инвариантный для каждого изотипа иммуноглобулинов аминокислотный состав и называются C-доменами (от Constant).

♦ В C-доменах и в FR-участках V-доменов содержатся одинаковые аминокислотные последовательности, что рассматривают как молекулярное свидетельство генетической общности.

♦ Гомологичные последовательности аминокислот присутствуют (помимо иммуноглобулинов) и в молекулах других белков, объединяемых с иммуноглобулинами в одно молекулярное суперсемейство иммуноглобулинов (см. выше и рис. 5-1).

Большое количество возможных комбинаций L- и H-цепей создаёт многообразие антител каждого индивидуума.

. Формы иммуноглобулинов. Молекулы иммуноглобулинов одной и той же специфичности присутствуют в организме в трёх формах: растворимой, трансмембранной и связанной.

◊ Растворимая. В крови и других биологических жидкостях (секретируемый клеткой иммуноглобулин).

◊ Трансмембранная. На мембране B-лимфоцита в составе антигенраспознающего рецептора B-лимфоцитов - BCR. Трансмембранные формы всех классов иммуноглобулинов (включая IgM и IgA) - мономеры.

◊ Связанная. Иммуноглобулины, за Fc-конец связанные с Fс-рецепторами клеток (макрофагами, нейтрофилами, эозинофилами). Все антитела, кроме IgE, могут фиксироваться FcR клеток только в комплексе с антигеном.

Связывание антигена

Гипервариабельные участки V-области антитела (как и TCR) непосредственно и комплементарно связывают антиген с помощью ионных, ван-дер-ваальсовых, водородных и гидрофобных взаимодействий (сил, связей).

. Эпитоп (антигенная детерминанта - см. выше) - участок молекулы антигена, непосредственно участвующий в образовании ионных, водородных, ван-дер-ваальсовых и гидрофобных связей с активным центром Fab-фрагмента.

. Сродство между антигеном и антителом количественно характеризуют понятиями «аффинность» и «авидность».

. Аффинность. Силу химической связи одного антигенного эпитопа с одним из активных центров молекулы иммуноглобулина называют аффинностью связи антитела с антигеном. Аффинность количественно принято оценивать по константе диссоциации (в моль -1) одного антигенного эпитопа с одним активным центром.

Так как у цельных молекул мономерных иммуноглобулинов присутствует по 2 потенциально равнозначных симметрично расположенных активных центра для связывания антигена, у димерного IgA - 4, а у пентамерного IgM - 10, скорость диссоциации целой молекулы иммуноглобулина со всеми связанными эпитопами меньше, чем скорость диссоциации одного из активных центров.

. Авидность. Силу связи целой молекулы антитела со всеми антигенными эпитопами, которые ей удалось связать, называют авидностью связи антитела с антигеном.

ГЕНЫ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ

Зародышевые гены иммуноглобулинов. У здорового человека B-лимфоциты в течение жизни создают несколько миллионов вариантов антител, связывающих разные антигены (потенциально 10 16 антигенов). Никакой геном физически не несёт столько различных структурных генов. Количество наследуемого от родителей генетического материала (ДНК), определяющего биосинтез антител, не так уж и велико - немногим более 120 структурных генов. Это наследуемое множество генов - зародышевые гены иммуноглобулинов (зародышевая конфигурация генов).

Гены вариабельных доменов

Во всех соматических клетках, включая СКК, гены иммуноглобулинов находятся именно в зародышевой конфигурации, где гены V-участков представлены в виде отдельных сегментов, расположенных друг относительно друга на значительном расстоянии и сгруппированных в несколько кластеров: собственно V (вариабельный), J (связующий), а у тяжёлых цепей также D (от англ. Diversity - разнообразие). Процесс формирования разнообразия структурных генов для миллионов вариантов V-участков молекул иммуноглобулинов продолжается в течение всей жизни в процессе дифференцировки B-лимфоцитов и является запрограммированнослучайным. В его основе лежат 3 механизма, свойственные только генам антигенсвязывающих молекул (иммуноглобулин, TCR): соматическая рекомбинация, неточность связей между V, D и J сегментами и гипермутагенез.

