Caractéristiques générales de la réactivité immunologique. Réactions immunologiques : agglutination, précipitation, lyse Réactions immunologiques d'agglutination

1.1. RÉACTION D'AGGLUTATION (RA)

RÉACTION D'AGGLUTATION (RA)

De par sa spécificité, sa simplicité de mise en scène et son caractère démonstratif, la réaction d'agglutination s'est généralisée dans les pratique microbiologique diagnostiquer plusieurs maladies infectieuses.

La réaction d'agglutination est basée sur la spécificité de l'interaction des anticorps (agglutinines) avec des cellules microbiennes entières ou autres (agglutinogènes). À la suite de cette interaction, des particules se forment - des agglomérats qui précipitent (agglutinent) sous forme de flocons.

Des bactéries vivantes et tuées, des spirochètes, des champignons, des protozoaires, des rickettsies, ainsi que des érythrocytes et d'autres cellules peuvent participer à la réaction d'agglutination. La réaction se déroule en deux phases: la première (invisible) - spécifique, la combinaison d'antigène et d'anticorps, la seconde (visible) - non spécifique, collage d'antigènes, c'est-à-dire formation d'agglutination.

L'agglutinat se forme lorsqu'un centre actif d'un anticorps bivalent rejoint le groupe déterminant d'un antigène. La réaction d'agglutination, comme toute réaction sérologique, se déroule en présence d'électrolytes.

Extérieurement, la manifestation d'une réaction d'agglutination positive est double. Dans les microbes flagellés qui n'ont qu'un antigène somatique O–, les cellules microbiennes elles-mêmes adhèrent directement. Cette agglutination est dite à grain fin. Il a lieu dans les 18 à 22 heures. v

Les microbes flagellés ont deux antigènes - l'antigène O somatique et l'antigène H flagellaire. Si les cellules collent avec les flagelles, de gros flocons lâches se forment et cette réaction d'agglutination est appelée à gros grains. Elle survient dans les 2 à 4 heures.

La réaction d'agglutination peut être définie à la fois dans le but de déterminer qualitativement et quantitativement des anticorps spécifiques dans le sérum sanguin du patient, et dans le but de déterminer l'espèce de l'agent pathogène isolé. v

La réaction d'agglutination peut être définie à la fois dans une version étendue, vous permettant de travailler avec du sérum dilué à un titre diagnostique, et dans une variante de définition d'une réaction approximative, qui, en principe, vous permet de détecter des anticorps spécifiques ou de déterminer l'espèce de le pathogène.

Lors de la mise en place d'une réaction d'agglutination détaillée, afin de détecter des anticorps spécifiques dans le sérum sanguin de la personne examinée, le sérum à tester est prélevé à une dilution de 1:50 ou 1: 100. Cela est dû au fait que les anticorps normaux peuvent être trouvés à des concentrations très élevées dans le sérum entier ou légèrement dilué, et alors les résultats de la réaction peuvent être inexacts. Le matériel de test pour cette variante de la réaction est le sang du patient.

Le sang est prélevé à jeun ou au plus tôt 6 heures après un repas (sinon, il peut y avoir des gouttelettes de graisse dans le sérum sanguin, le rendant trouble et impropre à la recherche). Le sérum sanguin du patient est généralement obtenu au cours de la deuxième semaine de la maladie, en recueillant 3 à 4 ml de sang stérile de la veine cubitale (à ce moment-là, la quantité maximale d'anticorps spécifiques est concentrée). En tant qu'antigène connu, un diagnosticum est utilisé, préparé à partir de cellules microbiennes tuées, mais non détruites, d'une espèce spécifique avec un structure antigénique.

Lors de la mise en place d'une réaction d'agglutination détaillée afin de déterminer l'espèce, le type d'agent pathogène, l'antigène est un agent pathogène vivant isolé du matériel d'essai. Les anticorps contenus dans le sérum de diagnostic immunitaire sont connus. v

Le sérum de diagnostic immunitaire est obtenu à partir du sang d'un lapin vacciné. Après avoir déterminé le titre (la dilution maximale dans laquelle les anticorps sont détectés), le sérum de diagnostic est versé dans des ampoules avec l'ajout d'un conservateur. Ce sérum est utilisé pour identifier le pathogène isolé par la structure antigénique.

OPTIONS DE RÉACTION D'AGGLUTATION

Des antigènes sous forme de particules (cellules microbiennes, érythrocytes et autres antigènes corpusculaires) participent à ces réactions, qui sont collées entre elles par des anticorps et précipitent.

Pour formuler une réaction d'agglutination (RA), trois composants sont nécessaires : 1) l'antigène (agglutinogène) ; 2) anticorps (agglutinine) et 3) électrolyte (solution isotonique de chlorure de sodium).

RÉFÉRENCE (PLAQUE) RÉACTION D'AGGLUTATION (RA)

Le RA provisoire ou lamellaire est placé sur une lame de verre à température ambiante. Pour cela, une goutte de sérum à une dilution de 1:10 - 1:20 et une goutte témoin de solution isotonique de chlorure de sodium sont appliquées sur le verre à l'aide d'une pipette Pasteur. Des colonies ou une culture quotidienne de bactéries (une goutte de diagnosticum) sont introduites dans les deux boucles bactériologiques et soigneusement mélangées. Les réactions sont prises en compte après quelques minutes visuellement, parfois à l'aide d'une loupe (x5). Avec une RA positive en goutte avec du sérum, on observe de gros et petits flocons, avec une RA négative, le sérum reste uniformément trouble.

RÉACTION D'HÉMAGGLUTINATION INDIRECTE (PASSIVE) (RNGA, RPGA)

La réaction est réglée : 1) pour détecter des polysaccharides, des protéines, des extraits de bactéries et d'autres substances très dispersées, des rickettsies et des virus, dont les complexes avec les agglutinines ne sont pas visibles dans la PR conventionnelle, ou 2) pour détecter des anticorps dans le sérum des patients à ces substances hautement dispersées et à ces micro-organismes minuscules.

L'agglutination indirecte ou passive est comprise comme une réaction dans laquelle des anticorps interagissent avec des antigènes préalablement adsorbés sur des particules inertes (latex, cellulose, polystyrène, oxyde de baryum, etc., ou érythrocytes de mouton, I (0) - groupes sanguins humains).

Dans la réaction d'hémagglutination passive (RPHA), les érythrocytes sont utilisés comme support. Les érythrocytes chargés d'antigène se collent en présence d'anticorps spécifiques à cet antigène et précipitent. Les érythrocytes sensibilisés à l'antigène sont utilisés dans la RPHA comme diagnostic érythrocytaire pour la détection d'anticorps (sérodiagnostic). Si vous chargez des érythrocytes avec des anticorps (érythrocytes anticorps diagnosticum), alors il peut être utilisé pour détecter des antigènes.

Déclaration. Des dilutions en série de sérum sont préparées dans les puits de plaques de polystyrène. Dans l'avant-dernier puits, ajouter 0,5 ml de sérum manifestement positif et 0,5 ml de sérum physiologique (témoins) dans le dernier puits. Ensuite, 0,1 ml de diagnosticum érythrocytaire dilué est ajouté à tous les puits, secoué et placé dans un thermostat pendant 2 heures.

Comptabilité. Dans le cas positif, les érythrocytes se déposent au fond du trou sous forme d'une couche uniforme de cellules à bord replié ou dentelé (parapluie inversé), dans le cas négatif, ils se déposent sous forme de bouton ou d'anneau .

1.2. RÉACTION DE NEUTRALISATION. LIZISE,
RÉACTION OPSON-PHAGOCYTIQUE, RÉACTION DE SENSIBILITÉ ACCRUE

RÉACTION DE NEUTRALISATION D'EXOTOXINE AVEC ANTITOXINE (PH)

La réaction est basée sur la capacité du sérum antitoxique à neutraliser l'action de l'exotoxine. Il est utilisé pour le titrage des sérums antitoxiques et la détermination de l'exotoxine.

Lors du titrage du sérum, une certaine dose de la toxine correspondante est ajoutée à différentes dilutions de sérum antitoxique. Avec une neutralisation complète de l'antigène et l'absence d'anticorps inutilisés, une floculation initiale se produit. La réaction de floculation peut être utilisée non seulement pour le titrage du sérum (par exemple, la diphtérie), mais également pour le titrage de la toxine et de l'anatoxine. La réaction de neutralisation de la toxine avec l'antitoxine a un grand importance pratique comme méthode de détermination de l'activité des sérums médicinaux antitoxiques. L'antigène dans cette réaction est une véritable exotoxine.

La force du sérum antitoxique est déterminée par les unités conventionnelles d'AE.

1 UA de sérum botulique - sa quantité neutralise 1000 DLM de toxine botulique. La réaction de neutralisation afin de déterminer l'espèce ou le type d'exotoxine (lors du diagnostic du tétanos, du botulisme, de la diphtérie, etc.) peut être réalisée in vitro (selon Ramon), et lors de la détermination de la toxicité des cellules microbiennes - dans un gel ( selon Ouchterloni).

Réaction de lyse (RL)

L'une des propriétés protectrices du sérum immunitaire est sa capacité à dissoudre les microbes ou les éléments cellulaires entrant dans le corps.

Les anticorps spécifiques qui provoquent la dissolution (lyse) des cellules sont appelés lysines. Selon la nature de l'antigène, il peut s'agir de bactériolysines, de cytolysines, de spirochetolysines, d'hémolysines, etc.

Les lysines ne montrent leur effet qu'en présence d'un facteur supplémentaire - le complément. Le complément, en tant que facteur d'immunité humorale non spécifique, est présent dans presque tous les fluides corporels, à l'exception du liquide céphalo-rachidien et du liquide de la chambre antérieure de l'œil. Une teneur en complément assez élevée et constante est notée dans le sérum humain, et il y en a beaucoup dans le sérum sanguin. Cochon d'Inde... Chez d'autres mammifères, la teneur en complément sérique est différente.

Le complément est un système complexe de protéines de lactosérum. Il est instable et se décompose à 55 degrés en 30 minutes. A température ambiante, le complément est détruit en deux heures. Très sensible aux secousses prolongées, aux acides et aux rayons ultraviolets. Cependant, le complément reste sec longtemps (jusqu'à six mois) à basse température. Le complément favorise la lyse des cellules microbiennes et des érythrocytes.

Distinguer la réaction de bactériolyse et d'hémolyse.

L'essence de la réaction de bactériolyse est que lorsqu'un immunsérum spécifique est combiné avec les cellules microbiennes vivantes homologues correspondantes en présence de complément, une lyse microbienne se produit.

La réaction d'hémolyse consiste dans le fait que lorsque les érythrocytes sont exposés à un sérum spécifique qui leur est immunisé (hémolytique) en présence de complément, on observe une dissolution des érythrocytes, c'est-à-dire hémolyse.