. Соматическая рекомбинация. На самом раннем этапе дифференцировки лимфоцитов начинается сложный генетический процесс объединения сегментов ДНК, предназначенных для кодирования разных частей антигенсвязывающих молекул - V- и C-доменов. В непрерывную последовательность ДНК соединяются по одному сегменту из V-, D- и J-областей, при этом в каждом отдельном B-лимфоците возникает уникальная комбинация VDJ для тяжёлой цепи и VJ - для лёгкой цепи. Вся остальная ДНК зародышевого гена выбрасывается из генома в виде кольцевых ДНК.

◊ Число возможных комбинаций можно подсчитать. Для к-цепи из 40 V-сегментов и 5 J-сегментов может получиться 40x5=200 вариантов V-области; для λ-цепи - 30x4=120 вариантов; всего для лёгких цепей 320 вариантов; для тяжёлой цепи 50V×30D×6J=9000 вариантов антигенсвязывающих областей. В целой молекуле иммуноглобулина разные лёгкие и тяжёлые цепи объединяются в тетрамер также случайным образом (по крайней мере теоретически). Число случайных сочетаний из 320 и 9000 - около 3x10 6 .

◊ Рекомбиназы. Рекомбинацию ДНК генов иммуноглобулинов катализируют специальные ферменты - рекомбиназы (RAG1 и RAG2 - Recombination-Activating Gene). Они же катализируют рекомбинацию ДНК генов TCR в T-лимфоцитах, т.е. рекомбиназы - уникальные ферменты лимфоцитов. Однако в В-лимфоцитах эти ферменты не «трогают» гены TCR, а в T-лимфоцитах «обходят» гены иммуноглобулинов. Следовательно, до начала процесса перестройки ДНК в клетке уже существуют регуляторные белки, различные у T- и В-лимфоцитов.

. Неточность связи V-D-J. Под неточностью связей сегментов V, D и J понимают тот факт, что при их формировании происходит добавление лишних нуклеотидов. Выделяют 2 типа таких нуклеотидов: P- и N-нуклеотиды.

◊ Нуклеотиды P (от англ. Palindromic sequences - зеркальные последовательности) возникают на концах каждого из сегментов, вовлечённых в рекомбинацию, при вырезании одноцепочечных петель ДНК (шпилек) и «достройки хвостов» ферментами репарации ДНК.

◊ Нуклеотиды N (от англ. Nontemplate-encoded - нематрично кодируемые), характерные только для тяжёлых цепей, случайным образом пристраиваются к концам V-, D- и J-сегментов специальным ферментом - терминальной дезоксинуклеотидилтрансферазой.

◊ С учётом присоединения N- и P-нуклеотидов число вариантов антигенсвязывающих областей целых молекул иммуноглобулинов составляет порядка 10 13 . Если учесть аллельные варианты V-, D- и J-сегментов, то мыслимое разнообразие составит около 10 16 (в действительности это

число меньше, поскольку в организме нет такого количества лимфоцитов). ◊ В 2/3 случаев «платой» за попытки увеличить разнообразие антигенсвязывающих областей антител служит непродуктивная рекомбинация генов, т.е. сдвиг рамки считывания или генерация стоп-кодонов, делающий невозможной трансляцию белка.

. Гипермутагенез - запланированное повышение частоты точечных мутаций - отличает гены иммуноглобулинов даже от генов TCR. Гипермутагенез имеет место только в В-лимфоцитах во время иммуногенеза (т.е. после состоявшегося распознавания антигена и начавшегося иммунного ответа) в зародышевых центрах лимфоидных фолликулов периферических лимфоидных органов и тканей (лимфатических узлов, селёзенки, диффузных скоплений). Частота точечных мутаций в V-генах иммуноглобулинов достигает 1 нуклеотида из 1000 на 1 митоз (т.е. каждый второй В-лимфоцит клона в зародышевом центре приобретает точечную мутацию в V гене иммуноглобулинов), тогда как для всей остальной ДНК она на 9 порядков ниже.

Гены константных доменов

Структурные гены константных доменов полипептидных цепей иммуноглобулинов расположены в тех же хромосомах, что и V-, D- и J-гены, к 3"-концу от J-сегментов.

. Лёгкая цепь (рис. 5-4). Для лёгких κ- и λ-цепей существует по одному C-гену - Сκ и Cλ «Стыковка» нуклеотидного кода для V- и C-доменов лёгких цепей происходит на уровне не ДНК, а РНК - по механизму сплайсинга первичного транскрипта РНК.

. Тяжёлая цепь (рис. 5-5) каждого изотипа иммуноглобулинов также кодируется отдельным C-геном. У человека такие гены расположены в следующем порядке, считая от J-сегмента к 3"-концу: Сμ, Сδ, Сγ3, Сγ1, ψСε (псевдоген е-цепи), Cα1, Cγ2, Cγ4, Сε, Сα2.

Завершившие лимфопоэз В-лимфоциты (независимо от специфичности их BCR) экспрессируют иммуноглобулины только классов IgM и IgD. При этом мРНК транскрибируется в виде непрерывного первичного транскрипта с перестроенных генов VDJ и

Рис. 5-4. Структура генов и синтез белка лёгкой (L) цепи иммуноглобулинов

Сμ/Cδ. При этом ДНК остальных C-генов других изотипов остаётся нетронутой. В результате альтернативного сплайсинга первичного транскрипта образуются мРНК отдельно для тяжёлых цепей IgM и IgD, которые и транслируются в белок. Этим процессом заканчивается полноценный лимфопоэз В-клеток.

Рис. 5-5. Структура генов тяжёлой (Н) цепи иммуноглобулинов человека

Переключение изотипов иммуноглобулинов

В процессе развития иммунного ответа, т.е. после распознавания антигена и под действием определённых цитокинов и молекул клеточной мембраны T-лимфоцитов, может происходить переключение синтеза иммуноглобулинов на другие изотипы - IgG, IgE, IgA (рис. 5-6).

Переключение изотипа тяжёлой цепи тоже идёт по механизму рекомбинации ДНК: к ранее перестроенной комбинации VDJ присоединяется один из C-генов тяжёлой цепи (Су1, Су2, Су3,

Рис. 5-6. Рекомбинация ДНК при переключении изотипов иммуноглобулинов В-лимфоцитов

Сγ4, Сε, Сα1 или Сα2). При этом происходит разрыв ДНК по областям переключения - SR (Switch Region), расположенным в интронах перед каждым C-геном (за исключением С5).

ДНК C-генов, предшествующих задействованному, элиминируется в виде кольцевых структур, поэтому дальнейшее переключение изотипа возможно только по направлению к 3"-концу.

Установлено, что гипермутагенез и переключение изотипов иммуноглобулинов катализируются ферментом AID (Activation Induced Cytidine Deaminase - цитидиндезаминаза, индуцируемая активацией). Этот фермент специфически атакует экспрессированные гены иммуноглобулинов и отщепляет аминогруппы от цитидиновых оснований, которыми богата ДНК этих генов. В результате этого цитозины преобразуются в урацилы, которые распознаются и вырезаются ферментами репарации ДНК. Последующая цепочка каталитических реакций с участием более чем десяти различных белков (эндонуклеаз, фосфатаз, полимераз, гистонов и т.п.) приводит к появлению мутаций (в случае гипермутагенеза) или двуцепочечных разрывов в ДНК по областям переключения изотипов.

B-ЛИМФОЦИТЫ

Рецептор BCR

Молекула иммуноглобулина способна связывать антиген как в растворе, так и в иммобилизованном на клетке состоянии, однако для формирования полноценного BCR необходимы ещё 2 полипептида, называемые (на наш взгляд, неудачно) (CD79a) и Igβ (CD79b). Все 6 полипептидных цепей BCR представлены на рис. 5-7.

Внеклеточный домен. Igαи Igβ имеют по одному внеклеточному домену, которым они прочно, но нековалентно связаны с тяжёлыми цепями иммуноглобулинового компонента BCR.