La réaction d'hémolyse en pratique de laboratoire est utilisée pour déterminer le tyr du complément, ainsi que pour prendre en compte les résultats des réactions diagnostiques de liaison du complément. Le titre de complément en est la plus petite quantité, ce qui provoque la lyse des érythrocytes en 30 minutes dans le système hémolytique dans un volume de 2,5 ml. La réaction de lyse, comme toutes les réactions sérologiques, se produit en présence d'un électrolyte.

RÉACTIONS D'HYPERSENSIBILITÉ (ALLERGIQUE)

Certaines formes d'antigène, lors de contacts répétés avec le corps, peuvent provoquer une réaction qui est fondamentalement spécifique, mais comprend des facteurs cellulaires et moléculaires non spécifiques d'une réponse inflammatoire aiguë. Deux formes d'hyperréactivité sont connues : l'hypersensibilité de type immédiat (HHT) et l'hypersensibilité de type retardé (HRT). Le premier type de réaction se manifeste avec la participation d'anticorps et la réaction se développe au plus tard 2 heures après un contact répété avec l'allergène. Le deuxième type est réalisé à l'aide de cellules T de l'inflammation (Trzt) comme principaux effecteurs de la réaction, assurant l'accumulation de macrophages dans la zone d'inflammation, la réaction se manifeste après 6-8 heures et plus tard.

Le développement d'une réaction d'hypersensibilité est précédé d'une rencontre avec un antigène et de l'apparition d'une sensibilisation, c'est-à-dire l'apparition d'anticorps, lymphocytes activement sensibilisés et sensibilisés passivement par des anticorps cytophiles d'autres leucocytes (macrophages, granulocytes).

Les réactions d'hypersensibilité ont trois phases de développement : immunologique ; pathochimique; physiopathologique.

Dans la première phase, spécifique, l'allergène interagit avec des anticorps et/ou des cellules sensibilisées. Dans la deuxième phase, des substances biologiquement actives sont libérées des cellules activées. Les médiateurs libérés (histamine, sérotonine, leucotriènes, bradykinine, etc.) provoquent divers effets périphériques caractéristiques du type de réaction correspondant - la troisième phase.

Réactions d'hypersensibilité de type 4

Les réactions de ce type sont causées par des interactions intercellulaires pathogènes de T-helpers sensibilisés, de lymphocytes T cytotoxiques (T-killers) et de cellules activées du système phagocytaire mononucléaire provoquées par une stimulation prolongée du système immunitaire avec des antigènes bactériens, dans lesquels il y a un insuffisance relative du système immunitaire du corps pour éliminer les agents pathogènes bactériens de l'environnement interne maladies infectieuses. Ces réactions d'hypersensibilité provoquent des cavités tuberculeuses des poumons, leur nécrose caséeuse et l'intoxication générale chez les patients atteints de tuberculose. La granulomatose cutanée de la tuberculose et de la lèpre en termes morpho-pathogénétiques est en grande partie composée de réactions d'hypersensibilité du quatrième type.

L'exemple le plus célèbre du quatrième type de réaction d'hypersensibilité est la réaction de Mantoux, qui se développe au site d'administration intradermique de tuberculine à un patient dont le corps et le système sont sensibilisés aux antigènes des mycobactéries. À la suite de la réaction, une papule hyperémique dense avec nécrose au centre se forme, qui n'apparaît que quelques heures (lentement) après l'injection intradermique de tuberculine. La formation de papules commence par la sortie du lit vasculaire dans les espaces intercellulaires des phagocytes mononucléés du sang circulant. Simultanément, l'émigration du lit vasculaire des cellules polymorphonucléaires commence. Ensuite, l'infiltration de neutrophiles s'atténue et l'infiltrat commence à se composer principalement de lymphocytes et de phagocytes mononucléés. En cela, la réaction de Mantoux diffère de la réaction d'Arthus, dans laquelle les leucocytes polymorphonucléaires s'accumulent majoritairement au site de la lésion.

Avec les réactions d'hypersensibilité du quatrième type, la stimulation prolongée des lymphocytes sensibilisés avec des antigènes conduit à une libération pathologiquement intensive et prolongée de cytokines par les T-helpers dans les lieux de modifications pathologiques des tissus. La libération intense de cytokines aux loci des lésions tissulaires provoque l'hyperactivation des cellules du système phagocytaire mononucléaire qui s'y trouvent, dont beaucoup forment des cordons de cellules épithélioïdes dans un état hyperactif, et certaines fusionnent les unes avec les autres pour former des cellules géantes. Les macrophages, à la surface desquels sont exposés des antigènes bactériens et viraux, peuvent être détruits par le fonctionnement de T-killers (natural killers).

Le quatrième type de réaction d'hypersensibilité est induit par la reconnaissance d'un antigène bactérien étranger par les T-helpers qui y sont sensibilisés. Une condition nécessaire à la reconnaissance est l'interaction des inducteurs avec les antigènes exposés à la surface des cellules présentatrices d'antigènes après endocytose et traitement des immunogènes étrangers par les phagocytes mononucléaires. Une autre condition nécessaire est l'exposition d'antigènes dans un complexe avec des molécules de classe I du complexe de compatibilité tissulaire principal. Après reconnaissance de l'antigène, les auxiliaires sensibilisés libèrent des cytokines et, en particulier, l'interleukine-2, qui active les cellules tueuses naturelles et phagocytes mononucléés... Les phagocytes mononucléaires activés libèrent des enzymes protéolytiques et des radicaux libres d'oxygène qui endommagent les tissus.

Tests cutanés et allergiques - tests pour l'établissement de la sensibilisation du corps aux allergènes, détermination de son infection, par exemple, tuberculose, brucellose, niveau d'immunité collective, par exemple, à la tularémie. Au lieu d'administration de l'allergène on distingue : 1) les tests cutanés ; 2) scarification ; 3) intradermique; 4) sous-cutanée. La réaction clinique à un allergène dans un test cutané allergique est subdivisée en locale, générale et focale, ainsi qu'immédiate et retardée.

Les réactions locales de type médiateur de HNT surviennent après 5 à 20 minutes, s'expriment sous forme d'érythème et de cloque, disparaissent après quelques heures et sont évaluées par la méthode plus par la taille de l'érythème, mesurée en mm. Les réactions locales de THS surviennent après 24 à 48 heures, durent longtemps, apparaissent comme un infiltrat, parfois avec une nécrose au centre, sont estimées par la taille de l'infiltrat en mm, également par le système plus. Dans les types cytotoxiques et immunocomplexes de HNT, une hyperémie et une infiltration sont notées après 3-4 heures, atteignent un maximum à 6-8 heures et disparaissent après environ un jour. Des réactions combinées sont parfois observées.

1.3. RÉACTION DE LIAISON DU COMPLÉMENT (RSK)

Cette réaction est utilisée dans des études de laboratoire pour détecter des anticorps dans le sérum sanguin pour diverses infections, ainsi que pour identifier l'agent pathogène par sa structure antigénique.

Le test de fixation du complément est une réaction sérologique complexe et est très sensible et spécifique.

Une caractéristique de cette réaction est que le changement de l'antigène lorsqu'il interagit avec des anticorps spécifiques ne se produit qu'en présence de complément. Le complément est adsorbé uniquement sur le complexe anticorps-antigène. Un complexe anticorps-antigène ne se forme que s'il existe une affinité entre l'antigène et l'anticorps dans le sérum.

L'adsorption du complément sur le complexe « antigène - anticorps » peut affecter le devenir de l'antigène de différentes manières, selon ses caractéristiques.

Certains des antigènes subissent dans ces conditions de fortes modifications morphologiques, jusqu'à la dissolution (hémolyse, phénomène d'Isaev-Pfeifer, action cytolytique). D'autres modifient la vitesse de déplacement (immobilisation des tréponèmes). D'autres encore meurent sans tranchant changements destructeurs(effet bactéricide ou cytotoxique). Enfin, l'adsorption du complément peut ne pas s'accompagner de modifications antigéniques facilement observables.

Selon le mécanisme RSC, il se déroule en deux phases :

1. La première phase est la formation d'un complexe antigène-anticorps et l'adsorption sur ce complexe de complément. Le résultat de la phase n'est pas visible visuellement (interaction de l'antigène et des anticorps avec la participation obligatoire du complément).
2. La deuxième phase est une modification de l'antigène sous l'influence d'anticorps spécifiques en présence de complément. Le résultat de la phase peut être visuellement visible ou non visible (identification des résultats de la réaction à l'aide d'un système hémolytique indicateur (érythrocytes de mouton et sérum hémolytique).

La destruction des érythrocytes par le sérum hémolytique ne se produit que si le complément est attaché au système hémolytique. Si le complément a été préalablement adsorbé sur le complexe antigène-anticorps, l'hémolyse des érythrocytes ne se produit pas.

Le résultat de l'expérience est évalué en notant la présence ou l'absence d'hémolyse dans tous les tubes. La réaction est considérée comme positive avec un retard complet de l'hémolyse, lorsque le liquide dans le tube à essai est incolore et que les érythrocytes se déposent au fond, négatif - avec lyse complète des érythrocytes, lorsque le liquide est intensément coloré (sang "laque"). Le degré de retard d'hémolyse est évalué en fonction de l'intensité de la couleur du liquide et de la quantité de sédiment érythrocytaire au fond (++++, +++, ++, +).

Dans le cas où les modifications de l'antigène restent inaccessibles à l'observation visuelle, il est nécessaire d'utiliser un deuxième système, qui fait office d'indicateur, qui permet d'évaluer l'état du complément et de tirer une conclusion sur le résultat de la réaction.

Ce système indicateur est représenté par les composants de la réaction d'hémolyse, qui comprend les érythrocytes de mouton et le sérum hémolytique contenant des anticorps spécifiques (hémolysines) dirigés contre les érythrocytes, mais ne contenant pas de complément. Ce système indicateur est ajouté aux tubes une heure après le réglage du RSK principal. Si la réaction de liaison du complément est positive, alors un complexe anticorps-antigène se forme, qui adsorbe le complément sur lui-même. Étant donné que le complément est utilisé dans la quantité nécessaire pour une seule réaction et que la lyse des érythrocytes ne peut se produire qu'en présence de complément, lorsqu'il est adsorbé sur le complexe antigène-anticorps, la lyse des érythrocytes dans le système hémolytique (indicateur) ne se produira pas. . Si la réaction de liaison du complément est négative, le complexe antigène-anticorps ne se forme pas, le complément reste libre et lorsque le système hémolytique est ajouté, la lyse des érythrocytes se produit.

1.4. SONDES ADN. RÉACTION EN CHAÎNE POLYMÉRASE (PCR),
MÉTHODE IMMUNO-ENZYMIQUE (ELISA), MÉTHODE AUX ANTICORPS FLUORESCENTS (MFA)

MÉTHODES DE DÉTECTION DE GÈNES

Le développement intensif de la biologie moléculaire et la création d'une base méthodologique parfaite pour la recherche génétique ont été à la base du génie génétique. Dans le domaine du diagnostic, une direction est apparue et se développe rapidement pour déterminer les séquences nucléotidiques spécifiques de l'ADN et de l'ARN, ce que l'on appelle le sondage génique. Ces techniques reposent sur la capacité des acides nucléiques à s'hybrider - la formation de structures double brin dues à l'interaction de nucléotides complémentaires (A – T, G – C).