Цитоплазматические активирующие последовательности. В ци-

топлазматических участках Igαи Igβ присутствуют характерные последовательности аминокислотных остатков, называемые иммунорецепторными тирозинсодержащими активирующими после-

Рис. 5-7. Антигенраспознающий рецептор В-лимфоцита

довательностями (ITAM - Immunoreceptor Tyrosine-based Activation Motif); такие же последовательности присутствуют в проводящих сигнал компонентах антигенраспознающего рецептора T-клеток.

Активация B-лимфоцита. Для эффективной активации В-клетки через BCR необходима перекрёстная «сшивка» антигеном нескольких BCR. Для этого молекула антигена должна иметь повторяющиеся эпитопы на своей поверхности. Дальнейшие события активации B-лимфоцита показаны на рис. 5-8.

Рис. 5-8. Активация В-лимфоцита: внутриклеточная передача «сигнала»

Корецепторный комплекс

Повторяющиеся эпитопы есть не на каждом антигене; следовательно, не каждый антиген способен вызвать перекрёстную сшивку BCR, поэтому необходим дополнительный корецепторный комплекс мембранных молекул, связанных с внутриклеточными системами проведения сигналов. В этот комплекс входят по крайней мере 3 мембранные молекулы: CD19, CR2 (CD21) и TAPA-1 (CD81).

. CR2 - рецептор для компонентов комплемента. Связывание CR2 с продуктами деградации компонентов комплемента (C3b, C3dg и C3bi) вызывает фосфорилирование молекулы CD19 ассоциированными с BCR киназами.

. CD19. Фосфорилированная молекула CD19 активирует фосфатидилинозит-3-киназу и молекулу Vav (многофункциональная молекула проведения внутриклеточных сигналов), которые усиливают активационные реакции, инициированные BCR (рис. 5-8).

. TAPA-1 (Target of AntiProliferative Antibody - мишень для антипролиферативных антител) в мембране физически примыкает к CD19 и CR2, но роль этой молекулы неизвестна.

Дифференцировка B-лимфоцитов

Дифференцировка B-лимфоцитов из общей лимфоидной клетки-предшественника (потомка СКК) включает несколько этапов и процессов: перестройку генов иммуноглобулинов и интеграцию их продуктов в клеточный метаболизм; экспрессию генов молекул, обеспечивающих проведение сигнала с BCR внутрь клетки; экспрессию генов мембранных молекул, необходимых для взаимодействия с другими клетками (в первую очередь с T-лимфоцитами и ФДК); экспрессию на мембране корецепторных комплексов.

В 2-лимфоциты

Этапы В2-лимфопоэза. В лимфопоэзе B2-лимфоцитов выделяют 6 этапов: общая лимфоидная клетка-предшественник → ранняя про-B-клетка → поздняя про-B-клетка → большая пре-B-клетка → малая пре-B-клетка → незрелая B-клетка → зрелая наивная B-клетка (выходит из костного мозга в периферическую лимфоидную ткань).

. Общая лимфоидная клетка-предшественник. Экспрессирует несколько молекул адгезии, обеспечивающих оседлость в течение необходимого периода времени в костном мозге, среди них VLA-4 (Very Late Activation Antigen-4 - очень поздний активационный антиген 4), лигандом которого на клетках стромы служит VCAM-1 (Vascular Cell Adhesion Molecule-1 - молекула-1 адгезии к стенке сосуда).

. Ранняя про-B-клетка. Происходит D-J-рекомбинация в генах тяжёлых цепей, на обеих гомологичных хромосомах. В этой стадии (помимо молекул адгезии) экспрессируется рецептор c-kit (CD117) для первого фактора роста - мембранной молекулы клеток стромы SCF - фактора стволовых клеток. Это взаимодействие обеспечивает прохождение предшественниками B-лимфоцитов, ещё не поделёнными на клоны по антигенраспознающим рецепторам, необходимого числа митозов.