Pour déterminer la séquence d'ADN (ou d'ARN) souhaitée, une sonde dite polynucléotidique avec une séquence de bases spécifique est spécialement créée. Un label spécial est introduit dans sa composition, ce qui permet d'identifier la formation du complexe.

Bien que le sondage génique ne puisse être attribué aux méthodes d'analyse immunochimique, son principe principal (interaction de structures complémentaires) est méthodiquement mis en œuvre de la même manière que les méthodes indicatrices de l'immunodiagnostic. De plus, les méthodes de sondage génique permettent de reconstituer l'information sur un agent infectieux en l'absence de son expression phénotypique (virus enfouis dans le génome, gènes « silencieux »).

Pour l'analyse de l'ADN, l'échantillon est dénaturé afin d'obtenir des structures simple brin avec lesquelles réagissent des molécules sondes d'ADN ou d'ARN. Pour la préparation des sondes, soit divers sites ADN (ou ARN) isolé d'une source naturelle (par exemple, l'un ou l'autre micro-organisme), généralement présenté sous forme de séquences génétiques dans des plasmides vecteurs, ou d'oligonucléotides synthétisés chimiquement. Dans certains cas, comme sonde, des préparations d'ADN génomique hydrolysé en fragments sont utilisées, parfois des préparations d'ARN, en particulier d'ARN ribosomique. Les mêmes indicateurs sont utilisés comme étiquette que pour différents types analyse immunochimique: isotopes radioactifs, fluorescéines, biotope (avec manifestation supplémentaire par le complexe avidine-enzyme), etc.

La procédure d'analyse est déterminée par les propriétés de la sonde existante.

Des kits commerciaux contenant tous les ingrédients nécessaires sont de plus en plus utilisés.

Dans la plupart des cas, la procédure d'analyse peut être divisée en les étapes suivantes : préparation de l'échantillon (y compris l'extraction et la dénaturation de l'ADN), fixation de l'échantillon sur un support (le plus souvent, un filtre à membrane polymère), préhybridation, hybridation elle-même, lavage des produits non liés, et détection. En l'absence d'une préparation standard d'une sonde d'ADN ou d'ARN, celle-ci est préalablement obtenue et marquée.

Pour préparer l'échantillon, il peut être nécessaire de pré-cultiver le matériel d'essai pour identifier des colonies individuelles de bactéries ou augmenter la concentration de virus dans culture de cellules... Une analyse directe d'échantillons de sérum sanguin, d'urine, de cellules sanguines ou de sang total pour la présence d'un agent infectieux est également effectuée. Pour libérer les acides nucléiques de la composition des structures cellulaires, une lyse cellulaire est effectuée et, dans certains cas, la préparation d'ADN est purifiée à l'aide de phénol.

La dénaturation de l'ADN, c'est-à-dire sa transition vers une forme simple brin, se produit pendant le traitement avec un alcali. L'échantillon d'acide nucléique est ensuite fixé sur un support, une membrane de nitrocellulose ou de nylon, généralement par incubation de 10 minutes à 4 heures à 80°C sous vide. En outre, dans le processus de préhybridation, l'inactivation des sites de liaison libres est obtenue pour réduire l'interaction non spécifique de la sonde avec la membrane. Le processus d'hybridation prend de 2 à 20 heures, selon la concentration d'ADN dans l'échantillon, la concentration de la sonde utilisée et sa taille.

Après la fin de l'hybridation et le lavage des produits non liés, le complexe formé est détecté. Si la sonde contient un marqueur radioactif, la membrane est alors exposée à un film photographique pour manifester la réaction (autoradiographie). Pour les autres étiquettes, utilisez les procédures appropriées.

La plus prometteuse est la production de sondes non radioactives (dites froides). Sur la même base, une technique d'hybridation est en cours de développement, qui permet d'établir la présence d'un agent pathogène dans les préparations de coupes, de tissus ponctués, ce qui est particulièrement important en analyse pathomorphologique (hybridation in situ).

Une étape essentielle dans le développement des méthodes de sondage génique a été l'utilisation de la réaction d'amplification par polymérase (PCR). Cette approche vous permet d'augmenter la concentration d'une certaine séquence d'ADN (précédemment connue) dans un échantillon en synthétisant plusieurs copies in vitro. Pour effectuer la réaction, une préparation de l'enzyme ADN polymérase, un excès de désoxynucléotides pour la synthèse et les soi-disant amorces - deux types d'oligonucléotides avec une valeur de 20-25 bases correspondant aux régions terminales de la séquence d'ADN de intérêt - sont ajoutés à l'échantillon d'ADN de test. L'une des amorces doit être une copie du début de la région de lecture du brin d'ADN codant dans le sens de la lecture 5-3, et l'autre - une copie de l'extrémité opposée du brin non codant. Ensuite, à chaque cycle de la réaction de polymérase, il y a un doublement du nombre de copies d'ADN.

Pour la liaison des amorces, une dénaturation de l'ADN (fusion) à 94 ° C, suivie d'un amenage du mélange à 40–55 ° C, est nécessaire.

Pour effectuer la réaction, des incubateurs programmables pour micro-échantillons ont été conçus, ce qui permet d'alterner facilement les changements de température optimaux pour chaque étape de la réaction.

La réaction d'amplification peut augmenter de manière significative la sensibilité du test pour le sondage génique, ce qui est particulièrement important à une faible concentration d'un agent infectieux.

L'un des avantages significatifs du sondage génique avec amplification est la possibilité d'étudier une quantité submicroscopique de matériel pathologique.

Une autre caractéristique de la méthode, qui est plus importante pour l'analyse du matériel infectieux, est la capacité d'identifier des gènes cachés (silencieux). Les méthodes associées à l'utilisation de la détection génique seront certainement plus largement introduites dans la pratique du diagnostic des maladies infectieuses à mesure qu'elles deviendront plus simples et moins chères.

Méthodes ELISA et RIF dans une plus grande mesure sont qualitatifs ou semi-quantitatifs. A de très faibles concentrations des composants, la formation d'un complexe antigène-anticorps ne peut être détectée ni visuellement ni par de simples moyens instrumentaux. L'indication du complexe antigène - anticorps dans de tels cas peut être effectuée si un marqueur est introduit dans l'un des composants initiaux - antigène ou anticorps - qui peut être facilement détecté à des concentrations comparables à la concentration déterminée de l'analyte.

Les isotopes radioactifs (par exemple, 125I), les substances fluorescentes et les enzymes peuvent être utilisés comme marqueur.

Selon le marqueur utilisé, une distinction est faite entre dosage radio-immunologique (RIA), immunofluorescence (FIA), dosage immuno-enzymatique (ELISA), etc. dernières années ELISA a reçu une large application pratique, qui est associée à la possibilité de déterminations quantitatives, à une sensibilité élevée, à la spécificité et à l'automatisation de la comptabilité.

Méthodes d'analyse d'immunoessai - un groupe de méthodes qui vous permettent d'identifier le complexe antigène-anticorps à l'aide d'un substrat clivé par une enzyme ayant l'apparence d'une couleur.

L'essence de la méthode réside dans la combinaison des composants de la réaction antigène-anticorps avec un marqueur enzymatique mesurable. L'antigène ou l'anticorps qui réagit est marqué avec une enzyme. Par la transformation du substrat sous l'action de l'enzyme, on peut juger de la quantité du composant réactif de la réaction antigène-anticorps. Enzyme dans ce cas sert de marqueur de la réponse immunitaire et permet de l'observer visuellement ou instrumentalement.

Les enzymes sont des marqueurs très pratiques, car leurs propriétés catalytiques leur permettent d'agir comme des activateurs, puisqu'une molécule d'enzyme peut favoriser la formation de plus de 1 × 105 molécules d'un produit de réaction catalytique par minute. Il est nécessaire de sélectionner une enzyme qui conserve longtemps son activité catalytique, ne la perd pas en se liant à un antigène ou un anticorps, et présente une spécificité élevée vis-à-vis du substrat.

Les principales méthodes de production d'anticorps ou d'antigènes marqués avec une enzyme - conjugués : chimiques, immunologiques et génétiquement modifiés. Pour la production d'ELISA, les enzymes sont le plus souvent utilisées : peroxydase de raifort, phosphatase alcaline, galactosidase, etc.

Pour détecter l'activité de l'enzyme dans le complexe antigène-anticorps à des fins d'enregistrement visuel et instrumental de la réaction, on utilise des substrats chromogènes dont les solutions, initialement incolores, acquièrent une couleur au cours de la réaction enzymatique, dont l'intensité est proportionnelle à la quantité d'enzyme. Ainsi, pour détecter l'activité de la peroxydase de raifort en ELISA en phase solide, on utilise comme substrat l'acide 5-aminosalicylique, qui donne une couleur brune intense, l'ortho-phénylènediamine, qui prend une couleur jaune orangé. Pour détecter l'activité de la phosphatase alcaline et de la -galatozidase, on utilise respectivement des phosphates de nitrophényle et des galactosides de nitrophényle.

Le résultat de la réaction avec la formation d'un produit coloré est déterminé visuellement ou à l'aide d'un spectrophotomètre qui mesure l'absorption de la lumière avec une certaine longueur d'onde.

Il existe de nombreuses options connues pour configurer ELISA. Distinguer les variantes homogènes et hétérogènes.

Selon la méthode de réglage, les méthodes ELISA compétitives et non compétitives sont distinguées. Si, à la première étape, seuls le composé analysé et les sites de liaison correspondants (antigène et anticorps spécifiques) sont présents dans le système, alors la méthode n'est pas compétitive. Si à la première étape le composé analysé (antigène) et son analogue (marqué avec l'antigène enzymatique) sont présents, en compétition l'un avec l'autre pour la liaison avec les sites de liaison spécifiques déficients (anticorps), alors la méthode est compétitive. Dans ce cas, plus la solution contient d'antigènes à tester, plus la quantité d'antigènes marqués de liaison est faible.

MÉTHODE DES ANTICORPS FLUORESCENTS (MFA) ou RÉACTIONS D'IMMUNOFLUORESCENCE (RIF)

La méthode d'immunofluorescence est la méthode de choix pour la détection et l'identification rapides d'un micro-organisme inconnu dans un matériau d'essai.

Ag + AT + électrolyte = complexe incandescent aux rayons UV

Sérum microbien marqué au fluorochrome

Colorant isothiocyanate de fluorescéine - FITC est souvent utilisé

Lors de l'examen de cette méthode, un microscope à fluorescence est utilisé.

fabrication RIF

Appliquer 30 µl d'une solution d'anticorps marqués FITC sur le frottis.

Placer le verre dans une chambre humide et incuber à température ambiante pendant 20-25 min, ou dans un thermostat à 37°C pendant 15 min.

Le verre est lavé à l'eau courante du robinet pendant 2 minutes, rincé à l'eau distillée et séché à l'air.

Une goutte de liquide de montage est appliquée sur le frottis séché, le frottis est recouvert d'un verre de protection et microscopique à l'aide d'un microscope à fluorescence ou d'un accessoire fluorescent à un microscope optique conventionnel.

Au XVIIIe siècle. Beaucoup de gens, étant sûrs qu'un jour dans leur vie ils contracteront de toute façon la variole, se sont délibérément exposés à la possibilité d'une infection afin de se remettre de cette maladie dans des conditions plus favorables et de ne pas en avoir peur à l'avenir. Même maintenant, certains parents, pour les mêmes raisons, ne protègent pas leurs enfants contre les maladies infantiles, sachant que les gens ne contractent certaines maladies qu'une seule fois dans leur vie. Ce type de résistance est appelé immunité acquise. Mais une personne qui est immunisée contre la variole en raison de cette maladie est aussi sensible à la rougeole ou à toute autre maladie qu'une personne qui n'a jamais eu la variole ; on dit donc que l'immunité est spécifique.

L'immunité activement acquise est due à la formation de protéines spécifiques dans le corps, appelées anticorps, qui sont libérées dans le sang et les fluides tissulaires après la pénétration d'une protéine étrangère, appelée antigène, dans le corps. L'antigène et l'anticorps réagissent les uns avec les autres, ce qui protège le corps des dommages. Si, par exemple, de l'albumine d'œuf (une substance protéique) est injectée à un lapin, les cellules de l'animal répondent en produisant des anticorps spécifiques de cette albumine. De plus, le corps est capable de produire un type spécial d'anticorps appelé antitoxine en réponse à la présence d'une toxine (généralement une protéine) sécrétée par la bactérie. Une fois qu'une quantité suffisante d'antitoxine s'est formée, cette toxine ne peut plus nuire à l'organisme.

On savait déjà il y a plusieurs décennies que les anticorps formés en réponse à l'introduction d'un antigène donné ne sont pas toujours homogènes - ils peuvent différer par leur spécificité, par le degré d'activité par rapport à la réaction avec l'antigène et par les propriétés physico-chimiques, ( la taille et la forme de la molécule, sa charge totale et sa séquence d'acides aminés).

Les anticorps circulant dans le sang sont associés à une fraction spécifique du plasma - les gammaglobulines. Les gammaglobulines sont des protéines qui sont très similaires dans leurs propriétés physiques et chimiques, mais qui diffèrent par leur spécificité pour les antigènes. Les différences entre les différents anticorps sont complètement subtiles ; elles sont encore plus subtiles que les différences entre les différentes enzymes. Apparemment, seule une petite partie de la molécule de protéine (ayant un poids moléculaire d'environ 160 000) est immunologiquement active. Différences entre différents

les anticorps, apparemment, sont réduits à des différences insignifiantes dans la forme de la molécule de bedok, dans la disposition de ses atomes constitutifs, assurant la complémentarité des configurations géométriques de l'antigène et des anticorps, qui devraient s'emboîter comme une clé et une serrure.

Les tissus lymphatiques synthétisent généralement des anticorps uniquement contre des protéines "étrangères", c'est-à-dire contre des protéines qui, dans des conditions normales, ne sont pas contenues dans le corps. Mais parfois, certains composants normaux du corps peuvent avoir des effets antigéniques et provoquer une ré-

formation d'anticorps; à la suite de la réaction antigène-anticorps qui en résulte, une personne peut tomber malade.

Après l'injection de l'antigène, une période de latence se produit, d'environ une semaine, puis des anticorps apparaissent dans le sang. Le titre d'anticorps augmente lentement, atteint un pic bas (réaction primaire) et diminue à nouveau. L'injection secondaire d'antigène après quelques jours, semaines ou même mois provoque la formation rapide d'anticorps après une période de latence plus courte (réaction secondaire). Le titre d'anticorps atteint plus de haut niveau et diminue plus lentement. Les injections ultérieures d'antigène induisent des réactions secondaires supplémentaires jusqu'à ce que le titre maximum soit atteint. Au fil du temps, ce titre diminue généralement et l'immunisation périodique pei aide à maintenir le système immunitaire à un niveau satisfaisant. Chez une personne préalablement immunisée, une réaction secondaire peut également être provoquée en l'infectant avec un agent infectieux naturel ; les anticorps se forment généralement assez rapidement et préviennent l'apparition des symptômes de la maladie.

Le mécanisme de formation d'anticorps spécifiques sous l'action de l'antigène est inconnu. On sait seulement que les anticorps sont synthétisés à nouveau à partir d'acides aminés, et pas simplement formés en changeant la conformation spatiale de la chaîne polypeptidique préexistante. La synthèse de ces protéines spécifiques se déroule probablement de la même manière que la synthèse habituelle des protéines dans les ribosomes de la cellule, c'est-à-dire sous le contrôle de matrices d'acides ribonucléiques (voir Section 342). L'antigène, apparemment, pénètre dans les plasmocytes et d'autres cellules "immunologiquement compétentes" et provoque la formation d'une matrice d'acide nucléique spécifique, qui à son tour détermine la formation d'un anticorps spécifique. Il est possible que l'information nécessaire à la synthèse d'anticorps spécifiques soit délivrée par l'antigène lui-même, ou qu'elle soit constamment présente dans la cellule, étant contenue dans les gènes, mais ne puisse être utilisée qu'en présence d'un antigène spécifique. Il a également été suggéré que la pénétration d'un antigène dans une cellule conduit à la manifestation d'une capacité génétiquement déterminée à synthétiser un anticorps spécifique, qui était auparavant à l'état latent. Cette dernière théorie fournit la meilleure explication des faits expérimentaux actuellement connus et est plus conforme à la théorie générale de la régulation de la synthèse des protéines. Lorsque les plasmocytes qui forment un anticorps spécifique se divisent, les deux cellules filles conservent la capacité de produire les mêmes anticorps, et cette information est transmise sur de nombreuses générations de cellules.

Les anticorps réagissent avec un ou plusieurs antigènes différentes façons... Ils peuvent se combiner avec la toxine, neutralisant ses propriétés toxiques ; ils peuvent dissoudre les cellules bactériennes; enfin, ils peuvent sensibiliser les bactéries - les rendant plus vulnérables aux globules blancs. Certains anticorps agglutinent les microbes, empêchant ainsi leur propagation et assurant encore plus précisément leur retard dans ganglions lymphatiques.

Les anticorps sont marqués en leur attachant un colorant fluorescent, après quoi ils peuvent être détectés dans des zones spécifiques du tissu à l'aide d'un microscope. Cette méthode, mise au point en 1941 par Koons, a permis de réaliser diverses études avec la détermination de la localisation dans la cellule de réactions spécifiques entre antigène et anticorps ; il est également utilisé dans le diagnostic des maladies infectieuses.

Une autre façon d'acquérir l'immunité est l'inoculation d'un vaccin. Un vaccin est un antigène spécialement produit en grande quantité, caractéristique d'une maladie particulière, assez fort pour stimuler la production d'anticorps dans le corps, mais pas assez fort pour provoquer la maladie elle-même. La toxicité des antigènes est réduite de diverses manières. Certains vaccins ne contiennent que de petites quantités de la toxine. D'autres sont une combinaison d'une toxine avec une antitoxine : tandis que

l'antigène amène le corps à produire plus d'anticorps, les anticorps du vaccin lui-même protègent les cellules contre les dommages. Certaines toxines sont soumises à un traitement thermique ou chimique qui détruit leurs propriétés nocives, mais conserve leur capacité à stimuler la formation d'anticorps ; ce type de vaccin est appelé toxoïde. Une autre méthode consiste à affaiblir les cultures de bactéries en les faisant croître longtemps dans des éprouvettes, où elles finissent par perdre une partie de leur toxicité. Le vaccin antirabique (vaccin antirabique) est affaibli par le séchage, d'autres vaccins - par leur inoculation séquentielle à un certain nombre d'animaux de laboratoire. Le vaccin contre la typhoïde peut être préparé à partir de bactéries tuées de la fièvre typhoïde.

La méthode de vaccination a été découverte à la fin du XVIIIe siècle. par le médecin anglais E. Jenner, qui a remarqué que les travailleurs qui s'occupaient des vaches atteintes de la variole ne contractaient jamais la vraie variole. Lorsqu'il a essayé de frotter du liquide prélevé sur les vésicules de la variole sur le pis d'une vache dans une égratignure sur la peau humaine, une maladie bénigne est survenue avec l'apparition d'une pockmark localisée au site du frottement. Les personnes vaccinées de cette manière n'ont jamais développé la variole. La cowpox et la variole sont deux virus distincts mais étroitement liés; La vaccination avec le virus de la vaccine produit des anticorps qui peuvent également réagir avec le virus de la variole humaine étroitement apparenté. Il est théoriquement possible de créer une immunité contre toutes les maladies par la vaccination, mais pour de nombreuses maladies importantes, notamment la tuberculose, la grippe et la syphilis, les méthodes de vaccination n'ont pas encore été développées.

Il arrive souvent que le corps ne soit pas capable de produire des anticorps assez rapidement pour combattre les antigènes du microbe. Dans de tels cas, les anticorps d'un animal (généralement un cheval) sont injectés afin de les fournir à l'organisme jusqu'au moment où il peut lui-même les produire en quantité suffisante pour se protéger. L'injection d'une préparation d'anticorps (appelée sérum) est le seul moyen d'obtenir une immunité passive ; bien que cette immunité ait un effet immédiat, elle disparaît complètement au bout de quelques semaines.

Pour préparer le sérum, les bactéries sont cultivées dans des tubes à essai jusqu'à ce qu'une grande quantité de toxine se forme. Puis

cette toxine est injectée à doses croissantes au cheval, et le corps de l'animal produit progressivement une énorme quantité d'antitoxine, qui s'accumule dans le sang. Après cela, le sang est prélevé sur le cheval de temps en temps, les érythrocytes en sont retirés et l'antitoxine est concentrée.

Immunité naturelle. Chez tous les animaux et les plantes, l'immunité à certaines maladies est une propriété héréditaire, et elle n'a pas à être acquise. Il est prouvé que les races humaines sont génétiquement différentes dans leur résistance à des maladies telles que la tuberculose, la diphtérie et la grippe. La résistance aux maladies héréditaires, appelée immunité naturelle, se transmet de génération en génération.

Un type d'immunité naturelle est l'immunité développée dans une population qui a été en contact avec l'agent causal d'une certaine maladie pendant de nombreuses générations. De nombreuses maladies (comme la rougeole) qui sont relativement faciles de nos jours

chez les Européens, extrêmement difficile chez les Indiens d'Amérique et chez les habitants des îles de la partie sud Le Pacifique quand ils se sont répandus pour la première fois parmi ces peuples. La syphilis, elle aussi, est aujourd'hui une maladie beaucoup plus bénigne qu'au moment de sa première apparition en Europe, où elle entraînait souvent la mort dans le premier mois. De nombreuses maladies tropicales, telles que le paludisme et la maladie du sommeil, sont plus graves pour les étrangers que pour les population locale... D'autres maladies, qui étaient initialement très courantes, sont devenues rares avec le temps ; par exemple, la lèpre était extrêmement courante à l'époque biblique.