. Поздняя про-B-клетка. Происходит V-DJ-рекомбинация генов иммуноглобулинов сначала на одной из гомологичных хромосом. Если она окажется непродуктивной, то та же попытка повторяется на второй гомологичной хромосоме. Если перестройка на первой хромосоме продуктивна, вторая хромосома использована не будет. При этом образуется так называемое аллельное исключение (allelic exclusion), когда белок иммуноглобулина будет кодироваться только одной хромосомой, а вторая будет «молчащей». В результате индивидуальный лимфоцит сможет продуцировать антитела только одной специфичности. Этот процесс закладывает основу клональности антител.

◊ Как только в клетке происходит трансляция полипептида тяжёлой цепи, он экспрессируется на мембране в составе так называемого пре-B-рецептора. Этот рецептор содержит суррогатную лёгкую цепь (идентичную для всех клеток на этой стадии созревания), μ-цепь, Igα, Igβ. Экспрессия этого рецептора транзиторна, но абсолютно необходима для правильной дифференцировки B-лимфоцитов.

◊ Поздняя про-B-клетка также экспрессирует рецепторы для цитокинов ИЛ-7 и SDF-1, секретируемых клетками стромы и вызывающих пролиферацию и накопление «полуклонов» B-лимфоцитов (про-B- и больших пре-B-клеток) с уже известной специфичностью по тяжёлой цепи, но ещё неизвестной - по лёгкой. Это тоже увеличивает разнообразие молекул иммуноглобулинов: с одной и той же тяжёлой цепью будет сочетаться больше разных вариантов лёгких цепей.

. Пре-B-клетка. Происходит V-J-перестройка генов иммуноглобулинов лёгких цепей (сначала одной из цепей - к или λ) на одной из гомологичных хромосом. Если продуктивная

перестройка не получится с первой попытки, предпринимаются следующие. Клетки, в которых не произошло ни одной продуктивной перестройки в генах тяжёлых и лёгких цепей, погибают по механизму апоптоза - явления, весьма распространённого среди лимфоцитов.

. Незрелый B-лимфоцит. Уже экспрессируется дефинитивный BCR, содержащий L-цепь, μ-цепь, + Igα + Igβ.

Развитие толерантности. На стадии незрелых B-лимфоцитов начинается также развитие толерантности к собственным тканям организма. Для этого предусмотрено 3 механизма: делеция аутореактивных клонов, ареактивность (анергия) и «редактирование» рецептора по антигенной специфичности. Первые два механизма продолжают действовать и по выходе лимфоцита из костного мозга, т.е. при контакте со значительными количествами аутоантигенов.

. Негативная селекция и делеция клонов. Связывание мембранного антигена незрелой B-клеткой (экспрессирует IgM-BCR, но ещё отсутствует IgD-BCR) служит сигналом для её апоптоза. Таким образом, удаляются B-лимфоциты, несущие антигенраспознающие рецепторы, способные связывать белки собственных тканей.

. Ареактивность. Связывание незрелым B-лимфоцитом растворимого антигена не приводит к апоптозу, но лимфоцит приходит в состояние анергии, т.е. проведение сигнала от BCR блокируется и лимфоцит не активируется.

. «Редактирование» рецепторов происходит в небольшой части незрелых B-клеток, в которых ещё активны рекомбиназы. В этих клетках связывание IgM (в составе BCR на поверхности незрелого B-лимфоцита) с антигеном служит сигналом для запуска повторного процесса рекомбинации VDJ/VJ: образующаяся при этом новая комбинация может не быть аутореактивной.

Маркёр завершения B-лимфопоэза (образования зрелого наивного B-лимфоцита, готового к выходу из костного мозга в периферическую лимфоидную ткань) - одновременная экспрессия (коэкспрессия) на мембране двух типов BCR - с IgM и IgD (причём IgD больше, чем IgM).

Иммуногенез. После распознавания антигена и вступления в иммунный ответ B-лимфоцит проходит в фолликулах перифери-

ческих лимфоидных органов и тканей ещё 2 стадии додифференцировки, которые называют иммуногенезом.

. Пролиферация центробластов. В фолликулах В-лимфоциты, называемые на этой стадии центробластами, интенсивно пролиферируют, удерживаясь связями со специальными клетками стромы - ФДК.

На ФДК экспрессированы необычные рецепторы для иммуноглобулинов (FcR), способные продолжительное время (дни, месяцы, возможно, годы) удерживать комплекс антиген-антитело на мембране клетки.