Ces changements positifs sont généralement interprétés comme le résultat d'une « sélection naturelle » progressive : les personnes qui ont souffert d'une maladie donnée dans l'Antiquité ont transmis leur « résilience » à leurs descendants, etc. Il est également possible que dans certains cas les micro-organismes eux-mêmes se soient adaptés, ce qui s'est accompagné d'une diminution de leur virulence.

Un virus normal, ou un virus tué par une chaleur douce ou une lumière ultraviolette, peut inhiber la croissance d'autres virus chez l'hôte. Cela pourrait expliquer la faible prévalence de maladies telles que la poliomyélite dans les zones où d'autres virus intestinaux sont endémiques. La présence de ces virus inhibe la croissance du poliovirus ; cependant, leur effet n'est pas qu'ils induisent la production d'anticorps, mais qu'ils induisent les cellules hôtes à produire une substance appelée interféron. Nous avons réussi à isoler cette substance ; c'est une protéine avec un poids moléculaire d'environ 63 000.

Ce phénomène récemment découvert est peut-être un autre facteur important dans la défense du corps contre la maladie. Les anticorps sont particulièrement importants pour créer une immunité contre la réinfection par cet agent pathogène ; l'interféron, quant à lui, joue probablement un rôle important dans la protection lors de la première infection par le virus.

Des chercheurs ont montré que l'interféron est produit en réponse à une infection virale ; sa concentration atteint un maximum le 3-5ème jour après l'infection, tandis que les anticorps contre l'agent infectieux apparaissent beaucoup plus tard - pas avant le 8ème jour.

L'interféron n'agit pas directement sur le virus, mais sur la cellule hôte. Le virus pénètre dans les cellules traitées à l'interféron, mais est incapable de s'y multiplier. L'interféron semble réduire la quantité d'ATP qui peut être utilisée pour multiplier le virus, éventuellement en découplant les processus de phosphorylation et d'oxydation (voir Section 57). Les données disponibles suggèrent qu'il n'existe qu'un seul type d'interféron et qu'il est efficace contre une grande variété de virus. Liens connexes

Utilisé avec le même succès à deux fins. Premièrement, selon le célèbre antigène(diagnosticum) déterminer la présence et la teneur quantitative en anticorps spécifiques de cet antigène dans le sérum à tester. Cette dernière est établie par titrage du sérum. Titre Le sérum immun est appelé sa dilution maximale, ce qui donne toujours une réaction positive. Deuxièmement, en utilisant le bien connu anticorps , c'est-à-dire sérum immun diagnostique ou des anticorps monoclonaux, déterminer la présence dans le matériel d'essai d'un antigène microbien spécifique ou procéder à l'identification sérologique de l'agent pathogène isolé.

À des fins de diagnostic, les réactions sérologiques suivantes sont utilisées :

1. Réaction d'agglutination dans ses différentes variantes.

2. La réaction de précipitation et ses diverses modifications.

3. Réactions d'immunofluorescence (RIF) en versions directes et indirectes.

4. Réactions impliquant le complément.

5. Réactions impliquant des phagocytes.

6. Réactions du dosage immunosorbant en phase solide.

7. Réactions de neutralisation de l'activité biologique du pathogène ou des toxines.

I. Réaction d'agglutination

Agglutination(de lat.agglutinatio- collage) - collage (connexion) de particules corpusculaires porteuses d'antigènes (cellules entières, particules de latex, etc.) avec des molécules d'anticorps stécifiques en présence d'électrolytes, qui aboutit à la formation de flocons ou de sédiments agglutinant) visible à l'œil nu. En utilisant la réaction d'agglutination, déterminer seulcomplet anticorps (bivalents).Incomplet anticorps (monovalents, bloquants) par ces méthodes non-détecté, car, en se liant à l'antigène, ils le bloquent, mais ne peuvent pas provoquer l'agrégation de l'antigène en grands conglomérats. Incomplet les anticorps (bloquants) sont appelés anticorps dans lesquels un seul centre actif fonctionne ; le deuxième centre actif ne fonctionne pas pour une raison inconnue.

Distinguer l'agglutination droit , dans laquelle l'interaction avec des anticorps spécifiques implique directement les propres antigènes d'une cellule bactérienne ou de toute autre cellule, par exemple érythrocytes; et indirectement ou passif , dans lesquels les cellules bactériennes ou les érythrocytes, ou les particules de latex sont porteurs non pas d'eux-mêmes, mais d'antigènes (ou anticorps) étrangers sorbés sur eux pour détecter des anticorps (ou antigènes) qui leur sont spécifiques. La réaction d'agglutination implique principalement des anticorps appartenant aux classes IgG et IgM. Elle se déroule en deux phases : premièrement, il y a une interaction spécifique du centre actif des anticorps avec le déterminant antigénique ; cette étape peut se produire en l'absence d'électrolytes et ne s'accompagne pas de modifications visibles du système réactif. Pour la deuxième étape - la formation d'agglutinats - la présence d'électrolytes est nécessaire, ce qui réduit la charge électrique des complexes antigène + anticorps et accélère le processus de leur adhésion. Cette phase se termine par la formation d'agglutinat.

Les réactions d'agglutination sont effectuées soit sur du verre, soit dans des tubes à essai. Les réactions d'agglutination (directes et passives) sur verre sont généralement utilisées comme méthode accélérée pour détecter des anticorps spécifiques dans le sérum du patient (par exemple, dans la brucellose) ou pour l'identification sérologique de l'agent pathogène. L'avantage incontestable de la réaction d'agglutination sur verre est la simplicité de sa formulation et le fait qu'elle prend plusieurs minutes voire quelques secondes, puisque les deux composants y sont utilisés sous une forme concentrée. Cependant, il n'a qu'une valeur qualitative et est moins sensible qu'un tube à essai.

Réaction d'agglutination élargie dans des tubes à essai donne des résultats plus précis, car cela vous permet de déterminer la teneur quantitative en anticorps dans le sérum (pour établir son titre) et, si nécessaire, d'enregistrer le fait d'une augmentation du titre d'anticorps, qui a une valeur diagnostique.

Pour mettre en place une réaction, un sérum dilué dans une solution de NaCl à 0,85% et un volume égal (généralement 0,5 ml) d'une suspension d'un diagnosticum standard (ou culture test) contenant 1 milliard de bactéries dans 1 ml sont ajoutés dans des tubes d'agglutination. Les résultats de la réaction d'agglutination sont pris en compte au préalable après 2 heures d'incubation des tubes à 37°C et enfin après 20-24 heures selon deux signes : la présence et la taille du sédiment et le degré de transparence du liquide surnageant . L'évaluation est effectuée selon un système quadruple. La réaction s'accompagne nécessairement d'un contrôle du sérum en antigène.

Il convient de noter que lors du mélange de solutions d'antigènes homologues et d'anticorps, des manifestations visibles de la réaction d'agglutination ne sont pas toujours observées. Un précipité ne se forme que lorsque le rapport des deux composants de la réaction est optimal. En dehors de ces limites, avec un excès important d'antigène ou d'anticorps, aucune réaction n'est observée. Ce phénomène est appelé « le phénomène de la prozone« Ou faux négatif. On l'observe à la fois dans la réaction d'agglutination et dans la réaction de précipitation. L'apparition d'une prozone dans les réactions immunitaires s'explique par le fait que les antigènes qui y sont impliqués sont généralement polydéterminants et que les molécules d'anticorps IgG ont deux centres actifs. Avec un excès d'anticorps, la surface de chaque particule d'antigène est recouverte de molécules d'anticorps de sorte qu'il ne reste aucun groupe déterminant libre. Par conséquent, le deuxième centre actif d'anticorps non lié ne peut pas interagir avec une autre particule antigénique et les lier les uns aux autres. La formation d'un agglutinat ou d'un précipité visible est également supprimée avec un excès d'antigène, lorsqu'il ne reste plus un seul site actif libre d'anticorps, et donc les complexes antigène + anticorps + antigène ne peuvent pas devenir plus gros.

(réactions immunologiques : agglutination, précipitation, lyse)

Réactions d'agglutination
Des antigènes sous forme de particules (cellules microbiennes, érythrocytes et autres antigènes corpusculaires) participent à ces réactions, qui sont collées entre elles par des anticorps et précipitent.
Pour formuler une réaction d'agglutination (RA), trois composants sont nécessaires : 1)antigène(agglutinogène); 2)anticorps(agglutinine) et 3) électrolyte(solution isotonique de chlorure de sodium).
Ag + AT + électrolyte = agglutiner

Noter: résultat positif - présence de paillettes agglutiner,
négatif - pas de flocons agglutiner

Réaction d'agglutination élargie (RA). Pour déterminer l'AT dans le sérum sanguin du patient, mettezréaction d'agglutination prolongée (RA) ... Pour cela, un diagnosticum est ajouté à une série de dilutions de sérum sanguin - une suspension de micro-organismes ou de particules tués avec de l'Ag adsorbé. Dilution maximale donnantagglutinationAg est appelé le titre sérique.

^ Réaction d'agglutination (RA) indicative Pour identifier les micro-organismes isolés, une RA approximative est placée sur les lames. Pour cela, une culture du pathogène est ajoutée à une goutte d'un antisérum de diagnostic standard (dilution 1:10, 1:20). Si le résultat est positif, une réaction détaillée est définie avec des dilutions croissantes de l'antisérum. La réactionconsidéré comme positif si l'agglutination est observée à des dilutions proches du titre du sérum diagnostique.

Réactions d'hémagglutination directe. Le plus simple d'entre eux réactions - agglutination érythrocytes, ou hémagglutination, utilisés pour déterminer les groupes sanguins dans le système AB0. Pour déterminer agglutination (ou son absence) en utilisant des antisérums standards avec des anti-A et des anti-B-agglutinines. La réaction est dite directe, car les Ag étudiés sont des composants naturels des érythrocytes.

Réaction de précipitation– cette formationet précipitation d'un complexe d'antigène moléculaire soluble avec des anticorps sous la forme d'un nuage appelé précipité. Il est formé en mélangeant des antigènes et des anticorps en quantités équivalentes. La réaction de précipitation est mise dans des éprouvettes (réaction de précipitation annulaire), dans des gels, des milieux nutritifs, etc.

La réaction de précipitation vous permet de déterminer la présence d'un antigène inconnu dans le matériel de test en ajoutant un anticorps connu ou en utilisant un antigène connu - un anticorps inconnu. La précipitation est mieux enregistrée si l'antigène est déposé sur l'anticorps dans un tube à essai. Dans ce cas, on observe l'apparition d'un précipité sous forme d'anneau - précipitation annulaire. La précipitation annulaire est effectuée dans des tubes à essai spéciaux

La précipitation en gélose permet de déterminer la toxicité des cultures diphtériques.
Dans la recherche médico-légale, la précipitation sert à établir les espèces du sang, des organes et des tissus à l'aide de sérums précipitants spécifiques.
Réaction de lyse

Il est basé sur la capacité d'anticorps spécifiques à former des complexes immuns avec des cellules, notamment des érythrocytes, des bactéries, ce qui conduit à l'activation du système de complément le long de la voie classique et à la lyse cellulaire. Parmi les réactions de lyse, la réaction d'hémolyse est le plus souvent utilisée et la réaction de bactériolyse est rarement utilisée (principalement dans la différenciation du choléra et des virions cholériques)
^ Réaction d'hémolyse. Sous l'influence d'une réaction avec les AT en présence de complément, une suspension trouble d'érythrocytes se transforme en un liquide transparent rouge vif - " laque sang"En raison de la libération d'hémoglobine. La réaction d'hémolyse est utilisée comme indicateur dans la formulation d'une réaction diagnostique de fixation du complément (CSC), pour le titrage du complément et du sérum hémolytique.
^ Réaction d'hémolyse locale en gel - est l'une des variantes de la réaction d'hémolyse. Il vous permet de déterminer le nombre de cellules productrices d'anticorps dans les organes lymphoïdes.

Question numéro 27

(Sérums immuns. Titre agglutinant, sérum de test, titre de diagnostic. Diagnosticums, leurs types)
AVEC N.-É. manivelles imm à données, préparations à partir du sang des animaux et des humains, contenant des anticorps contre les agents pathogènes des maladies infectieuses ou des produits de leur activité vitale. Ils sont utilisés pour le sérodiagnostic, la séroprophylaxie et la sérothérapie. Dans le processus de préparation de S. et. le sérum sanguin des animaux ou des personnes (donneurs) immunisés avec certains antigènes ou de ceux qui ont été malades est soumis à divers traitements, selon le type et le but de S. et., traitement : purification, dans laquelle les substances de ballast sont éliminées et actives , principalement de la globuline, des fractions protéiques sont libérées; concentration.

Présentation de la personne S. et. provenant de sang animal peut s'accompagner de complications (maladie sérique, choc anaphylactique) ... S. concentré et. - gammaglobulines (plus correctement - les immunoglobulines, car elles stockent diverses fractions de globulines) du sang humain - ne provoquent pratiquement pas ces complications et sont excrétées plus lentement par le corps. En fonction du but, on distingue le traitement et prophylactique et diagnostique S. et. Traitement et prophylactique S. et. subdivisé en antitoxique - contre les déchets toxiques des microbes (par exemple, le tétanos, l'anti-diphtérie, l'anti-gangrène) et contre les effets de la morsure de serpents et d'insectes venimeux; antibactérien - affectant le micro-organisme (gamma globuline du charbon) et antiviral (par exemple, la rougeole, la rage, les gamma globulines de la grippe). Diagnostic S. et. sont préparés à l'aide d'antigènes différents selon la nature de la réaction pour laquelle ils sont utilisés. Ils sont utilisés pour identifier les agents pathogènes des maladies infectieuses, ainsi que dans des études expérimentales, etc.

. Détermination du titre en anticorps agglutinants. Des anticorps agglutinants contre l'agent pathogène apparaissent dans le sérum dans de nombreuses maladies infectieuses : salmonellose, fièvre paratyphoïde, brucellose, tularémie, rickettsiose et autres. Le titre de ces anticorps peut être déterminé dans la réaction d'agglutination de bactéries inactivées en ajoutant différentes dilutions de sérum. Le sérum pour la recherche est généralement collecté deux fois : pendant la période de pointe et pendant la période de récupération.

(après 10-21 jours). Une multiplication par quatre du titre d'anticorps est considérée comme significative sur le plan diagnostique.
Titre diagnostique

Titre Ab à un agent causal spécifique de la maladie dans la numération formule sanguine, détecté chez la plupart des personnes à une certaine phase de la maladie et non observé dans la majorité personnes en bonne santé... Confirme le diagnostic clinique de la maladie.
Les diagnosticums sont des suspensions de microbes tués, le plus souvent en solution physiologique, utilisées comme antigènes pour les réactions sérologiques.

L'avantage des diagnosticums par rapport à la culture vivante réside dans la stabilité de leurs propriétés agglutinables, la standardisation, la sécurité et la facilité de manipulation. L'utilisation de kits de diagnostic permet d'appliquer largement les méthodes sérologiques dans la pratique du travail de masse. Les diagnostics sont particulièrement importants dans les cas où le travail avec des bactéries ou des virus vivants est dangereux en raison de leur infectiosité élevée (par exemple, sbrucella, bactéries de la tularémie, virus de l'encéphalite japonaise transmis par les tiques, etc.).
Les diagnostics utilisés pour reconnaître les maladies infectieuses sont divisés en bactéries, rickettsies et virales. Avec leur aide dans le sérum des patients, il est possible de déterminer la présence d'anticorps contre genre défini microbe-pathogène.
Des différences plus subtiles d'anticorps dans le sérum visible sont établies à l'aide de monodiagnostics spécifiques. Donc pour la fièvre typhoïde pour déterminer les anticorps du groupe O et les anticorps de l'espèce H, les diagnostics O et H correspondants de la culture de la bactérie typhoïde 0-901 ou de la bactérie paratyphoïde n° 2 sont utilisés, qui ont un antigène O commun de la bactérie typhoïde; H-diagnosticum est une suspension de bactéries à mobilité prononcée.

Question numéro 28

(Luminescent, fond noir, contraste de phase, microscopie électronique)
La microscopie à luminescence est une étude optique de micro-objets colorés avec des colorants spéciaux (fluorochromes) qui émettent une lueur lorsqu'ils sont exposés aux rayons ultraviolets. Pour la microscopie à luminescence, des dispositifs optiques et des microscopes spéciaux sont utilisés, dont la partie principale est une source de rayons ultraviolets et un système de filtrage pour cela.
Microscopie sur sol sombre - vue Microscopie optique , dans lequel le contraste de l'image est augmenté en n'enregistrant que la lumière diffusée par l'échantillon à l'étude. Lors de l'utilisation de la méthode du champ sombre, même de légères différences dans le pouvoir de réfraction des zones de la préparation sont enregistrées. VMicroscopie optique Dans le champ sombre, les irrégularités de l'échantillon diffusent la lumière, et cette lumière diffusée forme une image de l'échantillon étudié. La microscopie à fond noir est bien adaptée à l'imagerie d'échantillons biologiques vivants et non colorés tels que des organismes unicellulaires aquatiques uniques.

La microscopie à fond noir peut être utilisée pour l'étude in vivo d'objets biologiques non colorés - les cellules isolées les plus simples, les cultures tissulaires, pour l'étude des structures subcellulaires de cellules vivantes non colorées
Microscopie à contraste de phase vous permet d'étudier des objets vivants et non peints en augmentant leur contraste. Lorsque la lumière traverse des objets colorés, l'amplitude de l'onde lumineuse change, et lors du passage à travers des objets non colorés, la phase de l'onde lumineuse se produit, qui est utilisée pour obtenir une image à contraste élevé en contraste de phase et en microscopie. Pour augmenter le contraste, les anneaux de phase sont recouverts d'un métal qui absorbe la lumière directe sans affecter le déphasage.
^ Microscopie électronique - Il s'agit d'une méthode d'étude de structures hors de vue au microscope optique et de dimensions inférieures au micron (de 1 micron à 1-5 Å).
Le fonctionnement d'un microscope électronique est basé sur l'utilisation d'un flux dirigé d'électrons, qui agit comme un faisceau lumineux dans un microscope optique, et des aimants (lentilles magnétiques) jouent le rôle de lentilles.
Du fait que différentes parties de l'objet étudié piègent les électrons de différentes manières, une image en noir et blanc de l'objet étudié est obtenue sur l'écran d'un microscope électronique, agrandie des dizaines et des centaines de milliers de fois.
Question #30

(Méthode microscopique pour le diagnostic des maladies infectieuses)
Méthode microscopique pour le diagnostic des maladies infectieusesvous permet d'identifier l'agent pathogène directement dans le matériel du patient, à l'aide d'un microscope optique. Sur la base de l'analyse des caractéristiques morphologiques du microbe, il est possible de déterminer avec précision son type. Le matériel de recherche peut être du sang, Moelle, frottis ou écouvillonnages des muqueuses de la bouche et du nez, urine, écoulement de l'urètre, selles, liquide céphalo-rachidien, salive, crachats, pus d'anthrax ou de furoncles, etc.

Une méthode microscopique pour le diagnostic des maladies infectieuses peut détecter le paludisme, la leishmaniose, la giardiase, les helminthiases et d'autres maladies infectieuses

Question numéro 31

(Culture (méthode bactériologique, virologique, mycologique pour le diagnostic des maladies infectieuses)
^ Recherche microbiologique (bactériologique ou virologique) La méthode bactériologique consiste à isoler une culture pure du pathogène (une population contenant des bactéries de la même espèce) et à identifier ce pathogène. En général, la méthode de recherche bactériologique est une étude bactériologique en plusieurs étapes qui dure 18 à 24 heures.Pour isoler une culture pure du pathogène, le matériel prélevé est inoculé. Le semis se fait, en règle générale, sur des milieux nutritifs solides, qui sont sélectionnés en fonction des propriétés de l'agent pathogène présumé.

Au deuxième stade de la méthode de recherche bactériologique, l'étude des colonies de bactéries qui se sont développées sur un milieu nutritif dense et proviennent d'une cellule bactérienne est réalisée. (la colonie est une culture pure du pathogène). L'examen microscopique et macroscopique des colonies en lumière réfléchie et transmise est réalisé : à l'oeil nu, sous un faible grossissement d'un microscope, à l'aide d'une loupe.

Des recherches bactériologiques sont également menées pour contrôler l'efficacité du traitement du patient, identifier les porteurs de bactéries convalescentes, source de l'agent causal dans le foyer épidémique, examiner les personnes appartenant aux groupes décrétés (travailleurs de l'industrie alimentaire, Restauration, pour enfants établissements préscolaires etc.).

Les virus sont beaucoup plus difficiles à cultiver et à identifier que les bactéries. Tout d'abord, cela est dû au fait que les virus ne se reproduisent qu'à l'intérieur des cellules vivantes. Par conséquent, de telles études sont réalisées dans des laboratoires virologiques spéciaux, utilisant, à la place des milieux nutritifs, des cultures de différentes cellules : embryons de poulet, cellules de tissus humains ou animaux.

Les études mycologiques sont moins fréquentes que les études bactériologiques, car le diagnostic microscopique des mycoses est assez fiable. Des études mycologiques sont réalisées dans le diagnostic de la candidose en déterminant l'augmentation du nombre de cellules de champignons de type levure du genre Candida, ainsi que les mycoses profondes.