В центробластах происходит возрастание аффинности антител в отношении специфического антигена по механизму гипермутагенеза, так как на этом этапе дифференцировки выживают те из вновь мутировавших В-лимфоцитов, у которых аффинность BCR к антигенам на поверхности ФДК выше. Этот процесс также называют положительной селекцией.

. Выбор дальнейшего пути. На второй стадии иммуногенеза происходит выбор: В-лимфоцит становится либо В-лимфоцитом памяти (дифференцированный резерв на случай повторной встречи с тем же антигеном), либо плазмоцитом (плазматической клеткой) - продуцентом больших количеств секретируемых антител заданной специфичности (рис. 5-9).

Описанный путь дифференцировки характерен для В2-лимфоцитов, которые давно известны и хорошо изучены. Однако существует и другая субпопуляция В-лимфоцитов - В1-клетки.

В1-лимфоциты

В свою очередь, В1-лимфоциты подразделяют на 2 субпопуляции: В1а (CD5 +) и В1b (CD5 -).

Предшественники В1а-лимфоцитов ещё в эмбриональном периоде мигрируют из эмбриональных кроветворных тканей (фетальной печени, оментума) в брюшную и плевральную полости, где существуют как самоподдерживающаяся популяция. В1b-лимфоциты тоже происходят из фетальных предшественников, однако их пул у взрослых может частично пополняться за счёт костного мозга.

Рис. 5-9. B-лимфоцит и плазматическая клетка. Активированные B-лимфоциты, т.е. распознавшие антигенную детерминанту и получившие сигнал к пролиферации, пролиферируют и заканчивают дифференцировку. Совокупность окончательно дифференцированных потомков B-лимфоцита составляет клон плазматических клеток, синтезирующих антитела (иммуноглобулины) именно к этой и только к этой антигенной детерминанте. Обратите внимание, что в цитоплазме плазматической клетки присутствует большое количество синтезирующего белок аппарата - гранулярной эндоплазматической сети. На мембране плазмоцита уже нет ни иммуноглобулинов, ни MHC-II. В этих клетках прекращается переключение классов иммуноглобулинов и гипермутагенез, а образование антител уже не зависит от контакта с антигеном и взаимодействий с T-лимфоцитами

Предназначение B1-лимфоцитов - быстрый ответ на проникающие в организм широко распространённые патогены (преимущественно бактерии). Многие В1-клетки продуцируют антитела, специфичные к аутоантигенам.

Разнообразие антител, продуцируемых B1-лимфоцитами, невелико; как правило, они полиспецифичны. Почти все антитела В1-клеток принадлежат к IgM-изотипу и распознают наиболее распространённые соединения клеточных стенок бактерий.

Преобладающая часть нормального IgM сыворотки крови здорового человека синтезируется именно B1-лимфоцитами.

Предполагают, что основная функция B1a-лимфоцитов - секреция естественных антител, а B1b-лимфоцитьI участвуют в продукции антител к Т-независимым антигенам.

Естественные (конститутивные) иммуноглобулины

Ещё до встречи с каким бы то ни было внешним антигеном в крови и биологических жидкостях организма уже присутствуют так называемые естественные (конститутивные) иммуноглобулины. У взрослых большинство из них относится к IgG, но есть также IgA и IgM. Эти антитела способны связывать множество антигенов (как эндо-, так и экзогенных). Мишенями для нормальных иммуноглобулинов могут быть другие иммуноглобулины; TCR; молекулы CD4, CD5 и HLA-I; FcγR; лиганды для молекул межклеточной адгезии и др.

Функции естественных антител. Есть основания полагать, что естественные антитела выполняют ряд весьма важных для здоровья организма функций: «первая линия обороны» против патогенов; удаление из организма погибших клеток и продуктов катаболизма; презентация антигенов T-лимфоцитам; поддержание гомеостаза аутоиммунной реактивности; противовоспалительное действие (нейтрализация суперантигенов; индукция синтеза противовоспалительных цитокинов; аттенуация комплементзависимого повреждения тканей и др.).