Question numéro 32

(Méthode sérologique de diagnostic inf. Maladies)

1. Détection à des fins de diagnostic d'anticorps dans le sérum sanguin du sujet. Dans ce cas, des deux composants de la réaction (anticorps, antigène), le sérum sanguin est inconnu. La mise en place de la réaction est réalisée avec des antigènes connus (diagnosticums). Un résultat positif de la réaction indique la présence dans le sang d'anticorps homologues à l'antigène utilisé ; un résultat négatif indique l'absence d'un tel. Des résultats fiables sont obtenus dans l'étude de sérums sanguins "appariés" du patient, prélevés dans les premiers jours de la maladie et à différents intervalles depuis le début de la maladie. Dans ce cas, il est possible d'observer la dynamique de croissance des anticorps. À infections virales seule une multiplication par quatre ou plus du titre d'anticorps dans le second sérum a une valeur diagnostique.

2. Établissement du générique, de l'espèce et du type de microbe ou de virus. Dans ce cas, le composant inconnu de la réaction est l'antigène. A cette fin, des sérums immuns de diagnostic obtenus à partir d'animaux après vaccination avec des antigènes appropriés sont utilisés. Il s'agit de l'identification sérologique des micro-organismes.

Dans les maladies infectieuses, les tests sérologiques pour la détection d'anticorps spécifiques sont plus méthode accessible diagnostics de laboratoire que l'identification bactériologique de l'agent pathogène. Dans certains cas, les tests sérologiques sont la seule méthode de diagnostic des maladies infectieuses.
Méthodes de tests sérologiques

Question numéro 33

(Méthode allergique pour le diagnostic des maladies infectieuses)
La méthode allergique permet de diagnostiquer une maladie infectieuse à l'aide de tests allergiques - cutanés et intradermiques. La méthode révèle une hypersensibilité de type retardée qui se produit dans le corps dans de nombreuses maladies infectieuses. L'introduction d'un allergène cutané ou intradermique est utilisée pour diagnostiquer la brucellose, la tularémie, la toxoplasmose et d'autres maladies.
La méthode allergologique pour le diagnostic des maladies infectieuses est basée sur la détection de l'hypersensibilité (allergies, hypersensibilisation) lorsqu'elle est introduite dans le corps d'un enfant allergènes spécifiques... Les allergènes sont utilisés en petites quantités. Fondamentalement, ils sont injectés par voie intradermique ou appliqués sur la peau, moins souvent sur la membrane muqueuse de l'œil. Pour la mise en scène test intradermique utiliser une seringue à tuberculine ou à insuline. Avec une aiguille fine, coupée vers le haut, 0,1 ml de l'allergène est injecté dans la peau de la surface interne de l'avant-bras. Le médicament doit être injecté une fois que la section de l'aiguille a complètement pénétré la peau. Si la manipulation est effectuée correctement, une petite bulle blanchâtre et dense ressemblant à un zeste de citron se forme au site d'injection d'allergène. Il disparaît en 10-15 minutes. En cas de maladie (présence d'une allergie spécifique), après 24 à 72 heures au site d'injection de l'allergène, une réaction se produit sous forme d'infiltration avec rougeur.

Les réactions allergiques deviennent positives à partir du 8-10ème jour de la maladie. Le plus souvent, ils sont utilisés pour diagnostiquer la tuberculose (réaction de Mantoux), la brucellose (réaction de Burne), la tularémie, la toxoplasmose, l'ornithose.

Question numéro 34

(Méthode biologique)

méthode biologique - réalisée en isolant l'agent pathogène lors de l'infection d'animaux de laboratoire sensibles à cette maladie. Cette méthode est coûteuse, elle est donc utilisée de manière limitée ;

Question numéro 34

(Méthode de génétique moléculaire)
Méthodes de génétique moléculaire telles que la réaction en chaîne par polymérase (PCR), « BROAD-R

Actuellement, parmi les méthodes de recherche en génétique moléculaire, la PCR a trouvé l'utilisation la plus répandue dans le diagnostic des maladies infectieuses, qui, grâce à l'avènement de dispositifs abordables et faciles à utiliser, a conquis une place solide dans le travail quotidien des laboratoires. La PCR est basée sur un procédé artificiel de copie multiple (amplification) d'une séquence d'ADN spécifique, réalisée in vitro.

Question numéro 36

(Caractéristiques de l'agent causal de l'infection par le VIH. Principes du diagnostic microbiologique. Préparations pour un traitement spécifique)

Le virus de l'immunodéficience humaine provoque une infection par le VIH, entraînant le développement du syndrome d'immunodéficience acquise.

L'agent causal de l'infection par le VIH est un virus lymphotrope, un virus contenant de l'ARN. Une particule virale sphérique L'enveloppe est constituée d'une double couche lipidique imprégnée de glycoprotéines. La membrane lipidique provient de la membrane plasmique de la cellule hôte dans laquelle le virus se reproduit. La molécule de glycoprotéine est constituée de 2 sous-unités situées à la surface du virion et pénétrant sa membrane lipidique.

Le noyau du virus est en forme de cône et se compose de protéines de capside, d'un certain nombre de protéines matricielles et de protéines de protéase. Le génome forme deux brins d'ARN, pour la mise en œuvre du processus de reproduction, le VIH possède une transcriptase inverse, ou transcriptase inverse.

Le génome du virus est constitué de 3 gènes de structure majeurs et de 7 gènes régulateurs et fonctionnels. Les gènes fonctionnels remplissent des fonctions de régulation et assurent la mise en œuvre des processus de reproduction et la participation du virus au processus infectieux.

Le virus infecte principalement les lymphocytes T et B, certaines cellules de la série monocytaire (macrophages, leucocytes), les cellules du système nerveux.Il est sensible aux facteurs physiques et chimiques, meurt lorsqu'il est chauffé. Le virus peut persister longtemps à l'état séché, dans le sang séché.

Clinique: étonné système respiratoire(pneumonie, bronchite); Système nerveux central (abcès, méningite); Le tractus gastro-intestinal (diarrhée), des néoplasmes malins (tumeurs des organes internes) se produisent.

L'infection par le VIH se déroule en plusieurs étapes : 1) la période d'incubation, en moyenne de 2 à 4 semaines ; 2) scène manifestations primaires caractérisé d'abord par une fièvre aiguë, une diarrhée; le stade se termine par une phase asymptomatique et la persistance du virus, la restauration du bien-être, cependant, les anticorps anti-VIH sont déterminés dans le sang, 3) le stade des maladies secondaires, se manifestant par des lésions du système respiratoire et nerveux. L'infection par le VIH se termine avec le dernier, 4ème stade terminal - le SIDA.

Etudes virologiques et sérologiques inclure des méthodes pour la détermination des antigènes et des anticorps du VIH . Pour cela, ELISA, IB et PCR sont utilisés. Les anticorps anti-VIH apparaissent 2 à 4 semaines après l'infection et sont détectés à tous les stades du VIH.

Traitement:

l'utilisation d'inhibiteurs de la transcriptase inverse agissant dans les cellules activées. Les médicaments sont des dérivés de la thymidine - l'azidothymidine et le phosphazide.

Le traitement des personnes infectées par le VIH implique une surveillance constante de l'état immunitaire du corps, la prévention et le traitement des infections secondaires émergentes et le contrôle du développement des néoplasmes. Souvent, les personnes infectées par le VIH ont besoin d'une assistance psychologique et d'une adaptation sociale.

Question numéro 37

(Caractéristiques des agents responsables de l'hépatite virale B, C, delta. Principes du diagnostic microbiologique, médicaments pour le traitement de l'hépatite B)
Virus de l'hépatite B - famille Hepadnaviridae Morphologie: Un virus sphérique contenant de l'ADN. Se compose d'un noyau composé de 180 particules de protéines qui constituent l'antigène HBc central et d'une enveloppe contenant des lipides contenant l'antigène HBs de surface. À l'intérieur du noyau se trouvent l'ADN, l'enzyme ADN polymérase à activité révertase et la protéine terminale HBe-antigène. La résistance . Élevé aux facteurs l'environnement et désinfectants. Le virus est résistant à une exposition prolongée à un environnement acide, aux rayons UV, à l'alcool, au phénol.

Le développement d'un processus infectieux lorsqu'il pénètre dans la circulation sanguine. L'infection survient lors de manipulations parentérales (injections, interventions chirurgicales), d'une transfusion sanguine. Pathogenèse et tableau clinique de la maladie. La période d'incubation est de 3 à 6 mois. Le processus infectieux se produit après la pénétration du virus dans le sang. Le VHB du sang par endocytose pénètre dans l'hépatocyte. Après la pénétration du virus, le brin plus de l'ADN est complété par l'ADN polymérase en une structure à part entière. Image clinique caractérisé par des symptômes de lésions hépatiques, dans la plupart des cas accompagnés du développement de la jaunisse. Immunité. L'immunité humorale, représentée par des anticorps dirigés contre l'antigène HBs, protège les hépatocytes du virus en l'éliminant du sang.L'immunité cellulaire libère l'organisme des hépatocytes infectés grâce à la fonction cytolytique des T-killers. La transition d'une forme aiguë à une forme chronique est assurée par une violation de l'immunité des lymphocytes T.

Diagnostic microbiologique. La méthode sérologique et la PCR sont utilisées. Par ELISA et RNGA, des marqueurs de l'hépatite B sont déterminés dans le sang : antigènes et anticorps. La PCR détecte la présence d'ADN viral dans les biopsies de sang et de foie. L'hépatite aiguë est caractérisée par la détection de l'antigène HBs, de l'antigène HBe et des anticorps anti-HBc-IgM.

Traitement. L'utilisation d'interféron, d'interféronogènes: viferon, amiksine, inhibiteur de l'ADN polymérase, préparation d'adénineribonoside.

La prévention. Il existe des vaccins de première génération obtenus à partir du plasma sanguin de porteurs chroniques.Exclusion du virus des manipulations parentérales et des transfusions sanguines (utilisation de seringues jetables, contrôle de l'hépatite B par la présence d'antigène HBs dans le sang des donneurs de sang).

virus de l'hépatite ré - un virus défectueux qui n'a pas sa propre coquille. Le virion a une forme sphérique, qui se compose d'un ARN simple brin et d'un antigène HDc central. Pour la reproduction de ce virus, la participation d'un virus auxiliaire est nécessaire, dont le rôle est joué par le virus de l'hépatite B. Il existe trois génotypes du virus. Tous les génotypes appartiennent au même sérotype.

Le réservoir de BFD dans la nature est constitué de porteurs de VHB. L'infection par BFD est similaire à l'infection par le VHB.

réalisée par la méthode sérologique par dosage des anticorps anti-BFD par ELISA. La prévention: toutes ces mesures qui sont utilisées pour prévenir l'hépatite B. Les préparations d'interféron sont utilisées pour le traitement. Le vaccin contre l'hépatite B protège également contre l'hépatite D.
Morphologie. Un virus sphérique à ARN organisé de manière complexe. Le génome est représenté par un seul brin d'ARN "+" linéaire et présente une grande variabilité.

Structure antigénique. Le virus a une structure antigénique complexe. Les antigènes sont : 1. Les glycoprotéines de l'enveloppe 2. L'antigène central L'antigène HCc 3. Les protéines non structurelles.

La résistance. Sensible aux rayons UV, chauffant jusqu'à 50C.

Épidémiologie. Le plus souvent, le VHC est transmis par transfusion sanguine, par voie transplacentaire et sexuellement.

Clinique: On trouve souvent des formes anictériques, l'évolution de l'infection dans forme aiguë, dans 50 % des cas, le processus devient chronique avec le développement d'une cirrhose et d'un cancer primitif du foie.

Diagnostic microbiologique : La PCR et les tests sérologiques sont utilisés.

Question n°38

(Caractéristiques des agents responsables de la poliomyélite. Principes du diagnostic microbiologique. Préparations spéciales. Prévention et traitement)

Structure. Structurellement, les poliovirus sont des représentants typiques du genre Enterovirus. virus à ARN.
Morphologie: petits virus simplement organisés, de forme sphérique, composés d'ARN simple brin et d'une capside.

^ Propriétés antigéniques : Il existe 3 sérotypes au sein de l'espèce : 1, 2, 3, qui ne provoquent pas d'immunité croisée. Tous les sérotypes sont pathogènes pour l'homme.
Pathogenèse et clinique.La sensibilité humaine naturelle aux virus de la polio est élevée. Les portes d'entrée sont les muqueuses des voies respiratoires supérieures et du tube digestif. La reproduction primaire des virus se produit dans les ganglions lymphatiques de l'anneau pharyngé et intestin grêle... De système lymphatique les virus pénètrent dans la circulation sanguine, puis dans le système nerveux central, où ils affectent sélectivement les cellules des cornes antérieures de la moelle épinière ( motoneurones). La période d'incubation dure en moyenne 7 à 14 jours. Distinguer 3 formes cliniques poliomyélite : paralytique, méningée (sans paralysie), abortive ( forme légère). La maladie commence par une augmentation de la température corporelle, un malaise général, des maux de tête, des vomissements, des maux de gorge.

Immunité.Après la maladie transférée, l'immunité à vie demeure. L'immunité est déterminée par la présence d'anticorps neutralisants, parmi lesquels les anticorps sécrétoires locaux de la membrane muqueuse du pharynx et des intestins (immunité locale) jouent un rôle important. L'immunité naturelle passive persiste pendant 3 à 5 semaines après la naissance du bébé.

^ Diagnostic microbiologique ... Matériel pour la recherche - fèces, écoulement nasopharyngé, avec des morts- morceaux de cerveau et de moelle épinière, ganglions lymphatiques.
Les virus de la poliomyélite sont isolés en infectant des cultures cellulaires primaires et continues avec le matériel de test. La reproduction des virus est jugée par l'effet cytopathique. Le virus isolé est identifié à l'aide de sérums spécifiques de type dans une réaction de neutralisation en culture cellulaire. La différenciation intraspécifique des virus est importante, ce qui permet de distinguer souches pathogènesà partir de souches vaccinales sécrétées par des personnes immunisées avec un vaccin antipoliomyélitique vivant. Les différences entre les souches sont détectées par ELISA, la réaction de neutralisation de l'effet cytopathique du virus en culture cellulaire avec un immunsérum spécifique de la souche, ainsi que par qPCR.
Le sérodiagnostic est basé sur l'utilisation de sérums appariés de patients avec l'utilisation de souches virales de référence comme diagnosticum. La teneur en immunoglobulines sériques des classes IgG, IgA, IgM est déterminée par la méthode d'immunodiffusion radiale selon Mancini.
Traitement... Pathogénétique. L'utilisation d'immunoglobulines homologues pour prévenir le développement de formes paralytiques est limitée.
Tous les patients suspects de poliomyélite sont soumis à une hospitalisation urgente. Le traitement est effectué dans un service en boîte d'un hôpital infectieux pendant 3 à 4 semaines. Les principaux critères de transition de la maladie vers la période de récupération sont la disparition des symptômes d'intoxication, les symptômes de douleur, la normalisation du liquide céphalo-rachidien (liquide céphalo-rachidien)

La prévention... La principale mesure de prévention de la poliomyélite est la vaccination. Le premier vaccin inactivé pour la prophylaxie - a créé une immunité humorale générale, n'a pas formé de résistance locale des muqueuses du tractus gastro-intestinal, n'a pas fourni de protection fiable.

Vaccin oral en culture vivante de trois sérotypes de souches. Utilisé pour la vaccination de masse des enfants, il crée une immunité générale et locale stable.

Les réactions immunologiques peuvent être classées en quatre types, en fonction des types d'anticorps impliqués et modulant la réponse cellulaire, de la nature des antigènes et de la durée de la réaction. La réponse immunitaire est très complexe, avec des connexions autorégulatrices intrasystémiques à différents niveaux, bien que les réponses individuelles soient généralement classées comme fonctionnellement disjointes. Alors, la même chose Médicament(par exemple, la pénicilline) chez différents patients peut provoquer des réactions immunologiques du premier, du deuxième ou du troisième type. Une force excessive réponses ont été classées comme des réactions d'hypersensibilité car elles ont entraîné la destruction ou l'endommagement des tissus de l'hôte. Malgré cela, la classification de Gell et Coombs continue de servir de base pour comprendre la physiologie pathologique et le spectre des réponses immunologiques que le praticien voit en clinique. Table 2 montre les caractéristiques de quatre types de réactions immunologiques.
Type I. Les réactions anaphylactiques, également appelées réactions d'hypersensibilité de type immédiat, sont un exemple du premier type de réaction. La réaction est provoquée par un anticorps tel que l'IgE qui se fixe à la surface des mastocytes et des neutrophiles basophiles.

Tableau 2. Classification des réactions immunologiques et Coombis (1975)

Cytotoxique
réaction
Complexe immunitaire
Hypersensibilité de type retardé, immunité à médiation cellulaire
La réaction antigène - IgE se produit à la surface des mastocytes et des basophiles avec la libération de médiateurs
La réaction des IgG, IgM avec l'antigène se produit sur les membranes cellulaires, le complément est activé, les anaphylatoxines sont libérées, les cellules sont détruites
IgE et IgM réagissent avec l'antigène indépendamment de la fixation et sont déposés dans des microvaisseaux, le complément est activé, les cellules sont détruites
Non impliqué Les lymphocytes T spécialisés réagissent avec les antigènes, des lymphokines sont libérées
Anaphylaxie Cloques et érythème sur la peau
Asthme exogène
Réactions transfusionnelles
L'anémie hémolytique
Conflit rhésus
Maladie sérique G lomérulonéphrite
Dermatite de contact Réaction à la tuberculine

faire de la pêche; Si un antigène est attaché à un tel anticorps IgE attaché, alors l'activation et la dégranulation de la cellule conduiront à la libération de diverses substances pharmacologiquement actives qui provoquent l'anaphylaxie classique (chapitre 2). Cependant, toutes les réactions allergiques du premier type ne sont pas anaphylactiques. Le premier type comprend le tableau classique de l'allergie à l'introduction de la pénicilline, des réactions au venin d'abeille, de l'asthme allergique exogène et de la rhinite allergique. En général, toutes les réactions allergiques appartiennent au premier type.
Type II. Les réactions du second type sont appelées réactions cytotoxiques. Il s'agit d'anticorps de type IgG ou IgM, appelés anticorps cytotoxiques. Des réactions de ce type se produisent lorsque les anticorps se lient à des antigènes immunospécifiques. Les antigènes peuvent être des composants complexes des membranes cellulaires (antigènes des groupes sanguins) ou des composants moléculaires appelés haptènes qui adhèrent à la surface des globules rouges (par exemple, la pénicilline). L'interaction de l'antigène avec l'anticorps active le système du complément, qui à son tour lyse les cellules. Lors de l'activation du complément, des fragments de peptides sont libérés - des anaphylatoxines, qui provoquent des réactions systémiques. Les réactions du second type comprennent, par exemple, les réactions post-transfusionnelles basées sur l'incompatibilité sanguine dans le système ABO, la maladie hémolytique du nouveau-né, les anémies auto-immunes et hémolytiques et le syndrome de Goodpasture.
Type III. Le troisième type de réactions est connu sous le nom de réactions de complexes immuns. Les anticorps et les antigènes solubles circulants forment des complexes insolubles trop petits pour être éliminés par les macrophages du système réticulo-endothélial du foie et de la rate. Au lieu de cela, les complexes sont déposés dans le lit microcirculatoire. La réaction implique des anticorps de la classe IgG ou IgM. L'interaction de l'antigène avec les anticorps active le complément, à la suite duquel un processus inflammatoire se produit, localisé autour des complexes déposés. Les anaphylatoxines libérées provoquent également la migration d'autres cellules inflammatoires et la vascularite. Le mécanisme des lésions tissulaires est l'attraction médiée par le complément des leucocytes polymorphonucléaires vers le lieu de fixation des complexes immuns. Un exemple classique d'allergies
Le troisième type de réaction est la maladie dite sérique, qui survient après l'administration répétée de sérums immuns étrangers en cas de morsure de serpent et de botulisme ou de globuline antilymphocytaire. Des exemples de réactions du troisième type sont également la vascularite qui survient après l'administration de pénicilline et le lupus érythémateux disséminé d'origine médicamenteuse.
Type IV. Le quatrième type de réponse est connu sous le nom de réponses immunitaires à médiation cellulaire ou de réactions d'hypersensibilité de type retardé. Ces réactions sont indépendantes de la présence d'anticorps. Au lieu de produire des anticorps, des antigènes cellulaires ou des protéines intravasculaires activent des cellules lymphoïdes appelées lymphocytes thymodépendants. Les cellules T activées peuvent tuer directement les cellules étrangères ou produire des substances spéciales appelées lymphokines qui organisent la réponse immunitaire. Les lymphokines interviennent dans l'apparition de l'inflammation au site de l'antigène étranger. Ils régulent les actions des macrophages, des leucocytes polymorphonucléaires, des lymphocytes et d'autres cellules qui tuent les cellules et organismes étrangers. Le développement des réactions est lent ; ils n'apparaissent qu'après 18-24 heures, atteignent un maximum en 48 heures et disparaissent après 72-96 heures.
Des exemples de réponses immunitaires à médiation cellulaire sont le test cutané à la tuberculine, le rejet de greffe, l'allergie au sumac prenant racine.
Anomalies à médiation cellulaire fonction immunitaire provoquer une défaillance du système de surveillance immunitaire normal, ce qui fait que les patients courent un risque d'infection causée par des agents pathogènes opportunistes. Le syndrome d'immunodéficience acquise (SIDA) est une manifestation d'anomalies dans le système des réponses immunitaires à médiation cellulaire. Des sous-populations de lymphocytes T, appelées cellules suppressives cytotoxiques, subissent des modifications lorsqu'elles sont infectées par le virus de l'immunodéficience humaine (HTVL-III), entraînant le SIDA. Dans le contexte d'une telle immunodéficience, des infections causées par des agents pathogènes opportunistes (par exemple, Pneumocystis carinii) et des syndromes lymphoprolifératifs (par exemple, le sarcome de Kaposi) peuvent survenir.